抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测

目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。

家庭聚集性单纯疱疹病毒1型感染3例

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type,HSV)1型和2型(分别为HSV-1和HSV-2)引起多种疾病,包括唇疱疹、生殖器疱疹、疱疹间质角膜炎、脑膜炎和脑炎。HSV-1和HSV-2通过密切接触在个体之间传播。大多数人在生命早期通过口腔黏膜获得HSV-1,而HSV-2感染发生较晚,通常通过性传播;HSV与宿主之间的相互作用,特别是与免疫系统的相互作用,决定了感染的结果。HSV感染后可表现为无症状、轻微的亦或是危及生命的。感染病毒后潜伏期长短、何时再激活、及侵犯某一部位与宿主的免疫状态密切相关[1];HSV可通过飞沫、口腔、呼吸道等方式传播,HSV在家庭成员中传播、感染不少见,但在相近时间段发病却不常见,我们报道3例家庭聚集性HSV感染的病例,旨在提高对该病的认识,减少误诊和漏诊。

猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。

千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)初探

目的 :体外测定千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用 ,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法 :用不同稀释度的千金藤素抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用 ,4 8h后观察细胞病变 (CPE)效应。结果 :千金藤素能明显抑制HSV 1对Vero细胞的致病变作用 ,使细胞存活率升高。结论 :千金藤素有较显著的抗HSV 1的作用 ,且抗病毒作用是多方面的 ,是一种具有潜在开发前景的药物。

CT灌注成像辅助诊断单纯疱疹病毒1型脑炎一例

单纯疱疹病毒性脑炎又称急性坏死性脑炎,是由疱疹病毒感染引起的脑实质炎症。CT灌注成像(CTP)可快速显示脑部组织灌注异常及脑组织受损情况,常被用于脑卒中的诊断,而被用于辅助诊断脑炎的文献报道较少。该文报道了1例通过CTP辅助诊断单纯疱疹病毒1型脑炎的59岁男性患者。该例患者起病急,突发右侧肢体抽搐伴发热,且伴有精神症状,不能配合完成MRI,故急行头颅CTP,结果显示其左侧颞叶灌注较右侧增加,不排除病毒性脑炎的诊断,遂于入院12 h内泵注阿昔洛韦抗病毒治疗及予其他对症治疗,患者病情逐渐好转。入院后3 d脑脊液病原体二代测序结果回报,明确诊断为单纯疱疹病毒1型脑炎。

单纯疱疹病毒1型感染致Mollaret脑膜炎继发癫痫发作:1例报道并文献综述

目的:报告1例单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1, HSV-1)感染致Mollaret脑膜炎(Mollaret’s meningitis)继发癫痫发作的病例,旨在提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析我院确诊的1例Mollaret脑膜炎患者的临床资料,并结合相关文献进行总结。结果:患者临床以反复发热伴头疼,及继发癫痫发作为特点,脑脊液二代测序(next-generation sequencing, NGS)检查发现HSV-1核酸序列阳性,诊断为Mollaret脑膜炎,经抗病毒及对症治疗1周后症状完全缓解。结论:Mollaret脑膜炎是临床少见疾病,由HSV-1感染更是少见,易误诊、漏诊,应提高早期识别率,减少不必要的检查及治疗。

精神分裂症合并1型单纯疱疹病毒性脑炎个案报道及文献复习

单纯疱疹病毒性脑炎是病毒直接侵犯脑组织所致的中枢神经系统感染性疾病,病变脑组织可出现水肿、坏死、软化等改变。病毒通过嗅神经或三叉神经选择性侵犯额颞叶等部位,引起一系列的临床表现。弥漫性脑损害时,更易引起精神病样症状。约1/3~1/2病例以精神障碍为首发或唯一症状,早期易误诊为其他精神疾病。该病例病史长达几十年,突然出现精神行为异常加重,且伴有意识改变,在外院长期诊断为“精神分裂症”,病情变化前规律服用抗精神病类药物治疗,入院后完善腰椎穿刺获取脑脊液送检,最后经基因检测证实为HSE 1型感染,明确诊断精神分裂症合并1型单纯疱疹病毒性脑炎。

阿昔洛韦治疗单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎小鼠血清一氧化氮、白细胞介素-1β水平变化及病理学观察

目的探讨阿昔洛韦治疗单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠血一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平变化及病理学改变。方法建立单纯疱疹病毒-1(HSV-1)感染的小鼠病毒性脑炎模型,将模型分为未治疗和阿昔洛韦治疗组,同时设正常对照组,比较各组小鼠病死率、血清NO、IL-1β水平变化和电镜下小鼠神经细胞形态结构变化。结果模型组小鼠脑组织HSV-1DNA均为阳性,正常对照组为阴性;电镜下模型组神经细胞内可见HSV-1病毒颗粒;阿昔洛韦治疗组小鼠死亡率、血清NO及IL-1β水平均比未治疗组明显降低,差异有显著性(Pa<0.01);电镜下阿昔洛韦治疗组小鼠神经细胞,髓鞘病变均较轻。结论阿昔洛韦可能通过降低单纯疱珍病毒Ⅰ型脑炎小鼠血清NO、IL-Iβ水平,减轻神经细胞的炎症反应及细胞因子引起的神经毒性作用,达到对神经细胞的保护作用。

细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用

基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量(TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(CPE)等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与ERK通路的关系.结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.

