TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

阿达木单抗治疗重度银屑病的临床疗效及对外周血Th1/Th2平衡和单核细胞p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:观察阿达木单抗治疗重度银屑病的临床疗效及对外周血Th1/Th2平衡和单核细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:选择解放军总医院第五医学中心2019年3月-2022年3月期间收治的118例重度银屑病患者,根据随机数字表法分为对照组(常规治疗,59例)和研究组(对照组的基础上结合阿达木单抗治疗,59例)。观察两组疗效、症状评分变化、外周血Th1/Th2平衡和单核细胞p38MAPK/NF-κB信号通路的变化,记录两组不良反应发生情况。结果:研究组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后的Th1、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)低于对照组,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、Th2高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后的p38MAPK、NF-κB蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。研究组治疗后的银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率组间比较,差异不显著(P>0.05)。结论:阿达木单抗治疗重度银屑病的疗效较好,可能与调节外周血Th1/Th2平衡和单核细胞p38MAPK/NF-κB信号通路有关,且不增加不良反应发生率,具有较好的安全性。

游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠分为运动组、CAP模型组、正常组,每组10只,注射消痔灵制备大鼠模型,运动组每天游泳运动1次,时间为50min,6d/周,共游泳运动4周,模型组和正常组不开展游泳运动;末次游泳运动结束后2h,股动脉取血处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠血清p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量,观察三个组别大鼠前列腺组织病理学改变。结果:4周游泳运动结束后,模型组和运动组大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量显著高于正常组(P<0.05),运动组大鼠血清内上述观察指标显著低于模型组(P<0.05);相关分析显示,CAP大鼠血清内IL-1β、IL-4、TNF-α水平与p38MAPK、NF-κB p65表达呈显著正相关(P<0.01),p38MAPK与NF-κB p65呈显著正相关(P<0.01);病理观察显示,与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织慢性炎症病变明显,与模型组比较,运动组大鼠前列腺血管扩张程度、炎细胞浸润数量及范围、管腔狭窄及间质水肿纤维化的情况均有所减轻。结论:游泳运动能够抑制CAP大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65表达,下调IL-1β、IL-4、TNF-α水平,对大鼠CAP炎症发挥缓解作用。

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法:将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸(Salicylic acid,SA)组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果:结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义(P>0.05)。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.001);三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组(均P<0.05);30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义(P>0.05)。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.05);2%SA组、30%SA组p38MAPK、NF-κB、IL-8低于夫西地酸组(P<0.05),2%SA组IL-8低于30%SA组(P<0.05);2%SA组与30%SA组p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组、30%SA组与夫西地酸组IL-1β均差异无统计学意义(均P>0.05);2%SA组IL-1β低于30%SA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:超分子水杨酸可通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路来发挥抗炎作用,且随着用药时间的延长疗效也在逐渐增加,并优于夫西地酸。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

p38MAPK/NF-κB信号通路与动脉粥样硬化关系的研究进展

有研究分析发现“炎症介导的内皮损伤学说”是近年研究动脉粥样硬化(AS)的焦点。p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子(NF)-κB信号通路在多种疾病的病理机制中发挥着重要作用,尤其是对AS的形成和进展起着有力的推动作用。本综述从炎症、凋亡、自噬及其他多个方面对p38 MAPK/NF-κB信号通路与AS的关系进行了总结。

