急性心肌梗死患者PCI术中血栓事件不同亚群单核细胞及单核细胞-血小板聚集体的变化

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)过程中,术中血栓事件(IPTE)的出现情况;分析出现和不出现IPTE的情况下,单核细胞、不同单核细胞亚群以及单核细胞-血小板聚集物(MPA)的变化。方法入选的AMI患者PCI术前抽血进行单核细胞亚群和MPA的四色流式细胞术检测。根据血小板表面标志CD41的表达,利用绝对计数管中的荧光微球,进一步对单核细胞及3个亚群进行MPA的数量进行分析。采用Wilcoxon秩和检验、受试者工作曲线(ROC)等检验方法分析。结果 IPTE组CD14+CD16++单核细胞较非IPTE组明显减少,且占总单核细胞百分比下降。与非IPTE组患者相比,IPTE组MPA、各亚群与MPA以及结合比例均显著高于非IPTE组患者。各组患者的受试者工作特征(ROC)曲线分析显示MPA结合比率以及各亚群MPA结合比率对AMI患者PCI术中发生IPTE有较好的预测价值。结论 IPTE组患者中CD14+CD16++单核细胞亚群较非IPTE组患者显著减少,MPA结合比率及各单核细胞亚群MPA结合比率均显著高于非IPTE组患者,对于AMI患者PCI术中发生IPTE有较好的预测价值。

不同处理方法对流式细胞术检测外周血单核细胞-血小板聚集体的影响

目的：探讨实际工作中不同处理方法对流式细胞术检测单核细胞-血小板聚集体（ MPA）的影响，为准确检测MPA提供依据。方法获取枸橼酸钠抗凝外周静脉全血，分别以CD14-藻红蛋白（ PE）、CD61-异硫氰酸荧光素（ FITC）标记单核细胞、血小板，以CD62P-PE标记活化血小板，使用流式细胞术检测CD14-PE／CD61-FITC双阳性MPA占单核细胞百分比及血小板CD62P阳性率。采用不同处理方法[全血标本处理前后放置不同时间、全血固定后立即标记抗体或放置不同时间后标记抗体、抗体标记前全血离心处理、不同抗体组合（抗CD14-PE和抗CD61-FITC ，抗CD14-PE和抗CD41-ECD，抗CD45-ECD和抗CD61-FITC）]检测MPA，比较各种处理方法检测的MPA是否有差异。结果与获取标本后立即处理比较，放置于室温（18～25℃）和低温（2～8℃）， MPA百分比、血小板CD62P阳性率均随放置时间的延长而增加（P＜0．05），两者呈正相关（室温r＝0．82，P＜0．05；低温r＝0．83，P＜0．05）。标本处理后立即检测或低温保存放置至24 h再检测， MPA百分率差异无统计学意义（P＞0．05）。与固定前标记抗体的处理方法比较，1％多聚甲醛低温固定全血标本后标记抗体，或者低温保存放置至24 h再标记抗体，MPA百分率差异无统计学意义（P＞0．05）。全血标本离心处理后，MPA百分率和血小板CD62P阳性率均明显增加（P＜0．05）。不同的抗体组合检测MPA百分比的差异均无统计学意义（P均＞0．05）。结论获取全血标本后应尽快处理，不能立即处理的应使用固定剂固定后可低温保存24 h。在标记新鲜全血标本前，应避免离心，处理完毕的标本使用固定剂固定后可低温保存24 h再用流式细胞术检测。不同抗体组合应验证后使用，CD14／CD61、CD14／CD41、CD45／CD61组合均适用于检测MPA。

2型糖尿病血小板-单核细胞聚集体水平及其与CD40、CD40L的关系研究

目的:观察2型糖尿病外周血的血小板-单核细胞聚集体、CD62p及其与CD40、CD40L之间关系变化,并探讨2型糖尿病微血管特异病变的发病机制和临床识别和预测的指标。方法:流式细胞术检测2型糖尿病病人血小板-单核细胞聚集体、CD62P以及CD40、CD40L。结果:有微血管病变的糖尿病组的血小板-单核细胞聚集体、CD62p、CD40/M、CD40L/P、CD40L/M均明显高于对照组;无微血管病变的糖尿病组血小板-单核细胞聚集体、CD62p、CD40L/P、CD40L/M均明显高于对照组;有微血管病变的糖尿病组的血小板-单核细胞聚集体、CD62p、CD40/M、CD40L/P、CD40L/M明显高于无微血管病变的糖尿病组。血小板-单核细胞聚集体、CD62p与CD40L/P、CD40L/M有明显的正相关性;血小板-单核细胞聚集体与CD40/M呈显著正相关性。血小板-单核细胞聚集体、CD62p、CD40L/P、CD40L/M与空腹血糖有明显的正相关性。结论:血小板-单核细胞聚集体、CD62p的测定对于糖尿病微血管病变的早期诊断具有重要的临床应用和研究价值。CD40-CD40L可能通过诱导血小板的活化,血小板-单核细胞集聚参与糖尿病微血管病变。