红树林真菌PH0016胞外多糖对单纯疱疹病毒Ⅰ型活性的影响

目的探讨真菌菌株PH0016的胞外多糖(EPS)抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的活性及机制。方法对分离自海南红树林的一株真菌菌株行菌株鉴定和ITS序列分析;对其产生的EPS行体外、体内细胞毒性实验和抗HSV-1作用观察。结果菌株初步鉴定为淡紫色拟青霉菌。EPS可抑制HSV-1病毒活性,其对HSV-1感染细胞病变的半抑制浓度(IC50)为195μg/mL,SI为11.45。EPS可明显提高小鼠HSV-1感染小鼠的存活率及存活时间。结论自海南红树林中分离一株真菌菌株PH0016,属淡紫色拟青霉菌;其产生的胞外多糖具有抗HSV-1活性,值得进一步研究。

单纯疱疹病毒Ⅰ型SM_（44）株和17Syn~＋株用作跨神经元追踪示踪物的实验研究

单纯疱疹病毒Ⅰ型已被证明是一个很有前途的跨神经元追踪示踪物。它可被轴突顺行或／和逆行运输，还可被跨神经元传递；病毒的株不同，其运输方向亦可不同。本文研究了此病毒ＳＭ４４株和１７ｙｎ＋株在鼠脑内跨神经元传递的方向性和可靠性。结果提示：此两株病毒均能被跨神经元传递，并且以顺行跨神经元传递为主，因而可被作为示踪物用于跨神经元追踪研究。

抗生素S_(632)A_3在体外抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型(HSV-1)作用的初步研究

目的 :体外测定抗生素S632A3 抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型的作用 ,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法 :用不同稀释度的抗生素S632A3 抑制3种肠道病毒及单纯疱疹病毒I型对Vero细胞的感染作用 ,48h后观察细胞病变效应 ,并用MTT法测定细胞活性。结果 :抗生素S632A3 能明显抑制肠道病毒及疱疹病毒对Vero细胞的致病变作用 ,使细胞存活率升高。结论 :该药物有较显著的抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型的作用 ,且对细胞的毒性很低 ,是一种具有潜在开发前景的药物。

中草药抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）的实验研究Ⅱ

中草药抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的实验研究Ⅱ傅强，郑民实（微生物学教研究，江西医学院微生物学教研室）关键词单纯疱疹病毒Ⅰ型；中草药；动物试验中国号Ｒ９６５．１单纯疮疹病毒性角膜炎（ＨＳＫ）是眼科常见的病毒性传染病，临床上使用的化学合成药每因毒、...

幼儿毛发红糠疹并发单纯疱疹病毒Ⅰ型感染1例

患儿女，35个月。因全身起红疹、脱屑2周余于2010年11月22日来我院就诊。患儿家长述20d前发现其口周有小水疱，口腔内有2处溃疡，同时掌跖部有红斑就诊于当地社区医院，疑诊为“手足口病”，

人中性粒细胞多肽HNP_(1,3)体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用。MTT法检测各药物对细胞的毒性作用。结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(EC50)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC50为0.68μg/mL。MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性。以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成。

更昔洛韦治疗单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎小鼠血清一氧化氮、白细胞介素-1β的变化及病理学观察

目的:探讨更昔洛韦治疗单纯疱疹病毒性脑炎小鼠血一氧化氮、白细胞介素-1β水平变化及病理学改变。方法:建立单纯疱疹病毒-1感染的小鼠病毒性脑炎模型,将模型分为模型组、阿昔洛韦治疗组和更昔洛韦治疗组,同时设正常对照组,比较各组小鼠病死率、血清一氧化氮、白细胞介素-1β水平变化和电镜下小鼠神经细胞形态结构变化。结果:模型组小鼠脑组织单纯疱疹病毒-1DNA均为阳性,正常对照组为阴性;电镜下模型组神经细胞内可见单纯疱疹病毒-1病毒颗粒;阿昔洛韦治疗组和更昔洛韦治疗组小鼠死亡率、血清一氧化氮及白细胞介素-1β水平均比未治疗组明显降低,差异有显著性(P﹤0.01);更昔洛韦治疗组白细胞介素-1β下降水平较阿昔洛韦治疗组明显(P<0.01)。电镜下更昔洛韦治疗组小鼠神经细胞,髓鞘病变均较轻。结论:更昔洛韦可能通过降低单纯疱珍病毒-Ⅰ型脑炎小鼠血清一氧化氮、白细胞介素-1β水平,且降低白细胞介素-1β水平的作用较阿昔洛韦明显,减轻神经细胞的炎症反应及细胞因子引起的神经毒性作用达到对神经细胞的保护作用。

