单纯性圆锥动脉干畸形患儿GATA-6基因突变筛查及突变体蛋白功能研究

目的探讨转录因子GATA-6在单纯性圆锥动脉干畸形中的分子遗传机制,旨在为单纯性圆锥动脉干畸形的早期预防及遗传咨询提供支持。方法选取32例散发单纯性圆锥动脉干畸形患儿及100例健康者,应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增转录因子GATA-6基因的7个外显子编码区及两侧部分内含子区,PCR产物纯化后ABI Genetic Analyzer 3100型DNA测序仪自动测序,所得结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中GATA-6基因序列进行比对,并且与健康对照组比较,观察转录因子GATA-6基因突变情况;以野生型pcDNA3.1-GATA-6为模板,用基因定点突变方法构建突变基因型真核表达载体GATA-6-G245R;野生型GATA-6、GATA-6-G245R和心房利钠因子荧光素酶(ANF luciferase)报告质粒共转染HEK 293T细胞,并以共转染的CMV-LacZ为内参,荧光素酶和半乳糖苷酶活性在转染24 h后用发光计测定并检测下游ANF-Luciferase报告基因的活性。结果在1例右心室双出口患儿中发现了转录因子GATA-6的错义突变,突变位于GATA-6基因第2外显子区c.733G>C,突变使第245位的甘氨酸(Gly)被精氨酸(Arg)取代(p.Gly245Arg,G245R)。pcDNA3.1(+)-GATA-6突变体真核表达质粒经酶切及正反2个方向测序验证构建成功;通过对luciferase荧光素酶报告基因活性的检测发现相比较野生型GATA-6和GATA-6-G245R突变基因转录活性下降。GATA-6-G245R与野生型GATA-6比较下降41.3%,二者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论转录因子GATA-6突变与单纯性圆锥动脉干畸形发生相关,转录因子GATA-6基因可能是单纯性心脏圆锥动脉干畸形患者的易感基因。

单纯性圆锥动脉干畸形患者染色体22q11.2微缺失的研究

目的心血管畸形是22q11.2缺失综合征常见的临床表现,随着研究的深入,该综合征发生率逐渐提高。该文就单纯性心脏圆锥动脉干畸形患者染色体22q11.2微缺失发生率进行研究。方法对24例单纯型圆锥动脉干畸形患者,包括2例永存动脉干,5例肺动脉闭锁/室间隔缺损,13例法洛四联症,4例右室双出口进行22q11.2内位点DNA探针荧光原位杂交(FISH)检测。结果24例单纯性圆锥动脉干畸形患者中仅1例患者有22q11.2缺失,发生率为4.2%,低于以往报道。结论尽管22q11.2缺失在伴其他系统异常的心脏圆锥动脉干畸形患者中较常见,单纯性圆锥动脉干畸形患者很少发现该缺失。

单核苷酸多态性微阵列技术在圆锥动脉干畸形胎儿诊断中的运用

【目的】研究圆锥动脉干异常胎儿的拷贝数变异(CNV)情况。【方法】运用染色体微阵列分析方法检测圆锥动脉干异常胎儿的CNV,根据CNV的临床意义,将病例分为非良性组(病理性CNV+临床意义未明CNV)和良性组(无CNV+良性CNV),并分析不同临床意义CNV与胎儿超声特征及预后的关系。【结果】研究期间128例染色体正常圆锥动脉干异常胎儿被纳入研究。其CNV检出率为14.1%(18/128),其中包括病理性CNV为5.5%(7/128)、临床意义未明CNV(VOUS)为4.7%(6/128)和良性变异CNV为3.9%(5/128)。此128例胎儿分为良性CNV组(n=115)及非良性CNV组(n=13)。非良性CNV组病例合并心外总异常率(76.9%vs. 43.5%,P=0.037),结构性心外异常率(61.5%vs. 24.2%,P=0.022)、软指标的异常率(61.5%vs. 20.9%,P=0.004)及胸腺异常率(30.8%vs. 0.87%,P=0.000)高于良性CNV组;两组间除持续性左上腔静脉发生率(46.2%vs. 13.9%,P=0.010)存在差异外,合并心内其他异常率无显著差异(53.9%vs. 53.9%,P=1.000)。非良性组的自然死亡率(50%)高于良性组(16.4%),但未达统计学差异。【结论】拷贝数变异是圆锥动脉干异常发生的可能机制之一,合并包括胸腺异常在内的心外异常提示合并拷贝数变异的可能性大。