PLA2G4C通过p38/MAPK信号通路介导线粒体自噬促进DLBCL进展的实验研究

目的研究磷脂酶A2ⅣC组(phospholipase A2 groupⅣC,PLA2G4C)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的作用及其可能调节机制。方法通过免疫印迹法(Western blot)检测PLA2G4C在DLBCL组织和细胞中的表达。构建PLA2G4C过表达或敲低表达的DLBCL细胞系,后用自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)或p38抑制剂SB203580处理细胞24h。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PLA2G4C转染效率;Western blot检测PLA2G4C蛋白、线粒体自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,MAP1 LC3Ⅱ/Ⅰ),Beclin1,p62,PTEN诱导激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)和Parkin],p38/丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)通路相关蛋白[磷酸化p38/MAPK(phosphorylated-p38/MAPK,p-p38/MAPK)]表达水平;CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力。进一步构建异种移植瘤裸鼠模型,观察PLA2G4C对裸鼠体内肿瘤生长及线粒体自噬的影响。结果DLBCL患者淋巴瘤组织中PLA2G4C蛋白表达显著高于反应性增生淋巴结组织(3.47±0.42 vs 1.01±0.02),差异具有统计学意义(t=-37.002,P<0.001);DLBCL细胞中PLA2G4C蛋白水平显著高于人淋巴母细胞样细胞系和B细胞淋巴瘤细胞系,差异具有统计学意义(F=73.771,P<0.001)。沉默PLA2G4C显著降低DLBCL细胞活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡(t=6.909~11.390);过表达PLA2G4C后结果与之相反(t=2.392~19.778),差异具有统计学意义(均P<0.001)。且过表达PLA2G4C显著促进线粒体自噬的发生,而CQ或SB203580处理则可显著逆转PLA2G4C过表达对DLBCL细胞生物学行为及线粒体自噬的作用。体内裸鼠实验显示,敲低PLA2G4C显著抑制移植瘤裸鼠体内肿瘤生长及线粒体自噬相关蛋白表达,差异具有统计学意义(t=13.816~25.926,均P<0.001)。结论PLA2G4C在DLBCL中表达显著上调,可能通过促进p38/MAPK信号通路介导的线粒体自噬,促进肿瘤细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与DLBCL的发生发展。

龙血素B通过P38MAPK信号通路调控MC3T3-E1成骨分化和骨形成的机制

目的:探究龙血素B对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)成骨分化和骨形成的影响以及其通过P38MAPK信号通路调控成骨分化和骨形成的机制。方法:培养MC3T3-E1细胞,加入不同浓度(0、15、30、60、90、120μmol/L)龙血素B,采用CCK8法和流式细胞术(FCM)检测不同时间(24h、48h、72h)MC3T3-E1细胞增殖能力和凋亡情况,确定龙血素B促MC3T3-E1细胞成骨最佳的药物浓度及作用时间。培养MC3T3-E1细胞并分为空白组(不作干预),龙血素B组(加入龙血素B共培养),龙血素B+阻断剂组(加入龙血素B和P38抑制剂SB203580共培养),进行干预实验;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒测定各组细胞ALP活性,qRT-PCR法检测各组细胞骨桥蛋白(OPN)基因、骨钙素(OCN)基因、骨唾液蛋白(BSP)基因表达水平,茜素红染色法观察各组细胞骨形成能力。结果:龙血素B可促进MC3T3-E1细胞增殖并抑制其凋亡,效果与浓度和干预时间相关,在90μmol/L浓度下干预48h促MC3T3-E1细胞生长作用最强;干预结束后第1、3、5天,龙血素B组细胞ALP活性较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞ALP活性较龙血素B组降低(P<0.05);龙血素B组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较龙血素B组降低(P<0.05);干预结束后第21天,龙血素B组细胞钙化结节区域面积较空白组增大,龙血素B+阻断剂组细胞钙化结节区域面积较龙血素B组减小(P<0.05)。结论:龙血素B可提高MC3T3-E1细胞增殖活性,并通过激活P38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化和骨形成。

益肾通癃汤通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌作用机制研究

目的探讨益肾通癃汤(YSTLD)通过上调miR-145-5p抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路抗前列腺癌的作用机制。方法借助miRNA芯片技术检测YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后的miRNA表达谱的变化,筛选miRNA芯片结果中差异显著的miRNA,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞,CCK8法及划痕实验检测miR-145-5p对前列腺癌PC-3细胞增殖与迁移作用;qRT-PCR法及Wstern blot法检测miR-145-5p对TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响;qRT-PCR及Wstern blot法检测YSTLD含药血清对miR-145-5p、TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路及凋亡相关基因caspase3、TNF-α、Bax、Bcl-2表达的影响。结果miRNA基因芯片检测发现YSTLD处理前列腺癌PC-3细胞后存在35种miRNA表达水平与对照组存在显著差异,其中以miR-145-5p差异最为显著,同时qRT-PCR验证发现YSTLD处理的PC-3细胞中的miR-145-5p水平显著高于DMSO对照组(P<0.05)。慢病毒转染miR-145-5p入前列腺癌PC-3细胞后,发现miR-145-5p能抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移。过表达miR-145-5p可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB及Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MAPK、p65 NF-κB的蛋白表达水平(P<0.05);YSTLD含药血清在干预前列腺癌PC-3细胞后,可上调前列腺癌PC-3细胞caspase3、TNF-α及Bax mRNA表达水平,下调p38 MAPK、p65 NF-κB、Bcl-2、TRAF1的mRNA表达水平(P<0.05),同时上调前列腺癌PC-3细胞caspase3蛋白表达水平,下调TLR4、p38 MARK、p65 NF-κB、TRAF1的蛋白表达水平(P<0.05)。结论YSTLD可通过上调miR-145-5p的表达水平,抑制TLR4/p38 MAPK/NF-κB信号通路促进前列腺癌PC-3细胞凋亡,这可能是YSTLD抗前列腺癌的重要机制。

