烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1对视网膜发育过程中中央碳代谢稳定性的作用

目的:探讨烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1(NMNAT1)在视网膜发育过程中对于中央碳代谢的作用。方法:构建NMNAT1条件性敲除小鼠及其同窝对照小鼠模型,使用PCR法进行基因型鉴定。在出生后第4天,取NMNAT1敲除小鼠和同窝对照小鼠的视网膜进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)靶向代谢组学检测和全转录组测序。代谢物提取物通过Shimadzu LC Nexera X2 UHPLC与QTRAP 5500 LC-MS/MS联用进行分析,并使用MultiQuant 3.0.3软件对提取的MRM峰进行积分。在NovaSeq6000平台上利用Illumina TruSeq Stranded mRNA Library Prep Kit进行全转录组测序,每个样本的总读数深度为100 M。使用FastQC验证读取质量,并使用BBTools包的Bbduk实用程序修剪引物。使用HISAT22.1.0进行读取比对,使用StringTie 1.3.6组装和量化转录本。使用DESeq2 R包鉴定差异表达的基因。结果:与对照小鼠相比,NMNAT1敲除小鼠视网膜中共有39种代谢物的含量发生了显著改变(P<0.05);通过代谢物集富集分析发现多种不同生化途径受到了不同程度的破坏,主要包括氨基酸代谢、糖酵解/糖异生、烟酸和烟酰胺代谢以及嘌呤代谢。其中,NMNAT1敲除组小鼠视网膜总NMNAT1水平和烟酸腺嘌呤二核苷酸(NaAD)水平降低约40%(P<0.05);烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)和烟酸单核苷酸(NAM)的水平分别降低了约25%和55%(P<0.05);线粒体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)的水平略有降低(P>0.05);上游糖酵解代谢物葡萄糖、葡萄糖6磷酸(G6P)和1,6-二磷酸果糖(F16bP)的水平大幅升高(P<0.05);磷酸二羟基丙酮(DHAP)和葡萄糖3磷酸(G3P)的水平大幅降低(P<0.05);a-KG和琥珀酸的水平降低了约30%(P<0.05);磷酸肌酸和肌酸的水平略有降低(P>0.5);赤藓糖醇(Erythritol)水平显著降低(P<0.05)。结论:NMNAT1缺失会导致视网膜中严重的特异性代谢缺陷,中央碳、嘌呤核苷酸和氨基酸代谢均受到损害,可能是导致严重视网膜变性的原因。

人重组烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶2的表达、纯化及酶活力测定

目的:通过大肠杆菌体系诱导表达烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶2(NMNAT2),并测定纯化的重组NMNAT2酶蛋白催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物合成的酶比活力。方法:在大肠杆菌BL21(DE3)体系优化条件下诱导表达NMNAT2重组蛋白,利用Ni-NTA Superflow Kit进行目的蛋白的纯化,Western blot法进行鉴定,并通过酶联荧光法测定其催化产物NAD,测定其酶活性。结果:人重组质粒NMNAT2-p ET-24a可以在大肠杆菌BL21(DE3)体系中诱导表达。诱导条件为:LB培养液(卡那霉素,15μg/m L)中37℃,IPTG(1.0 m M)诱导表达4 h。纯化获得的NMNAT2重组蛋白具有较高的酶活性。结论:NMNAT2-p ET-24a可在大肠杆菌BL21(DE3)体系中稳定表达,优化条件下可获得较高活性的纯化NMNAT2重组蛋白,可用于神经保护功能及酶蛋白的活性调控研究。