单核细胞亚群与单核细胞-血小板聚集体与老年心肌梗死心血管不良事件的关系

目的分析单核细胞亚群相关指标、血小板-单核细胞聚集体(MPA)与心肌梗死心血管不良事件的关系。方法流式细胞术检测老年心肌梗死患者(病例组)及健康人群(对照组)的单核细胞亚群、MPA。结果病例组中间型(MON2)、非经典型单核细胞亚群(MON3)百分比、MPA百分比明显高于对照组,经典型单核细胞亚群(MON1)百分比明显低于对照组(P<0.05)。不良事件患者MON2、MON3百分比和MPA%水平明显高于无不良事件患者(P<0.05)。年龄、体重指数(BMI)、C反应蛋白(CRP)、凝血酶原时间(PT)、MON2百分比、MON2-MPA%是心血管发生不良事件的危险因素。结论MON2、MON3及其MPA%水平在预测老年心肌梗死患者预后中具有一定临床价值。

急性脑梗死患者各类血小板-白细胞聚集体的检测及在临床诊断中的应用

目的检测急性脑梗死患者各类血小板-白细胞聚集体(PLA)水平,探讨其临床应用价值。方法选取58例急性脑梗死患者,其中大动脉粥样硬化性脑梗死(LAA)19例、小动脉闭塞性脑梗死(SAO)39例,以体检健康者20名作为正常对照组。采用流式细胞术检测总PLA、血小板-单核细胞聚集体(PMA)、血小板-粒细胞聚集体(PNA)、血小板-淋巴细胞聚集体(PLy A)和血小板(PLT)CD62P阳性率。采用免疫荧光干式定量法检测高敏C反应蛋白(hs-CRP),以hs-CRP<1.0 mg/L、1.0~3.0 mg/L、>3.0 mg/L将急性脑梗死患者分为低风险组、中度风险组和高风险组。由临床医师依据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)对患者进行评分,以NIHSS<5分为轻度梗死,NIHSS≥5分为中重度梗死。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各类PLA及CD62P诊断急性脑梗死的价值。结果 LAA组、SAO组PMA及LAA组PNA明显高于正常对照组(P<0.05),LAA组PMA与SAO组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组间PLA和PLy A差异均无统计学意义(P>0.05)。SAO组PLT活化后CD62P高于正常对照者(P<0.05)。SAO患者PMA与CD62P阳性率呈正相关(r=0.692,P<0.01)。ROC曲线分析显示,PMA、PNA、CD62P、PLA和PLy A诊断急性脑梗死的ROC曲线下面积分别为0.769(P<0.01)、0.652(P<0.05)、0.686(P<0.05)、0.641(P>0.05)和0.517(P>0.05)。各类PLA与hs-CRP、NIHSS评分之间均无相关性(P>0.05)。结论不同类型PLA在急性脑梗死中的变化不同。PMA与PNA水平在急性脑梗死中升高更显著,对急性脑梗死有一定的诊断意义,但可能不能用于鉴别LAA与SAO以及提示病情严重程度和预后。

脓毒症患者外周血血小板-白细胞聚集体水平变化的意义

目的探讨脓毒症患者外周血血小板-白细胞聚集体（ PLA）水平变化的意义。方法将100例脓毒症患者分为感染性休克组30例，严重脓毒症组40例，脓毒症组30例，应用流式细胞术检测外周血血小板-中性粒细胞聚集体（ PNA）和血小板-单核细胞聚集体（ PMA）水平，并与30例健康者（对照组）进行比较。以28 d为终点比较预后良好组与预后不良组患者的外周血PLA水平、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（ APACHEⅡ）和序贯器官衰竭估计评分（SOFA）。结果脓毒症患者外周血PMA和PNA水平明显高于对照组（P＜0．01）；感染性休克组外周血PMA和PNA水平明显高于严重脓毒症组、脓毒症组和对照组（P＜0．01）；严重脓毒症组外周血PMA和PNA水平明显高于脓毒症组和对照组（P＜0．01）；脓毒症组外周血PMA和PNA水平明显高于对照组（ P＜0．05）；预后不良组外周血PMA和PNA水平、APACHEⅡ和SOFA评分明显高于预后良好组（P＜0．01）。结论脓毒症患者外周血PLA水平升高，并与脓毒症严重程度有关，脓毒症患者预后不良组外周血PLA水平高于预后良好组，提示PLA可能在脓毒症损伤机制中起着重要作用。