黄连温胆汤对慢性间歇性低氧代谢综合征大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的观察黄连温胆汤对慢性间歇性低氧代谢综合征(MS)大鼠p38MAPK/NF-kB信号通路的影响。方法将70只大鼠随机分为造模组60只、对照组10只,利用15%果糖水和高脂饲料联合链尿佐菌素构建MS大鼠模型。造模结束后将造模成功的51只大鼠随机分为代谢综合征组(MS组)、慢性间歇性低氧MS组(CIH-MS组)、p38MAPK抑制剂SB203580组(INH组)、黄连温胆汤高剂量组(HLWDT-H组)、黄连温胆汤低剂量组(HLWDT-L组),分别进行相关的干预处理;对照组(CON组)不做任何处理。干预4周后取材,Western-blot法测定各组大鼠主动脉p38MAPK、IκB、p-p38MAPK、p-IκB蛋白表达情况。ELISA法检测各组大鼠血清IL-6、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1水平。结果与CON组相比,MS组和CIH-MS组p-p38MAPK、p-IκB显著增高(P<0.01),且CIH-MS组的表达量较MS组高(P<0.01);HLWD-H组、HLWD-L组、INH组p-p38MAPK、p-IκB较CIH-MS组比较表达量减少(P<0.01);HLWD-H组优于HLWDT-L组(P<0.05)。ELISA结果显示,CIH-MS组和MS组IL-6、TNF-α较CON组表达量增高(P<0.01),且CIH-MS组的表达量较MS组高(P<0.01);HLWD-H组、HLWT-L组、INH组IL-6、TNF-α较CIH-MS组比较表达量减少(P<0.01);HLWD-H组优于HLWD-L组(P<0.05)。结论CIH-MS可能通过活化p38MAPK/NF-κB通路造成血管内皮炎症损伤;黄连温胆汤可能通过抑制p38MAPK/NF-κB通路来减轻CIHMS引发的大鼠血管内皮炎症损伤。

ROS-NF-κB-p38MAPK通路探索榄香烯联合硼替佐米抗多发性骨髓瘤的机制研究

目的:基于ROS-NF-κB-p38MAPK信号通路探讨榄香烯(ELE)联合硼替佐米(BTZ)抗多发性骨髓瘤的作用机制。方法:CCK-8法检测细胞活性。SPF级裸鼠构建人源性骨髓瘤移植瘤模型,设立对照组(NC组)、BTZ组、ELE组及联合处理组。Tunel染色观察肿瘤组织凋亡,Western Blot检测Caspase-3、Bcl-2、NF-κB及p38 MAPK表达,流式细胞术检测人源性骨髓瘤U266细胞周期、凋亡及活性氧(ROS)表达。结果:当4.0μmol/L ELE联合50 nmol/L BTZ处理U266时,细胞活性均显著低于其他组。BTZ组、ELE组及联合组裸鼠肿瘤体积明显小于NC组(P<0.05),联合组体积最小;Tunel染色显示NC组凋亡水平低于BTZ组、ELE组及联合组(P<0.05),联合组最低;Western Blot结果显示BTZ组、ELE组及联合组Caspase-3及p38 MAPK表达显著高于NC组,Bcl-2及NF-κB表达显著低于NC组。BTZ组、ELE组及联合组细胞凋亡水平及细胞内ROS表达显著高于NC组(P<0.05)。结论:ELE可能通过调控ROS/NF-κB/p38 MAPK信号通路增强BTZ促骨髓瘤细胞凋亡,从而实现其抗肿瘤作用。