急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶2mRNA表达及阿托伐他汀的作用

为检测急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞中环氧合酶 2表达及阿托伐他汀的影响 ,探讨环氧合酶 2在动脉粥样硬化中的作用和他汀类药物的抗炎机制。采用逆转录聚合酶链反应半定量的方法 ,观察 4 2例急性冠状动脉综合征患者和 18例健康自愿者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 ,同时观察急性冠状动脉综合征组单核细胞在不同浓度阿托伐他汀 (0～ 10 μmol L)干预 2 4h后环氧合酶 2表达的变化。结果发现 ,急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞中环氧合酶 2的表达明显高于健康对照组 (1.6 4± 0 .2 5比 0 .5 9± 0 .2 1,P <0 .0 5 )。阿托伐他汀在体外明显抑制急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 (P <0 .0 5 ) ,且呈浓度依赖性。结果提示 ,环氧合酶 2在动脉粥样硬化炎症中起作用 ,阿托伐他汀明显降低急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞环氧合酶 2的表达 ,环氧合酶 2可能是阿托伐他汀发挥降脂外抗炎作用的靶点之一。

烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶的表达、纯化及活性测定

目的获得具有较高纯度和酶活性的烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶-1(Nmnat1),为进一步对其功能及调控的研究奠定基础。方法在大肠杆菌中进行Nmnat1表达的条件优化,采用Ni-NTA亲和层析法对目的蛋白进行纯化,并通过酶联荧光法测定酶活性。结果 BL21-CondonPlus (DE3)-RIL为适宜的宿主菌,优化的蛋白表达条件为:在2×YT培养基(37μg/ml氯霉素和75μg/ml卡那霉素)中于28℃、0.5mmol/LIPTG(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导8h。纯化获得的Nmnat1蛋白具有较高的纯度和酶活性。结论适宜的宿主菌对Nmnat1蛋白的高效表达至关重要,进行表达条件优化后可获得大量具有较高纯度和酶活性的目的蛋白。

单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ条件敲除小鼠的繁殖和基因型鉴定

目的构建和鉴定单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)条件性基因敲除小鼠。方法将引进的纯合子PPARγ^(-loxp)小鼠和单核细胞特异性表达cre重组酶的Cx3cr1^(cre)小鼠进行杂交,得到F1代,用RT-PCR方法鉴定其基因型。将F1代进行自交产生F2代,鉴定基因型,筛选实验所需的PPARγ条件性基因敲除小鼠(实验组,PPARγ-ko)及对照组小鼠(对照组,PPARγ-wt),利用免疫荧光及Western blotting方法鉴定敲除效果。结果筛选出基因型为PPARγ^(loxp/loxp) Cx3cr1^(cre/-)和PPARγ^(loxp/loxp) Cx3cr1^(cre/cre)的小鼠即为本实验所要构建的单核细胞PPARγ条件基因敲除小鼠,基因型为PPARγ^(loxp/loxp) Cx3cr1^(-/-)小鼠为实验对照组小鼠。结论成功获得单核细胞PPARγ条件性基因敲除小鼠,为单核细胞上PPARγ功能的研究提供小鼠模型。

非诺贝特对过氧化物酶体增殖物激活受体α和单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法体外培养HUVEC株,第3~5代用于实验。实验分3组:1空白对照组;2ox-LDL组(100 mg/L);3非诺贝特组:先将非诺贝特10、50、100μmol/L分别作用于内皮细胞24 h,然后加ox-LDL(100 mg/L)作用于细胞24 h。采用细胞酶联免疫吸附法分析检测细胞培养上清液PPARα、MCP-1含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果。结果与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL促进内皮细胞增殖(P<O.01),非诺贝特呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P<0.01)。100 mg/L ox-LDL促进MCP-1分泌。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC分泌PPARα(P<0.01),促进效应呈浓度依赖性。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显抑制ox-LDL诱导的HUVEC分泌MCP-1(P<0.01),抑制效应呈浓度依赖性。结论非诺贝特呈剂量依赖性促进ox-LDL诱导的人HUVEC分泌PPARα,抑制人HUVEC分泌MCP-1,抑制内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥贝特类调脂外抗动脉粥样硬化作用。

烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因对体外原代培养神经元轴突发育的影响

目的评价烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶(NMNAT)1基因对体外原代培养小鼠神经元轴突发育的影响。方法在体外建立了原代培养小鼠神经元模型,并通过RNA干扰和基因过表达的方法控制NMNAT1基因的表达水平。应用电穿孔转染,上调或下调NMNAT1基因的表达水平,应用免疫细胞化学方法研究神经元轴突形态。在所有的功能试验中,把一种高效的特定的非竞争性NMNAT1抑制剂FK-866(CAS658084-64-1)用作药物学对照。结果在体外原代培养的皮层神经元中下调NMNAT1基因能减缓轴突生长,同时引起轴突分支的减少。结论 NMNAT1基因在原代培养的皮层神经元形态发生中起显著作用,表明NMNAT1基因的丢失可能会引起中枢神经系统神经元变性。

慢性粒细胞白血病特异性单、双及三单位核酶载体的构建

本文拟针对在慢性粒细胞白血病发病中起关键作用的ｂｃｒａｂｌ 融合基因， 构建特异性的系列核酶载体。为此，我们针对ｂｃｒａｂｌ 融合位点设计、合成了３ 个相邻的锤头状核酶。通过基因重组将３ 个单核酶按顺序定向克隆入改建的ｐＧＥＭ３ｚｆ 载体中，构建了ｂｃｒａｂｌ 单核酶、双核酶及三核酶体外转录载体， 并在此基础上将三单位核酶克隆入ｐ ＤｏＲｎｅｏ 载体中构建三核酶逆转录病毒载体。此外， 通过ＰＣＲ 方法， 扩增了ｂｃｒａｂｌ 融合位点附近约３７６ｂｐ 的序列，成功地构建了ｂｃｒａｂｌ 融合基因体外转录载体。本文构建的ｂｃｒａｂｌ 特异性系列载体，为今后遴选特异、高效的核酶打下了基础，并为将核酶用于自体骨髓移植的体外骨髓净化创造了条件。

5'—核苷酸酶—碱性磷酸酶双染色法在淋巴管研究中的应用

利用5’-Nase-ALPase(5’-核苷酸酶-碱性磷酸酶)的双酶组物理化学法对淋巴管进行鉴定,光镜下的观测结果发现该双染法可在同一个切片中将淋巴管染成褐色,而毛细血管则染成了金色。这样,就能很明显地把淋巴管和血管结构区分出来,尤其是能显示HE染色所无法表现的毛细淋巴管和毛细血管结构,对在形态学上探讨白淋巴管和微血管结构和其转移机理,提出了可靠的组织化学方案。因此,笔者对5'—核苷酸酶—碱性磷酸酶双染色法在淋巴管鉴定中的应用展开探讨。

福辛普利、卡托普利和缬沙坦对人血单核细胞中核因子κB的影响

为探讨福辛普利、卡托普利和缬沙坦对人血单核细胞受细菌脂多糖刺激时核转录因子c Rel p6 5活化的影响。从健康产妇脐带血分离出单核细胞 ,与脂多糖及脂多糖加不同药物培养 ,按不同时间点收集细胞 ,抽提蛋白。用WesternBiotting技术检测p5 0和p6 5在胞质和胞核中的变化。结果发现 ,福辛普利、卡托普利和缬沙坦可减弱IκBα的降解 ,抑制p6 5由胞浆转至核内。结果提示 ,部分血管紧张素转化酶抑制剂及血管紧张素受体拮抗剂对在受脂多糖刺激时人血单核细胞转录因子的活化可产生抑制作用。