四色流式分析冠心病患者外周血单核细胞亚群及单核细胞-血小板聚集体的变化

目的:建立基于四色的流式细胞术检测外周血单核细胞亚群及各亚群单核细胞-血小板聚集体(MPA)的方法,并观察冠心病患者外周血单核细胞亚群及各亚群MPA的变化特点。方法:本研究纳入经冠状动脉造影证实的冠心病患者和健康对照者各25例,记录所有研究对象的一般临床资料,并采集外周静脉血,依据单核细胞和血小板的标志性分子CD86、CD14、CD16和CD41对单核细胞亚群和MPA进行四色的流式细胞术(FCM)分析。利用抗CD86-PE-Cy5圈出总的单核细胞(总Mon)群,利用抗CD14-FITC和抗CD16-PE将总Mon分为:经典型(CD14++CD16-,Mon1)、中间型(CD14++CD16+,Mon2)和非经典型(CD14+CD16++,Mon3)3个亚群,最后应用CD41-PE-Cy7分析总Mon和各个亚群的MPA,并应用Flow-count TM荧光微球对各个亚群及MPA的绝对量进行计数,比较两组研究对象外周血单核细胞各亚群及各亚群MPA的差异。结果:冠心病组患者外周血Mon2和Mon3所占百分比和绝对计数均显著高于对照组(P<0.05),而Mon1和总Mon两组间比较差异无统计学意义;与对照组相比,冠心病患者总MPA和Mon2相关MPA所占百分比和绝对计数亦显著增高(P<0.05),而Mon1相关MPA和Mon3相关MPA的百分比及绝对计数两组间比较差异无统计学意义。结论:基于CD14、CD16、CD86和CD41的四色流式分析能够有效定量分析外周血单核细胞各亚群及各亚群MPA。中间型单核细胞及其形成的MPA水平显著升高,为临床上冠心病患者的诊治策略提供了新思路。

脓毒症并急性呼吸窘迫综合征患者血小板-单核细胞聚集体变化相关性研究

目的 探讨脓毒症及脓毒症合并急性呼吸窘迫综合征 （ARDS）患者外周血血小板-单核细胞聚集体（PMA）水平变化及相关性分析，评估其对脓毒症导致ARDS的诊断价值及意义。方法 本研究纳入2014年7月至2015年12月贵州省人民医院收治的123例脓毒症患者，采用2012 ARDS 柏林定义据是否发展为ARDS分为ARDS组和非ARDS组，非ARDS组61例，ARDS组62例，ARDS组按ARDS柏林定义分为3组，轻度组22例，中度组21例，重度组19例。所有纳入的病例诊断当天留取血标本，检测PMA水平；同时测定IL-6水平，计算PaO2/FiO2，并同步记录各组的急性生理学以及慢性健康状况评分（APACHE Ⅱ评分），应用SPSS 17.0软件，计数资料采用χ^2检验；计量资料组间比较采用独立样本t检或单因素方差分析，采用Pearson线性相关对PMA、IL-6、APACHE Ⅱ、PaO2/FiO2进行相关性分析，建立受试者工作特征曲线（ROC），分析PMA、IL-6、APACHE Ⅱ对ARDS的发生价值，以P＜0.05为差异有统计学意义。结果 脓毒症并ARDS组与非ARDS组相比较，IL-6、APACHE II评分、PMA水平明显升高差异均有统计学意义（P〈0.01），ARDS组中各指标随病情程度加重而增加差异均具有统计学意义（P〈0.01）。相关分析显示，外周血 PMA与IL-6（r=0.791，P〈0.01）、APACHEⅡ评分（r=0.641，P〈0.01）均呈明显正相关；与PaO2/FiO2呈明显负相关（r=-0.857，P〈0.01）。PMA预测ARDS的ROC曲线下面积为0.833，最佳临界值为8.8%时的特异度为0.82，灵敏度为0.71，高于APACHEⅡ评分、IL-6的预测价值。结论 PMA在脓毒症患者中升高，随着病情进展并发ARDS后PMA升高更加显著，PMA与IL-6、APACHEII具有显著的相关性，预测ARDS的价值优于IL-6、APACHE Ⅱ评分，可以作为判断脓毒症病情程度及预测ARDS的辅助指标。