单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎细胞凋亡与TGF-β_1表达的关系

目的 探讨小鼠单纯疱疹病毒 型心肌炎细胞凋亡与转化生长因子β1 (TGF- β1 )表达的关系。方法 通过给BAL B/ C小鼠腹腔接种单纯疱疹病毒 型(HSV- 1)诱发病毒性心肌炎(VMC) ,感染病毒3～35天,VMC检出率为91.6 7%。应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术检测VMC小鼠心肌细胞中凋亡细胞的出现情况及TGF-β1 的表达情况。结果 78.33%感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞,71.6 7%有TGF-β1 表达,二者之间分布区域一致。结论 细胞凋亡可能参与HSV- 1诱导的VMC发生、发展,而TGF-β1 可能参与VMC细胞凋亡的调控。

肿瘤坏死因子1/2型受体在单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的急性视网膜坏死中的作用

目的研究肿瘤坏死因子1/2型受体(TNFR1/2)在单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的急性视网膜坏死中的作用。方法选取3×10~4pfu H129感染野生型C57BL/6、TNFR1缺陷、TNFR2缺陷小鼠各10只,病毒同样注射到一侧眼前房。每天观察小鼠状态,记录死亡小鼠数量,至第9天为止,计算小鼠死亡率;Western blot法检测cleaved caspase 3、NF-κB在小鼠中的表达;FACS法检测TNFR缺陷小鼠免疫细胞占总细胞的百分率。结果第8天TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠的死亡率依次为100%和60%,均高于野生型C57BL/6小鼠的死亡率(30%)。在病程第3、5天,TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠中cleaved caspase 3的表达量显著高于野生型C57BL/6小鼠(P<0.05);NF-κB的表达量在野生型小鼠注射眼中随病程的推进而增加,但在TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠中无显著变化。HSV-1 H129感染TNFR1缺陷小鼠第5天,注射眼中CD4^+T细胞较野生型C57BL/6小鼠增加(P<0.05),Mac-1^+巨噬细胞/小胶质细胞较野生型C57BL/6小鼠明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);NK细胞和CD8^+T细胞与野生型C57BL/6小鼠相比较差异无统计学意义(P>0.05)。HSV-1 H129感染TNFR2缺陷小鼠第5天,注射眼中NK细胞、CD8^+T细胞、CD4^+T细胞和Mac-1^+巨噬细胞/小胶质细胞与野生型C57BL/6小鼠相比较差异均无显著性统计学意义(P>0.05)。结论 TNFR1或TNFR2的缺陷均能引起HSV-1 H129感染C57BL/6小鼠注射眼视网膜细胞凋亡的增加和免疫反应紊乱。

载脂蛋白E4通过脑内CD1-NKT促进单纯疱疹病毒Ⅰ型感染诱导的Aβ沉积和炎症反应

目的阿尔茨海默病(AD)是一种老年人常见的神经退行性疾病,其发病机制尚不清楚。载脂蛋白Eε4(APOE4)等位基因是目前唯一公认的散发性AD的高风险遗传因素。流行病学和临床研究提示,单纯疱疹病毒I型(HSV-1)感染与AD发病有关,并且HSV-1感染在APOE4基因携带者AD患病风险最高,提示APOE4基因型影响HSV-1感染诱发AD发病。本课题旨在研究APOE4对HSV-1经鼻感染诱发的脑内HSV-1病毒载量、Aβ沉积及神经免疫的影响。方法 HSV-1分别经鼻感染9月龄雌性APOE4-和APOE3-TR小鼠,分别应用PCR技术和Western蛋白印迹法检测并比较小鼠脑内HSV-1DNA,HSV 1病毒g C包膜糖蛋白水平;应用Western蛋白印迹法和ELISA检测并比较脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)及TNF-α,IL-6等炎症因子的表达;应用DAB免疫组化和免疫荧光染色检测小胶质细胞,免疫荧光染色检测脑内NKT细胞,Western蛋白印迹法和流式细胞技术分别检测小鼠脑内CD1d蛋白和CD1阳性细胞。结果小鼠HSV-1经鼻感染7 d后,在嗅球、皮质、海马等脑组织均能检测到病毒DNA和g C蛋白,并且APOE4-TR小鼠脑内HSV-1病毒载量明显多于APOE3-TR小鼠;APOE4-TR小鼠脑内APP的表达和Aβ蛋白水平也明显高于APOE4-TR小鼠。免疫组化及ELISA检测显示,HSV-1感染后小鼠脑内小胶质细胞激活,TNF-α和IL-6炎症因子水平明显增加,并且APOE4-TR小鼠脑内炎症因子水平增加更为明显;而HSV-1感染后APOE3-TR小鼠脑内CD1水平的增加比APOE4-TR更为明显,APOE3-TR小鼠脑内也更易在检测到NK T细胞存在。结论 APOE4促进脑组织内HSV-1病毒载量、Aβ沉积及小胶质细胞分泌炎症因子,却减弱脑内CD1和NK T细胞参与的免疫应答反应。提示APOE4促进HSV-1感染诱发AD可能与CD1和NK T细胞参与的免疫应答异常有关。