人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达

目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。

重庆地区汉族2型糖尿病患者PRKAA2基因SNPs研究

目的了解中国重庆地区汉族人群单磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶α2亚单位(AMPKα2)基因PRKAA2单核苷酸多态性(SNPs)位点与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法选取重庆地区T2DM患者523例(病例组)、正常对照312例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对PRKAA2第1内含子区rs10889007(301A>T)和第2内含子区rs2746338(201A>G)2个SNPs进行基因分型;对2个SNPs进行连锁不平衡(LD)检验,并进行单倍型检测。结果 PRKAA2基因rs10889007(301A>T)3种基因型AA、AT、TT频率在病例组和对照组间差异无统计学意义(χ2=3.227,P>0.05),两组间少见等位基因T频率分布差异亦无统计学意义(χ2=0.887,P>0.05)。PRKAA2基因rs2746338(201A>G)3种基因型AA、AG、GG频率在病例组及对照组间差异无统计学意义(χ2=3.346,P>0.05),两组间少见等位基因G频率分布差异亦无统计学意义(χ2=0.981,P>0.05)。PRKAA2基因rs10889007(301A>T)和rs2746338(201A>G)之间构成的4种单倍型在病例组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PRKAA2基因SNPs位点rs10889007(301A>T)和rs2746338(201A>G)与中国重庆地区汉族人群T2DM无关联。