水飞蓟素通过共同抑制TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的研究

目的:探讨水飞蓟素通过共同抑制Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和肿瘤坏死因子α/活性氧簇/P38丝裂原活化蛋白激酶(TNF-α/ROS/P38MAPK)通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的机制。方法:选取健康SD大鼠50只,按随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量水飞蓟素组、中剂量水飞蓟素组、高剂量水飞蓟素组,每组10只。建模成功并治疗8周后,生化分析仪测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、24 h尿蛋白(UTP)水平;计算肾脏指数;试剂盒检测各组大鼠肾组织丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;RT-PCR检测各组大鼠TLR4,NF-κB,TNF-α和P38MAPK等mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,模型组体质量、T-AOC均降低(P<0.05),肾脏指数和FBG,Scr,BUN,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均升高(P<0.05)。低、中、高剂量水飞蓟素组体质量、T-AOC水平均低于对照组,且均高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量水飞蓟素组肾脏指数和FBG,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均高于对照组,且均低于模型组(P<0.05);低、中剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均高于对照组,且低于模型组(P<0.05);高剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均低于模型组(P<0.05),高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:水飞蓟素可调控TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路,可通过抑制其激活减轻氧化应激、减轻DN大鼠的肾脏损伤。

α1-抗胰蛋白酶联合骨髓间充质干细胞通过p38 MAPK/NF-κB信号通路调节糖尿病大鼠视网膜病变的研究

目的:探讨α1-抗胰蛋白酶联合骨髓间充质干细胞(BMSC)对糖尿病大鼠视网膜病变的影响及作用机制。方法:通过注射链脲佐菌素法构建糖尿病视网膜病变模型,30只造模成功的大鼠随机分为模型组、BMSC组、联合组(α1-抗胰蛋白酶联合BMSC),处理后4周,测定糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平,ELISA测定血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量,HE检测视网膜病理形态,TUNEL染色检测视网膜神经细胞凋亡情况,免疫组化染色检测视网膜组织CD45的表达水平,实时荧光定量PCR检测视网膜VEGF、HIF-1α及ANGⅡmRNA的表达,Western blot法检测视网膜组织中p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠血糖增加,胰岛素水平下降,血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高,视网膜出现明显病变,各层细胞排列杂乱,视网膜神经细胞凋亡较多,视网膜组织中CD45呈高表达,VEGF、HIF-1α、ANGⅡmRNA表达升高,p-p38、p-p65、p-IκBα蛋白表达升高(P均<0.05)。与模型组比较,BMSC组和联合组血糖有所下降,胰岛素水平增加,血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量下降,视网膜病变得以改善,视网膜神经细胞凋亡减少,视网膜组织CD45表达降低,VEGF、HIF-1α、ANGⅡmRNA表达下降,p-p38、p-p65、p-IκBα蛋白表达下降,且与BMSC组比较,联合组的作用效果更明显(P均<0.05)。结论:α1-抗胰蛋白酶联合BMSC移植可改善糖尿病大鼠的视网膜病变程度,机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘大鼠的机制

目的探讨麻黄-苦杏仁药对对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响,以及对p38MAPK/NF-κB信号通路的调控作用。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组及麻黄-苦杏仁药对A组(9 g∶6 g)、B组(12 g∶6 g)、C组(9 g∶9 g),每组8只。采用4%卵清蛋白(OVA)致敏复制哮喘大鼠模型,持续造模4周后开始给药,麻黄-苦杏仁药对组(5 g·kg^(-1))、地塞米松组(1 mg·kg^(-1))按相应剂量灌胃给药,正常组及模型组给予等剂量生理盐水,每天1次,持续14 d。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL^(-1)3和γ-干扰素(IFN-γ)水平;采用Diff-Quick染色后对BALF进行炎性细胞分类计数;采用免疫组化法检测肺组织p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白表达;Western Blot法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65蛋白表达;qRT-PCR法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著升高(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著升高(P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,麻黄-苦杏仁药对组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著降低(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著降低(P<0.01),IFN-γ水平显著升高(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论麻黄-苦杏仁药对可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,减少Th2细胞因子生成,减轻哮喘大鼠气道及周围的炎性反应和高气道反应,从而发挥控制哮喘的作用。