先天性心脏圆锥动脉干畸形患者Cx43基因突变的初步研究

目的 探讨先天性心脏圆锥动脉干畸形(CTD)患者细胞间隙连接蛋白43(Cx43)基因突变的发生情况。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析结合DNA测序,对37例CTD、26例非CTD先心病、10例正常小儿进行了Cx43编码序列检测。结果 正常对照SSCP均表现为相同的带型。37例CTD中,仅1例法洛四联症(TOF)合并房间隔缺损(ASD)的患者出现了不同于正常对照的SSCP带型,经测序证实发生了717G→A碱基替换,但由于不引起所编码氨基酸的改变,考虑为沉默多态位点。其他CTD患者及26例非CTD先心病患者均未检测到Cx43编码序列的突变。结论 Cx43基因突变在CTD等先心病患者中可能并不常见。717G→A可能是一种新的单核苷酸多态位点。

TBX1启动子区核苷酸变异与心脏圆锥动脉干畸形相关性研究

目的验证TBX1启动子区核苷酸变异与心脏圆锥动脉干畸形的相关性。方法招募621例心脏圆锥动脉干畸形患儿,采用MLPA方法检测患儿22q11.2区基因组DNA的拷贝数,排除22q11.2微缺失患儿。对605例无22q11.2微缺失的心脏圆锥动脉干畸形患儿和588例正常对照儿童,采用PCR扩增和基因测序方法,进行TBX1启动子区序列分析(-2000..+1),并应用生物信息学软件对变异位点进行功能预测分析。结果心脏圆锥动脉干畸形患儿中发现存在TBX1基因启动子区位点变异,其中包括3个已报道的单核苷酸多态性(SNP)和7个罕见变异位点,突变的发生率约为1.7%。应用Ali Baba 2.1对7个罕见变异位点进行分析,显示其中3个位点可能影响相关反式作用因子与TBX1启动子区顺式作用元件的结合。结论 TBX1启动子区核苷酸变异可能与心脏圆锥动脉干畸形发生相关。

孕12~15^(+6)周应用四维STIC技术筛查圆锥动脉干畸形的可行性分析

目的评估四维时间-空间关联成像技术(STIC)于孕12~15^(+6)周进行胎儿圆锥动脉干畸形筛查的可行性。方法分别运用二维超声心动图和四维STIC技术对孕12~15^(+6)周的孕妇进行胎儿圆锥动脉干畸形关键诊断切面图像的采集,采集胎儿心脏超声标准切面(四腔心切面,左心室流出道切面,右心室流出道切面,三血管气管切面,主动脉弓切面,肺动脉分叉切面),共收集完整病例215例,并对所有病例进行随访。结果两种检查方式的四腔心切面显示率比较,差异无统计学意义(P>0.05),而左心室流出道切面、右心室流出道切面、主动脉弓切面、肺动脉分叉切面、三血管气管切面,四维STIC技术采集的切面显示率均高于二维超声心动图,差异均有统计学意义(P均<0.05),四维STIC技术检查所用时间短于二维超声心动图,差异有统计学意义(P<0.05)。入组病例中检出并经随访确诊为圆锥动脉干畸形5例,四维STIC技术正确诊断病例3例,二维超声心动图正确诊断病例2例,四维STIC技术纠正二维超声心动图检查漏诊病例1例。结论四维STIC技术可于孕12~15^(+6)周对胎儿心脏圆锥动脉干系统发育情况有初步评估,并且在检查时间及圆锥动脉干畸形关键诊断切面的显示率方面优于二维超声心动图。

先天性圆锥动脉干畸形的诊断进展

圆锥动脉干畸形(CTD)是由于圆锥动脉干段胚胎发育异常所致。22q11.2微缺失综合征与CTD的发生密切相关,遗传学技术的进展使其产前诊断成为可能。超声心动图是小儿心脏影像无创检查的首选方法。MSCT、MRI可很好地显示心外大血管。心血管造影虽是一种有创检查手段,但其在体、肺动脉等的显影中具有不可替代的作用。目前,上述技术所得结果仍有分歧,而制定一种统一的诊断标准是提高其诊断正确性的关键所在。