丁苯酞对RSC96细胞糖尿病周围神经病变模型的保护作用及其分子机制研究

目的研究丁苯酞(NBP)对大鼠施万细胞(RSC96)糖尿病周围神经病变(DPN)模型的保护作用及其分子机制。方法分别用不同浓度的H_(2)O_(2)作用于RSC96细胞,搭建DPN细胞模型;用不同浓度的NBP作用于RSC96细胞,确定干预组的药物浓度。DPN模型及干预组药物浓度确认后实验共分为四组(组1:空白对照组;组2:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)DPN模型组;组3:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)+2μmol/L丁苯酞处理组;组4:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)+10μmol/L丁苯酞处理组)。用Cell Counting Kit-8测定各处理组RSC96细胞的增殖活性;2,7-二氯荧光素二乙酸酯荧光探针(DCFH-DA)染色后通过荧光倒置显微镜观察活性氧(ROS)荧光强度;采用蛋白印迹(Western blot)检测各处理组细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、单核细胞血红素氧合-1(HO-1)、醌氧化还原酶-1(NQO1)的分子表达情况;激光共聚焦观察各处理组表达的Nrf2分子由细胞质转移进入细胞核的情况。结果组1、组2、组3和组4细胞的增殖活性均值分别为100.0%、56.2%、73.1%、75.3%,组3与组4比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);观察各组ROS荧光强度:与组1比较,组2、组3和组4的荧光强度增强;25μmol/L浓度以下的NBP没有明显的细胞毒性;与组1比较,组2、组3和组4的Total Nrf2、细胞核内Nrf2、HO-1、NQO1的表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05);与组1比较,组2、组3、组4由细胞质转移至细胞核内的Nrf2增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞通过上调Nrf2的表达对H_(2)O_(2)诱导的RSC96的糖尿病周围神经病变细胞模型发挥神经保护作用。

血管紧张素转化酶2基因多态性与原发性高血压的关系

目的研究血管紧张素转化酶2基因（ACE2-G8790A）单核苷酸多态性（SNP）与原发性高血压的关系。方法用PCR—RFLP及电泳分析法进行基因分型，SPSS软件分析各等位基因与原发性高血压的相关性。结果高血压患者与对照组的基因型、等位基因频率比较均有显著性差异（P=0．020，0．001）。高血压组GG、GA和AA基因型在女性中的分布频率分别为29．2％、42．4％和28．4％，女性对照组相应基因型的频率分别为29．3％、56．6％和14．1％，两组比较有显著性差异；G，A等位基因频率在高血压组分别为53．0％和47．0％，对照组相应的等位基因频率为63．3％，36．7％，两组比较差异有显著性（P〈0．01）。结论ACE2-G8790A基因多态性与原发性高血压相关。

阿托伐他汀增加单核细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ表达改善炎症反应

目的 研究阿托伐他汀对人外周血单核细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)及其单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)和金属蛋白酶 9(MMP 9)的影响。方法 分离健康人外周血单核细胞并加入不同浓度的阿托伐他汀 (0 1～ 10 μmol/L)共同培养 2 4h ,采用RT PCR检测PPARγ和MCP 1的表达。并采用定量夹心酶免疫吸附测定法检测单核细胞培养上清液中MMP 9和MCP 1的浓度。结果 阿托伐他汀能明显增加人外周血单核细胞PPARγ的表达 ,1、10 μmol/L阿托伐他汀使PPARγ的表达明显增加 (P <0 0 5 ) ,并能明显抑制人外周血单核细胞MCP 1的表达和分泌。与基础状态相比 ,阿托伐他汀降低单核细胞培养上清MCP 1和MMP 9浓度分别达 73%和 6 2 % (P <0 0 5 ) ,呈浓度依赖性。结论 阿托伐他汀能够抑制人外周血单核细胞MCP 1的表达和分泌以及MMP 9的分泌 ,说明它具有抗炎作用 ,其抗炎作用可能与其改善PPARγ表达有关。