姜黄素通过p38MAPK/NF-κB信号通路对膝关节骨性关节炎的作用机制分析

目的分析姜黄素通过p38-丝裂原活化的磷酸激酶(p38MAPK)/核因子κB(NF-κB)信号通路对膝关节骨性关节炎的作用机制。方法采用前瞻性研究,随机抽样法选取2018年1月至2019年12月期间在邯郸市中心医院进行全膝关节置换术的35例膝关节骨性关节炎患者作为研究对象,取截掉的股骨髁和胫骨平台的软骨组织,将其分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。并选取同期因外伤在邯郸市中心医院骨关节外科或血管外科行股骨截肢的47例患者作为对照组,取其膝关节健康软骨。模型组与对照组在不含姜黄素的培养基内传代2代细胞,低剂量组、中剂量组和高剂量组的软骨组织细胞分别在含有100、150、200 mg/kg姜黄素的培养基内传代2代细胞。对各组腺苷酸环化酶相关蛋白1(CAP1)、p38MAPK、p65-NF-κB及其磷酸化表达情况进行比较,并对各组白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达情况进行比较。结果与对照组相比,模型组的CAP1、p38MAPK、p65-NF-κB及其磷酸化表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组的CAP1、p38MAPK、p65-NF-κB及其磷酸化表达水平均降低,且随着姜黄素剂量的升高而降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表达水平均显著降低,且随着姜黄素剂量的升高而降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过激活p38MAPK/NF-κB信号通路姜黄素可调节膝关节骨性关节炎的炎症反应过程,且呈现明显的剂量反应。

龙鳖胶囊对骨关节炎软骨细胞p38MAPK信号通路及NF-κB p65的影响

背景:前期研究发现,龙鳖胶囊能消除膝骨关节炎大鼠膝关节肿胀,降低血清炎性细胞因子白细胞介素平和升高抑炎细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素6水10水平。目的:观察龙鳖胶囊对膝骨关节炎软骨细胞p38MAPK信号通路及NF-κB p65的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为5组,每组12只,模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组建立右侧膝骨关节炎大鼠模型,造模后第3天,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃给予0.312 5,0.625,0.937 5 g/kg龙鳖胶囊,2次/d,连续4周;对照组不造模。灌胃2,4周后,取膝关节制成组织切片,免疫组织化学SP法检测软骨组织中MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κB p65及其磷酸化产物P-MEK-3/6、P-p38、P-ATF2、P-NF-κB p65的表达。结果与结论:给药2,4周后,各组细胞均有MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κB p65及其磷酸化产物PMEK-3/6、P-p38、P-ATF2、P-NF-κB p65阳性表达,模型组MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κB p65及其磷酸化产物P-MEK-3/6、P-p38、P-ATF2、P-NF-κB p65阳性细胞百分比均高于对照组(P<0.01),低、中、高剂量组上述指标阳性细胞百分比均低于模型组(P<0.05)。结果表明,龙鳖胶囊可抑制MEK-3/6、p38、ATF2、NF-κB p65及其磷酸化产物P-MEK-3/6、P-p38、P-ATF2、P-NF-κB p65的过表达,抑制骨关节炎软骨细胞中p38MAPK和NF-κB信号通路活化,发挥减改善软骨退变、保护软骨的作用。

罗布麻总黄酮干预p38MAPK/NF-κB信号通路治疗大鼠动脉粥样硬化作用及机制研究

目的:观察罗布麻叶总黄酮对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉中p38MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,探讨罗布麻叶总黄酮干预AS的作用及其可能的作用机制。方法:72只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组及罗布麻叶总黄酮低、中、高剂量组。除正常对照组外,其他各组连续3天注射维生素D3后喂饲高脂饲料9周,进行造模,造模结束后各组分别给药4周。实验结束后,取大鼠胸主动脉,常规制备石蜡标本,HE染色,光镜下观察大鼠胸主动脉的病变情况;分光光度法检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;Western-bloting法检测p38MAPK、p-p38MAPK、NF-κB、IL-6蛋白的表达。结果:罗布麻叶总黄酮中、高剂量组能显著改善胸主动脉壁病变,减少胸主动脉内皮下泡沫细胞及脂质空泡,并可降低大鼠血清中LDL-C、TC、TG水平以及hs-CRP的含量,提高HDL-C;同时发现罗布麻叶总黄酮中、高剂量组可以抑制p38MAPK的磷酸化,降低NF-κB、IL-6蛋白的表达。结论:罗布麻叶总黄酮对大鼠动脉粥样硬化具有明显的治疗作用,其抗AS的作用可能是通过干预p38MAPK/NF-κb信号通路下调相关蛋白来实现的。