先天性心脏病圆锥动脉干畸形NKX2-5基因CpG岛甲基化状态分析

目的研究心肌特异性转录因子NKX2-5基因启动子区在先天性心脏病圆锥动脉干畸形(CTD)病例中的甲基化状态,从表观遗传学角度探讨先心病的发病机制,为先心病的早期临床诊治提供理论依据。方法首先利用Tru1l限制性内切酶将基因组片段化并接上接头,然后利用甲基化结合蛋白(MBD)与甲基化DNA特异性结合的特点对甲基化DNA片段进行富集;针对NKX2-5基因启动子区的CpG岛设计引物,通过实时定量PCR检测CTD与正常胎心组织中NKX2-5基因甲基化状态。结果通过与正常心脏组织相比,NKX2-5基因在6例病变组织中均发生了不同程度的甲基化,其中4例呈现高甲基化,另外2例甲基化程度无明显变化。结论 NKX2-5基因甲基化可能与先心病CTD发病相关,可能成为先心病早期诊断的分子标志物之一。

时间-空间关联成像技术评估圆锥动脉干畸形胎儿心功能

目的应用时间-空间关联成像(STIC)技术评价圆锥动脉干畸形(CTD)胎儿心功能。方法选取经胎儿超声心动图诊断的39胎CTD胎儿(CTD组)和39胎正常胎儿(对照组)。采用STIC技术评估2组胎儿的心功能,包括肺动脉(PA)内径、左心室舒张末期内径(LVDD)和右心室舒张末期内径(RVDD)、左心室收缩末期内径(LVDS)、右心室收缩末期内径(RVDS)、缩短分数(FS)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、右心室舒张末期容积(RVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、右心室收缩末期容积(RVESV)、每搏输出量(SV)和射血分数(EF)等指标,并比较2组间的差异。结果与对照组比较,CTD组胎儿PA内径及PA/AO均减小(P均<0.001),LVDD、LVDS、RVDD、RVDS、LVEDV、LVESV、RVEDV及RVESV差异均无统计学意义(P均>0.05),左、右心室FS、EF及SV均降低(P均<0.05),LVDD/RVDD明显升高(P均<0.01)。CTD组中,RVEDV高于LVEDV(P<0.05),左心室SV及EF均低于右心室(P均<0.05)。结论CTD在产前即可对胎儿心功能造成影响,右心室功能有代偿性增强表现,而右心扩大不明显。

产前超声心动图对胎儿心脏圆锥动脉干畸形的诊断价值

目的评价产前超声心动图检查在诊断胎儿心脏圆锥动脉干畸形的临床价值。方法以海南省人民医院62例产前超声心动图诊断胎儿心脏圆锥动脉干畸形的孕妇为研究对象,回顾性分析胎儿心脏圆锥动脉干畸形的发病特征。结果 62例胎儿心脏圆锥动脉干畸形中24例为共同动脉干,14例为法洛氏四联征,12例为心室双出口,12例为大动脉转位。其中14例法洛氏四联征和4例大动脉转位未合并其他畸形,其余44例均合并各种心脏畸形。结论产前超声心动图可以明确诊断大部分胎儿心脏圆锥动脉干畸形病变,帮助临床医生在产前评估胎儿出生后的手术效果及远期预后,对孕妇选择是否终止妊娠具有很大的现实意义。

产前超声多切面并节段分析法筛查胎儿圆锥动脉干畸形的应用价值

目的:探讨产前超声多切面并节段分析法筛查胎儿圆锥动脉干畸形的应用价值。方法:回顾性分析2013年1月~2016年10月我院应用多切面并节段分析法检出40例胎儿圆锥动脉干畸形的声像图特征。结果:产前超声诊断法洛四联症(TOF)10例,大动脉转位(TGA)8例,右室双出口(DORV)12例,永存动脉干(PTA)10例。40例均经我科三名副主任以上医师会诊,18例我院引产后部分经病理解剖证实,1例足月分娩后超声心动图证实,外院引产21例。结论:产前多切面并节段分析法是筛查胎儿圆锥动脉干畸形的可靠方法,具有较好的临床应用价值。

圆锥动脉干畸形的产前超声诊断研究

目的:探讨产前胎儿超声心动图诊断圆锥动脉干畸形的应用价值。方法:采用四腔心、左室流出道、右室流出道、三血管切面"四切面法",以主、肺动脉排序或内径的改变、交叉结构的消失或不显示作为疑似圆锥动脉干畸形的声像图特点,然后行详细的胎儿超声心动图检查。结果:37例疑似圆锥动脉干畸形,经详细的胎儿超声心动图检查后产前诊断圆锥动脉干畸形27例,其中法洛四联症10例,大动脉转位8例,右室双出口6例,永存动脉干3例;生后超声或尸检证实产前漏诊大动脉转位2例,法洛四联症1例;1例重症法洛四联症误诊为永存动脉干。结论:根据不同类型圆锥动脉干畸形的病理形态学特征,胎儿超声心动图对圆锥动脉干畸形的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值。