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂对人外周髓样树突状细胞趋化、迁移和吞噬功能的影响研究

目的探讨次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂（Inosine monophosphate dehydrogenase inhibitor，IMPDHI）对人外周髓样树突状细胞（Myeloid dendritic cells，MDC）趋化、迁移、吞噬功能的影响。方法新鲜外周血单个核细胞来源于健康志愿者（N=15）。实验组加入不同浓度IMPDHI，流式细胞仪分析MDC表面趋化因子受体表达水平。于transwell小室实验中，加入不同的化学因子，经Lin-1／CD11c／HLA—DR染色后，流式细胞仪计数，以迁移细胞的百分比表示迁移能力。分离树突状细胞抗原-1^＋（Blood dendritic cell antigen-1，BDCA—1^＋）细胞后，以甘露糖受体作为介导，流式细胞仪测定BDCA1^＋细胞中FITC标记的右旋糖酐的荧光值表示吞噬能力。结果（1）趋化、迁移功能：与对照组相比，实验组MDC的趋化因子受体CCR1表达水平明显升高（17．02土3．23～30．63±9．13，P〈0．05）；CCR3表达水平（10．26±2．25～5．81±0．97，P〈0．05）和CCR7表达水平（9．56±1．84～5．18±0．60，P〈0．05）明显下降。实验组MDC对炎性化学因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL7、CXCL12的趋化能力明显增强（P〈0．05），对淋巴器官性化学因子CCL19、CCL20、CCL21、CXCL11的趋化能力无明显改变（P〉0．05）。（2）吞噬功能：实验组MDC的吞噬能力明显强于对照组（P〈0．05）。结论IMPDHI增强MDC吞噬抗原的能力，通过提高MDC炎性化学因子受体的表达水平和增强其对炎性化学因子的趋化能力，抑制MDC对淋巴器官的趋化、迁移能力。

过量表达烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶对大肠杆菌NZN111产丁二酸的影响

大肠杆菌NZN111是敲除了乳酸脱氢酶的编码基因(ldhA)和丙酮酸-甲酸裂解酶的编码基因(pflB)的发酵生产丁二酸的潜力菌株。厌氧条件下NADH不能及时再生为NAD+,引起胞内辅酶NAD(H)的不平衡,最终导致厌氧条件下菌株不能利用葡萄糖生长代谢。nadD为催化NAD(H)合成途径中烟酸单核苷酸(NaMN)生成烟酸腺嘌呤二核苷酸(NaAD)的烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶(Nicotinic acid mononucleotide adenylyltransferase,NAMNAT)的编码基因,通过过量表达nadD基因能够提高NAD(H)总量与维持合适的NADH/NAD+比例。文中构建了重组菌E.coli NZN111/pTrc99a-nadD,在厌氧摇瓶发酵过程中通过添加终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达,重组菌E.coli NZN111/pTrc99a-nadD中NAD+和NADH的浓度分别比宿主菌E.coli NZN111提高了3.21倍和1.67倍,NAD(H)总量提高了2.63倍,NADH/NAD+从0.64降低为0.41,使重组菌株恢复了厌氧条件下生长和代谢葡萄糖的能力。重组菌与对照菌相比,72 h内可以消耗14.0 g/L的葡萄糖产6.23 g/L的丁二酸,丁二酸产量增加了19倍。

河北汉族HLA-A基因多态性及其分布特征

目的了解河北省汉族人群人类白细胞抗原HLA-A等位基因多态性及分布特征。方法采用序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应(PCR-Sequence Specific Oligonucleotide Probing,PCR-SSOP)方法,对5908名河北汉族捐献造血干细胞健康志愿者的HLA-A等位基因作低分辨基因分型检测,采用方根法计算HLA-A基因频率,并进行群体比较。结果河北汉族人群中共检出18个HLA-A基因,呈现较高的基因多态性,包括过去很少被检测到的HLA-A25,A74,其中A座位最常见基因依次为:A*02、A*11、A*24、A*01、A*30、A*03、A*33。结论河北汉族人群HLA-A基因分布有自己的特点,各等位基因频率介于南北汉族之间,但更接近于中国北方汉族人群,符合地域分布特征。