通心络胶囊对急性脑梗死患者血小板-单核细胞聚集体的影响

目的观察通心络胶囊对急性脑梗死患者血小板-单核细胞聚集体(PMA)的影响。方法将80例急性脑梗死患者随机分为阿司匹林治疗组(A组)、阿司匹林+通心络胶囊治疗组(B组)、氯吡格雷治疗组(C组)、氯吡格雷+通心络胶囊治疗组(D组),每组均20例。观察4组患者治疗前后PMA、斯堪的纳维亚神经卒中量表(SNSS)评分、血糖、胆固醇、纤维蛋白原、血小板聚集率(PAR)、可溶性P选择素(sP-sel)和C-反应蛋白(CRP)的变化。结果PMA水平与PAR、sP-sel、CRP、血糖、胆固醇和纤维蛋白原水平成正相关(P<0.05);与SNSS评分成负相关(P<0.05)。脑梗死患者治疗后PMA、PAR均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01),治疗后4组SNSS评分均较治疗前明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);CRP治疗前后均无明显下降,差异均无统计学意义(均P>0.05);sP-sel在B组、C组和D组治疗后均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论通心络胶囊与抗血小板药物合用可降低患者体内PMA的水平,在抑制血小板活化方面,阿司匹林+通心络胶囊合用与氯吡格雷的效果相似。

肺癌患者C反应蛋白及血小板-单核细胞聚集体与血栓前状态的关系

目的:探讨肺癌患者C反应蛋白和血小板-单核细胞聚集体与血栓前状态的关系及其应用价值。方法:以免疫比浊法、流式细胞仪以及血凝分析仪分别检测60例初诊肺癌患者,35例肺良性疾病患者和30例健康对照者血浆C反应蛋白(CRP)、血小板-单核细胞聚集体(PMA)、血小板p-选择素(CD62p)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)以及抗-凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)水平。结果:肺癌患者CRP,PMA,FIB,D-D,CD62p水平显著高于而AT-Ⅲ显著低于肺良性疾病和健康对照者(P<0.01或P<0.001)。CRP和PMA平行阳性以及有转移的肺癌患者FIB,D-D和CD62p水平分别显著高于CRP和PMA均正常以及无转移的患者(P<0.001)。CRP,PMA,CD62p及CRP+PMA在肺癌患者中的敏感度分别为85.0%,81.7%,88.3%及90.0%。CRP和PMA与FIB,D-D和CD62p均呈显著正相关(P<0.01或P<0.001)。结论:CRP和PMA与血栓前状态有密切联系,在判断肺癌患者病情中具有重要的意义。CRP可以作为监测肺癌患者体内血栓前状态以及血栓形成的独立指标。

外周血白细胞-血小板聚集体在肌钙蛋白阴性的急性冠脉综合症患者和健康人群的分布差异

【目的】观察外周血白细胞与血小板形成的聚集体在肌钙蛋白阴性的急性冠脉综合症患者和健康人群的分布情况。【方法】采集2011年11月-2012年5月期间,我中心收治的66例肌钙蛋白阴性的不稳定心绞痛患者外周血,以枸橼酸钠抗凝后采用流式细胞术分别分析粒细胞-血小板、单核细胞-血小板以及淋巴细胞-血小板聚集体的数量和比例。并采用相同方法对51例性别和年龄匹配的健康体检者进行白细胞-血小板聚集体的检测。【结果】与健康体检者相比,冠心病组患者外周血白细胞血小板聚集体的计数显著高于健康对照组[8 162 cells/μl（6 748-12 925）vs.5 911 cells/μl（4 722-7 252）,P〈0.001;以中位数和四分位间距表示,下同]。单核细胞-血小板聚集体百分比较健康对照组明显升高[23.25%（14.01%-40.40%）vs.17.88%（14.23%-24.25%）,P〈0.05],而粒细胞[9.06%（7.15%-11.48%）vs.9.50%（8.14%-11.30%）,P=0.470]和淋巴细胞[7.32%（6.14%-8.94%）vs.7.23%（5.57%-8.03%）,P=0.321]与血小板聚集体百分比在两组间没有显著性差异。【结论】肌钙蛋白阴性的急性冠脉综合症患者外周血白细胞血小板聚集体较健康人群明显升高,其中单核细胞-血小板聚集体增高更为明显,提示单核细胞-血小板聚集体对于冠心病患者危险分层具有潜在应用价值。

