基于电化学发光和阻抗技术研究DNA单碱基错配

单碱基错配的识别和稳定性差异在核酸多态性研究中至关重要。在同一电化学传感器平台上,采用电化学发光(ECL)和电化学阻抗(EIS)2种技术,协同研究DNA链中不同类型和不同位点的单碱基错配识别和稳定性差异。电极表面具有茎环构象的探针DNA与完全互补DNA、不同类型或不同位点单碱基错配DNA杂交前后的ECL和EIS信号强度变化有显著差异。信号强度变化可揭示单碱基错配识别的稳定性。结果表明,DNA链中心位点的C-A单碱基错配稳定性低于链两端的,靠近键合电极表面双链链端的C-A单碱基错配稳定性低于非键合电极表面双链链端的,同一中心位点C-X碱基对的稳定性顺序为C-G≫C-T>C-A≥C-C。研究结果可为核酸多态性研究提供参考。

检测单碱基错配-PCR方法的发展

ＰＣＲ已用于ＤＮＡ诊断。连接酶链反应（ＬｉｇａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＬＣＲ）做为ＰＣＲ方法的补充得到进一步发展。应用热稳定ＤＮＡ连接酶，既能扩增ＤＮＡ，同时也能区分单碱基的替换。当碱基完全互补时，这个连接酶能对两个紧密相邻的寡核苷酸进行共价连接，若连接处发生了一个碱基突变，便不能使两个寡核苷酸有效连接，从而不能扩增产物。

梳型阳离子共聚物辅助构建DNA生物传感体系用于检测单碱基错配

为了快速准确的检测出体系中单碱基错配,利用氧化石墨烯优异的荧光淬灭能力、对单双链DNA吸附能力的差异,搭配与之相配合出现较高的核酸伴侣活性的梳型阳离子共聚物PLL-g-Dex,构建了一个无酶、准确且高效的分析体系。通过荧光检测手段,首先确定了实验设计的可行性。之后依次检测过程中各组分的最优浓度,发现在T-DNA浓度为20 nmol/L的情况下,当GO浓度9μg/mL,cDNA浓度90 nmol/L,PLL-g-Dex浓度96 nmol/L时为最佳实验点。最后检测体系对单碱基错配的选择性,发现不同碱基错配体系所呈现出的荧光强度不同。而且相比其他碱基,PLL-g-Dex对C-C碱基错配的选择性较强。

基于错配识别蛋白MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法

目的建立一种基于错配识别蛋白的高特异性核酸检测方法。方法利用蛋白质体外表达和纯化技术获取MutS,并对MutS的错配识别特性进行测定;利用MutS-RCA检测体系对2个碱基错配的不同DNA片段进行检测。结果 MutS蛋白能够有效区分开互补双链和非互补双链DNA,能够稳定结合在非互补双链DNA上,基于MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法取得了良好的特异性。结论 MutS-RCA检测体系提高了单碱基错配核酸检测的特异性。

基于纳米金表面竞争杂交反应的新型DNA检测方法(英文)

基于纳米金表面DNA的竞争杂交反应和纳米金粒子的离心分离-富集过程,建立了一种DNA荧光检测方法,实现对飞摩尔级目标DNA的高灵敏度检测.同时通过DNA的竞争杂交过程并结合缓冲液离子强度的阶跃式升高,实现了对目标DNA上单个碱基错配的有效分辨.本研究还提供了一种简单有效的DNA分离-富集方法,相对于通常使用的磁珠分离过程更为经济方便.

电化学DNA生物传感器在基因检测中的研究进展

目的核酸电化学的深入研究带动了电化学DNA生物传感器的迅猛发展,尤其是用于检测DNA特异性片段和DNA损伤的传感器.基于DNA杂交技术的电化学传感器已广泛应用于特定基因序列的定性定量分析、疾病诊断、食品安全等领域.该文对近年来电化学DNA传感器涉及基因检测相关的新研究进行综述,探讨其未来的发展趋势.

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。