次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂对人外周髓样树突状细胞功能影响的研究

目的 探讨次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂（inosine monophosphate dehydrogenase inhibitor,IMPDHI）对人外周髓样树突状细胞（myeloid dendritic cells,MDC）功能的影响.方法 新鲜外周血单个核细胞（PBMC）来源于健康志愿者（n=15）,实验组加入IMPDHI,流式细胞仪分析MDC表面共刺激因子、黏附分子、趋化因子受体等的表达水平.Transwell小室实验中,加入不同的趋化因子,经Lin-1/CD11c/HLA-DR染色后,流式细胞仪计数,以迁移细胞的百分比表示其迁移能力.分离血树突状细胞抗原-1＋（blood dendritic cell antigen-1＋,BDCA-1＋）细胞,流式细胞仪测定BDCA-1＋细胞中FTTC标记的右旋糖酐的荧光值.混合淋巴细胞培养后,流式细胞仪测定同种异体CD4＋T淋巴细胞在G0期的比例.结果 细胞表面标志：与对照组相比,实验组MDC表面的CD40、CD62L、HLADR、CD54、CD80、CD83和CD86的表达水平明显下降（P＜0.05） 趋化因子受体的表达水平：与对照组相比,实验组MDC表面的CCR1表达水平明显升高（17.02±3.23 vs 30.63±9.13,P＜0.05）,CCR3的表达水平（10.26±2.25 vs 5.81±0.97,P＜0.05）和CCR7的表达水平（9.56±1.84 vs5.18±0.60,P＜0.05）明显下降 迁移功能：实验组MDC对趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL7、CXCL12的趋化能力明显增强（P＜0.05） 吞噬能力：实验组MDC的吞噬能力明显强于对照组（P＜0.05） 刺激同种异体CD4＋T淋巴细胞增殖的能力：实验组中MDC诱导同种异体CD4＋T细胞分裂、增殖的能力几乎完全受到抑制.结论 IMPDHI抑制外周MDC的成熟,增强其吞噬能力和炎性趋化的能力,抑制其刺激同种异体CD4＋T淋巴细胞增殖、应答的能力.

银杏酮酯滴丸对冠心病稳心型心绞痛病人PCI术后再狭窄及血清FGF21、PPARγ水平的影响

目的观察银杏酮酯滴丸对冠心病稳定型心绞痛病人经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄以及血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)、单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)水平的影响。方法选取2017年9月—2020年1月在包头市第四医院住院行PCI术的冠心病稳定型心绞痛病人98例,将98例病人按照随机数字表法分为对照组和观察组,各49例。对照组病人于PCI术后当日起进行常规西药干预,观察组病人PCI术后在常规西药干预基础上给予银杏酮酯滴丸治疗,每次4丸,每日3次。两组疗程均为6个月。比较两组PCI术中指标、术后6个月再狭窄发生率、西雅图心绞痛量表(SAQ)评分以及血清FGF21和PPARγ水平。结果两组PCI术中抽吸导管使用、肝素用量、病变血管、置入支架数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组PCI术后6个月再狭窄发生率为2.04%,明显低于对照组的16.33%(P<0.05)。观察组治疗后SAQ各项评分、PPARγ水平明显高于对照组(P<0.01),血清FGF21水平明显低于对照组(P<0.01)。结论银杏酮酯滴丸可明显减少冠心病稳定型心绞痛病人PCI术后再狭窄的发生,改善病人生活质量,其机制可能与调节血清FGF21和PPARγ水平有关。

TERT基因多态性及HP感染与胃癌遗传易感性的研究

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)基因rs2075786单核苷酸多态性(SNP)、幽门螺杆菌(HP)与胃癌遗传易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析297例胃癌患者、105例萎缩性胃炎患者及402例非萎缩性胃炎患者的基因多态性,采用病理学诊断和13C尿素酶呼气试验(13C-UBT)检测幽门螺杆菌(Hp)感染。结果:rs2075786位点CC、TC、TT基因型频率在对照组与萎缩性胃炎组分布差异无统计学意义,胃癌组TT基因型频率显著高于对照组(25.6%vs12.5%),TT基因型携带者患胃癌风险增加2.23倍(95%CI:1.46～3.40),对照组、萎缩性胃炎组、胃癌组HP感染率分别为40.3%、64.8%、56.9%,差异有统计学意义(P<0.01),OR值分别为2.73(95%CI:1.74～4.26)、1.96(95%CI:1.44～2.67)。经Logistic回归分析,发现Hp感染与基因突变无明显交互作用。结论:TERT基因rs2075786基因多态性与胃癌遗传易感性有关。

小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测

目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列。把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率。结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内。通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上。表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70%以上。结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具。