红花注射液对急性脑梗死患者血小板活化标志物的影响

目的评价红花注射液的抗血小板作用。方法 60例急性脑梗死患者随机分为二组,应用流式细胞仪分别检测治疗前后血小板黏附、释放、聚集功能的变化,同时进行凝血功能、超敏C反应蛋白、血常规、血生化检查,并进行神经功能缺损评分,比较二组治疗前后的差异。结果应用红花注射液后脑梗死患者的CD62 p、PAC-1、PMA明显下降,差异有统计学意义,CD42b及CD61下降,但没有统计学差异。结论红花注射液能抑制脑梗死患者血小板的激活和血小板-白细胞聚集体的形成,有明确的抗血小板作用。

P物质前体与血小板活化及血小板参数的相关性

目的探讨P物质前体(Pro-SP)与血小板活化及血小板参数的相关性。方法总共纳入心内科患者76例,根据急性心肌梗死诊断标准将患者分为非急性心肌梗死组(39例)和急性心肌梗死组(38例)。采用流式细胞仪测定血小板-单核细胞聚集体(PMA)形成率评估血小板活化程度,酶联免疫吸附实验测定Pro-SP浓度。比较Pro-SP与PMA形成率及血小板参数相关性,以及两组间Pro-SP差异。结果Pro-SP与PMA形成率(Pearson相关系数为0.407,P<0.001)、血小板分布宽度(Pearson相关系数为0.269,P=0.018)呈正相关,与血小板总数、血小板平均容积、血小板比积、大血小板比例不相关(P>0.05)。多元线性回归分析显示Pro-SP是PMA形成率的独立影响因素,急性心肌梗死组Pro-SP较非急性心肌梗死组显著升高(P<0.05)。结论Pro-SP与血小板活化正相关,且与血小板分布宽度呈正相关,与血小板总数、血小板平均容积、血小板比积、大血小板比例不相关(P>0.05)。

单核细胞在血栓形成中的作用

血栓形成性疾病是医疗实践中面临的主要挑战，日前急性冠脉综合征（acutecoronarysyndrome，ACS）年发病率约为3％0，6个月病死率高达13％。单核细胞的主要生理作用是免疫（如吞噬作用）、发展为组织巨噬细胞和树突状细胞，另外也参与了促凝（抗凝）病理生理过程，笔者就单核细胞在血栓相关进程中的作用做一综述。

银杏叶片对不稳定型心绞痛患者MPA、CD11b及MCP-1水平的影响

目的:观察银杏叶片治疗的不稳定型心绞痛(UAP)患者单核细胞-血小板聚集体(MPA)及单核细胞活化指标水平的变化,探讨其对心血管疾病的治疗机制。方法:测定92例UAP和42例稳定性心绞痛(SAP)患者外周血MPA、CD11b和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,将UAP患者随机分为常规治疗组(对照组)和合并银杏叶片治疗组(银杏叶组),同时在治疗28 d后评估治疗效果并测定MPA、CD11b和MCP-1水平。结果:UAP组MPA、CD11b和MCP-1水平均显著高于SAP组(t=18.514,23.301和22.523,P<0.01)。MPA与CD11b水平和MCP-1浓度均成正相关(r=0.626和0.635,P<0.01)。银杏叶片治疗的总有效率(76.1%,35/46)显著高于常规治疗者(56.5%,26/46)(P<0.05)。银杏叶组治疗后MPA、CD11b和MCP-1水平均显著低于对照组(P<0.01)。银杏叶治疗总有效组在治疗后三者水平均显著低于治疗前(P<0.01),总有效组各指标水平降低率显著高于总无效组(P<0.01)。结论:银杏叶片可通过下调MPA、CD11b和MCP-1水平从而有效治疗UAP。

PMA及PNA在预测2型糖尿病并发肾病变中的实用价值

目的探讨血小板-中性粒细胞聚集体(PNA)、血小板-单核细胞聚集体(PMA)检测在预测2型糖尿病并发症中的实用价值。方法应用流式细胞仪检测2型糖尿病并发肾病变患者血浆的PMA、PNA,并以无并发症的2型糖尿病患者和健康人作为对照,比较上述三组PMA、PNA的水平,用ROC曲线评价此试验的临床应用价值。结果 2型糖尿病并发肾病变组PMA、PNA水平显著高于无并发症组,而后者又显著高于健康对照。ROC曲线显示,PMA对2型糖尿病患者并发肾病变诊断临界值灵敏度为96.7%,特异性为100.0%,截断点为40.12%;PNA灵敏度为96.7%,特异性为88.3%,截断点为26.98%,可见PMA优于PNA。曲线下面积分别为0.986和0.963。结论 PMA、PNA可以预测2型糖尿病肾病变,应用流式细胞法检测其灵敏度和特异性均较满意,PMA特异性优于PNA。