胎儿心脏圆锥动脉干畸形的非遗传相关因素分析

目的探讨胎儿圆锥动脉干畸形的母体及胎儿相关因素。方法入组2018年5月至2019年9月于首都医科大学附属北京安贞医院进行胎儿超声心动图检查、且其胎儿诊断为圆锥动脉干畸形的孕妇(胎儿异常组,n=158),并连续入组同期胎儿心脏超声提示正常的孕妇(胎儿正常组,n=485)。收集孕妇的社会人口统计学和生活方式特征以及胎儿因素。使用逐步Logistic回归分析来评估各种因素与胎儿圆锥动脉干畸形之间的关系。结果胎儿异常组孕妇年龄略低于胎儿正常组孕妇,检查时的孕周小于胎儿正常组(P均<0.05)。另外,胎儿异常组孕妇孕早期上呼吸道感染及精神应激的比例高于胎儿正常组(P均<0.05)。胎儿圆锥动脉干畸形中法洛四联症占39.2%、右室双出口18.4%、完全型大动脉转位或矫正型大动脉转位占15.8%,肺动脉闭锁合并室间隔缺损占13.9%,共同动脉干占6.3%,主动脉弓离断占6.3%。逐步Logistic回归分析显示母体孕早期上呼吸道感染(OR=1.97,95%CI:1.14~3.40,P=0.016)和精神应激(OR=3.74,95%CI:1.02~13.8,P=0.047)是胎儿圆锥动脉干畸形的独立相关因素。结论孕早期上呼吸道感染与精神应激与胎儿圆锥动脉干畸形相关。因此,对于患有这些因素的女性,应加强孕期管理和产前咨询,一定程度上可降低胎儿圆锥动脉干畸形的发生。

圆锥动脉干畸形的经胸三维超声心动图诊断

目的 探讨圆锥动脉干畸形 (CTD)的经胸三维超声 (3DTTE)诊断价值并确定有意义的 3D图像。方法 用HP 5 5 0 0型超声仪和TOMTEC工作站对CTD作 3DTTE检查 ,与心血管造影或手术对照。结果 3 2 /3 6例 (88.89% )三维重构成功 ,纠正二维超声诊断 6/3 2例 (18.75 % ) ,经造影证实。其中 16例手术 ,3D诊断与手术一致。并确定心脏四腔观(H) ,房、室间隔左心或右心观 (L1a或L2a) ,瓣膜俯视或仰视观 (S1a或S2a)等剖视面对CTD有诊断意义。结论 3DTTE能对CTD作出较准确的三维空间诊断。

婴幼儿圆锥动脉干畸形合并单支冠脉的MSCT诊断

目的:研究婴幼儿圆锥动脉干畸形合并单支冠脉的类型、发生率、构成比,探讨单支冠脉异位起源MSCT心脏成像诊断对术前计划制定的重要性。方法:回顾性分析421例经手术证实的婴幼儿圆锥动脉干畸形,所有患儿均行MSCT心脏成像,并记录圆锥动脉干畸形的类型、单支冠脉的类型及数量。对不同类型圆锥动脉干畸形合并单支冠脉的发生率及构成比分别采用行×列Pearson卡方检验进行比较。与手术结果对照,探讨术前MSCT心脏成像诊断对术前计划制定的重要性。结果:婴幼儿圆锥动脉干畸形共421例,合并单支冠脉者43例,平均发病率为10.2%,其中肺动脉闭锁PA11例,大动脉转位TGA11例,法洛氏四联症TOF4例,永存动脉干PTA3例,右室双出口DORV14例。在本组圆锥动脉干畸形合并单支冠脉中,主动脉与肺动脉间走行(Ⅱb)最多,占51%;其次为走行于右心室圆锥部或肺动脉前(Ⅱa),占28%;单支冠脉起源于右窦(Ⅲ)占14%;单支冠脉远段延续为对侧冠状动脉(Ⅰ)为5%;单支冠脉走行于主动脉根后部(Ⅱp)最少,占2%。对不同的先天性心脏病单支冠状动脉类型构成比行Pearson卡方检验,卡方值为20.805,P=0.186,说明不同类型先天性心脏病的单支冠状动脉类型构成比差异无统计学意义,可以认为不同类型圆锥动脉干畸形合并单支冠脉类型的构成比不全相同,但是Ⅱb型构成比高达51%。本研究单支冠状动脉畸形发生率由高到低依次为DORV(18.4%)>PTA(14.3%)>TGA(13.8%)>PA(10.4%)>TOF(2.9%)。结论:不同类型圆锥动脉干畸形合并单支冠脉的发生率及构成比不同,Ⅱb型构成比高达51%,我们应该更多地关注圆锥动脉干畸形合并单支冠脉走行于主动脉与肺动脉间的患儿,尤其是右心双出口类型。

TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的相关研究

心脏圆锥动脉干畸形是婴幼儿期常见的青紫型先天性心脏病,主要由于胚胎期心脏发育异常所致。现综述TBX1基因在心脏发育过程中的作用以及可能的作用机制等国内外近几年的研究进展,旨在揭示TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的关联。

圆锥动脉干畸形的产前超声诊断分析

目的 探究圆锥动脉干畸形的产前超声诊断的思路、特征以及有效扫查切面.方法 以2010年3月至2014年4月于本院进行圆锥动脉干畸形的产前超声检查的孕妇68例作为研究的对象,分析圆锥动脉干畸形的产前超声诊断的形态和声像学特点.结果 经超声产前诊断：20例TOF、12例D-TGA、30例DORV、6例PA/VSD、PTA;合并心内畸形9例,合并心外畸形共有22例.确定了发生不同畸形类别、圆锥形态及大动脉连接间关系,分析了其畸形的形态声像学特点以及合并畸形的种类.结论 通过超声心电图可以直接评估大动脉及心室之间的连接关系、肺动脉下圆锥的有无等CTD的病理学形态特征,具有非常重要的临床应用意义.

时间-空间关联成像技术在胎儿圆锥动脉干畸形诊断的应用进展

常规超声心动图能够明确直观而简洁地描述心脏结构异常,是提示胎儿心脏畸形的重要手段。但是二维超声心动图提供的只是容积图像的平面化信息,对胎儿圆锥动脉干等大血管的形态结构及其位置关系很难作出立体直观的显示,较难准确判定大动脉的空间关系。文章阐述了时间-空间关联成像(STIC)技术充分利用三维的原理及空间效果、成像模式,通过高帧频采集数据,对信息进行时间和空间相关处理,直观显示心腔的空间结构,提高心室大动脉连接及位置关系的显示率及异常的发现率,从而提高疾病的检出率,弥补了常规二维超声的不足,为临床诊断及进一步治疗提供依据。

胎儿圆锥动脉干畸形的超声心动图鉴别诊断分析

目的探讨超声心动图对胎儿圆锥动脉干畸形的诊断价值。方法回顾性分析92例在我院经病理解剖及手术确诊为圆锥动脉干畸形患儿的产前超声检查结果;分析超声心动图诊断正确率,并比较法洛四联症、大动脉转位、右心室双出口、肺动脉闭锁伴室间隔缺损胎儿在不同方位圆锥隔偏转角、最大圆锥隔偏移距离、圆锥隔偏移面积测量值。结果超声心动图对于胎儿圆锥动脉干畸形诊断准确率为93.48%。法洛四联症、右心室双出口、肺动脉闭锁伴室间隔缺损胎儿圆锥隔偏转角度在前后剖视方位、左右剖视方位高于健康胎儿及大动脉转位胎儿,在上下剖视方位低于健康胎儿(P<0.05);大动脉转位胎儿圆锥隔偏转角在上下剖视方位低于健康胎儿(P<0.05)。法洛四联症、大动脉转位、右心室双出口、肺动脉闭锁伴室间隔缺损胎儿最大圆锥隔偏移距离在前后剖视方位、左右剖视方位、上下剖视方位均高于健康胎儿(P<0.05);右心室双出口胎儿最大圆锥隔偏移距离在前后剖视方位、左右剖视方位明显高于其他三组圆锥动脉干畸形胎儿(P<0.05)。法洛四联症、大动脉转位、右心室双出口、肺动脉闭锁伴室间隔缺损胎儿圆锥隔偏移面积在前后剖视方位、左右剖视方位均高于健康胎儿(P<0.05);肺动脉闭锁伴室间隔缺损胎儿圆锥隔偏移面积在上下剖视方位高于健康胎儿(P<0.05);右心室双出口胎儿圆锥隔偏移面积在前后剖视方位、左右剖视方位明显高于其他三组圆锥动脉干畸形胎儿(P<0.05)。结论超声心动图检查应用产前胎儿圆锥动脉干畸形的价值较高,并为圆锥动脉干畸形提供定量诊断依据,提高诊断准确性。