通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的观察通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清和滑膜组织中炎性因子表达及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法48只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、通痹胶囊不同剂量(375、750、1500mg·kg-1)组及雷公藤多苷片(10 mg·kg^-1)组,除正常组外,其余各组均于右后足跖部注射弗氏完全佐剂造模。造模第8日,各组给予相应药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。对大鼠关节炎指数进行监测,足容积法测量致炎侧足肿胀度;灌胃结束后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清及滑膜中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠滑膜组织中p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα蛋白表达的。结果与正常组相比,造模后大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α含量明显升高,p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα表达显著增多(P<0.01);与模型组相比,通痹胶囊能够有效降低大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α的含量,并抑制滑膜组织中p38MAPK、NF-κB及IκBα的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论通痹胶囊具有明显的抗炎作用,其治疗类风湿关节炎的作用机制之一可能为抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的激活。

夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)小鼠腰髓中p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响研究

目的探究p38 MAPK/NF-κB信号通路在夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化-超氧化物歧化酶1^(G93A)(ALS—SOD1^(G93A))转基因小鼠的作用机制。方法选取45只ALS-SOD1^(G93A)转基因阳性雌性小鼠为研究对象,随机分为模型组、手针组、电针组,每组各15只,另取15只同窝野生型雌性小鼠为对照组,小鼠60 d龄时开始实验:对照组、模型组每周给予捆绑固定20 min 2次,手针组给与普通针、电针组采用全能脉冲电疗仪给与电针治疗,每周2次刺激双侧L_(1～2)、L_(5～6)夹脊穴,共治疗4周。120 d取小鼠腰膨大L_(1～6)腰髓,采用尼氏染色、透射电镜观察进行形态学检测,采用免疫组织化学法检测p38、p-p38表达,免疫荧光检测p65核移位,蛋白免疫印迹法检测全称肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、核因子-κB抑制因子(IκB-α)、p38、p65、p-IκB-α、p-p38、p-p65的表达,实时定量PCR(qPCR)检测TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果模型组神经元数目明显减少(P<0.05),手针组与电针组形态学均有较大改善、电针组改善更佳。模型组炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA水平上升,与模型组及手针组比较,电针组TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA明显降低(P<0.05)。模型组检出大量p38、p-p38阳性细胞分布于脊髓灰质前角,与模型组比较,手针组与电针组p-p38表达减弱,电针组减弱程度更大;与对照组比较,模型组p-IκB-α、p-p65含量升高(P<0.05);与模型组相比,手针组与电针组p-IκB-α、p-p65含量下降(P<0.05)。手针组与电针组均抑制p65入核过程,其中电针组抑制更加明显。结论夹脊电针通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,对腰髓前角运动神经元产生保护作用,缓解ALS病情的进展,为夹脊电针临床推广提供了理论依据。

益心附葶饮对主动脉缩窄大鼠心肌纤维化及p38MAPK/NF-κB p65信号通路的影响

目的:研究益心附葶饮对腹主动脉缩窄致心力衰竭大鼠心肌纤维化的改善作用及机制。方法:采用腹主动脉缩窄法构建心衰大鼠模型,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组和中药组,另设15只穿线不结扎的假手术组。中药组给予益心附葶饮灌胃3.5 g/(kg•d),假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。喂养8周后取材,采用Masson染色法测定心肌组织胶原蛋白分布及含量。Western blot法检测心肌组织中1型胶原蛋白(Collagen 1)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen 3)、p38MAPK、NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:益心附葶饮可降低心衰大鼠心肌纤维组织表达面积。与假手术组比较,模型组大鼠心脏组织Collagen 1、Collagen 3、p38MAPK、NF-κB p65蛋白表达升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。中药组Collagen 1、Collagen 3、NF-κB p65蛋白表达低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。中药组与模型组p38MAPK蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益心附葶饮通过下调Collagen 1、Collagen 3蛋白表达和抑制NF-κB p65信号通路介导的炎症反应,抑制压力性心力衰竭大鼠心肌纤维化。