抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测

目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。

单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

家庭聚集性单纯疱疹病毒1型感染3例

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type,HSV)1型和2型(分别为HSV-1和HSV-2)引起多种疾病,包括唇疱疹、生殖器疱疹、疱疹间质角膜炎、脑膜炎和脑炎。HSV-1和HSV-2通过密切接触在个体之间传播。大多数人在生命早期通过口腔黏膜获得HSV-1,而HSV-2感染发生较晚,通常通过性传播;HSV与宿主之间的相互作用,特别是与免疫系统的相互作用,决定了感染的结果。HSV感染后可表现为无症状、轻微的亦或是危及生命的。感染病毒后潜伏期长短、何时再激活、及侵犯某一部位与宿主的免疫状态密切相关[1];HSV可通过飞沫、口腔、呼吸道等方式传播,HSV在家庭成员中传播、感染不少见,但在相近时间段发病却不常见,我们报道3例家庭聚集性HSV感染的病例,旨在提高对该病的认识,减少误诊和漏诊。

CT灌注成像辅助诊断单纯疱疹病毒1型脑炎一例

单纯疱疹病毒性脑炎又称急性坏死性脑炎,是由疱疹病毒感染引起的脑实质炎症。CT灌注成像(CTP)可快速显示脑部组织灌注异常及脑组织受损情况,常被用于脑卒中的诊断,而被用于辅助诊断脑炎的文献报道较少。该文报道了1例通过CTP辅助诊断单纯疱疹病毒1型脑炎的59岁男性患者。该例患者起病急,突发右侧肢体抽搐伴发热,且伴有精神症状,不能配合完成MRI,故急行头颅CTP,结果显示其左侧颞叶灌注较右侧增加,不排除病毒性脑炎的诊断,遂于入院12 h内泵注阿昔洛韦抗病毒治疗及予其他对症治疗,患者病情逐渐好转。入院后3 d脑脊液病原体二代测序结果回报,明确诊断为单纯疱疹病毒1型脑炎。

ELISA法检测单纯疱疹病毒Ⅱ型特异性抗体的临床应用研究

目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV 2)感染的早期特异检测手段。方法对52例性病门诊的生殖器疱疹患者用改良的ELISA方法进行了HSV gD2IgG检测并同细胞分离方法进行对比观察。结果病毒分离的阳性率为69.2 % ,ELISA法检测抗体的阳性率为65 % ,两种方法检测结果差异无显著性。结论ELISA法检测血清疱疹病毒IgG抗体具有简便 ,快速 ,特异的优点 ,适合于临床大规模检测之用。

乙酰紫草素体外抗2型单纯疱疹病毒机理的研究

目的研究乙酰紫草素(acetylshikonin,AS)体外抗2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)的活性及作用机理。方法以阿昔洛韦(acyclovir,ACV)为阳性对照药物,采用CCK-8法检测细胞活力,确定AS对成年非洲绿猴肾细胞(Vero)的最大无毒浓度;致细胞病变法和噬斑形成抑制实验测定AS对HSV-2的抗病毒活性;实时荧光定量PCR及半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)法测定病毒载量以评估AS对HSV-2复制周期不同阶段的抑制作用;透射电镜观察AS对HSV-2病毒粒子结构的影响。结果AS对Vero细胞的最大无毒浓度(maximal atoxic concentration,TC0)为3.785μmol/L,浓度为1.678~3.785μmol/L时能有效抑制HSV-2复制,减少噬斑形成,半数有效浓度(50%effective concentration,EC50)为0.334μmol/L。在12和36 h,病毒释放期加入AS的实验组TCID50低于病毒感染对照组(13.43±10.04 vs.127.00±0.32;3.47±0.55 vs.5.80±0.12),差异均有统计学意义(t=8.359、4.161,P均<0.05);在12、24、36 h,AS直接灭活病毒组病毒载量低于病毒感染对照组(0.24±0.09 vs.1.35±0.07;4.46±0.06 vs.6.75±0.04;2.70±0.04 vs.5.27±0.10),差异均有统计学意义(t=9.920、33.360、24.020,P均<0.05)。此外,AS处理可导致HSV-2病毒粒子形态异常,随着AS浓度升高,作用后的HSV-2超微结构发生渐进改变。结论AS对HSV-2具有一定抗病毒效应,其机理可能为直接破坏病毒颗粒完整结构发挥抗病毒作用。

单纯疱疹病毒Ⅰ型与阿尔茨海默病相关性及中药抗单纯疱疹病毒Ⅰ型感染研究进展

目的对单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-1)与阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)的病理关系、可能机制及中药抗HSV-1感染研究进行综述。方法检索CNKI和PubMed数据库,收集1990年1月1日至2022年5月30日中医、西医关于HSV-1与阿尔茨海默病关系研究及中药防治HSV-1研究的报道。结果HSV-1反复感染可诱导β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)累积和微管相关蛋白磷酸化(Tau protein phosphorylation,p-Tau)表达增加;ApoE4基因有利于HSV-1进入大脑增加HSV-1诱发AD的风险,Aβ可能是一种诱捕HSV-1的抗菌肽;研究发现多种中药单体或复方具有较好的抗HSV-1作用。结论HSV-1感染可能是阿尔茨海默病发生发展的因素之一,其机制可能与Aβ诱捕HSV-1病毒有关,ApoE4基因增加了HSV-1诱发AD的风险,目前中药抗HSV-1感染研究已取得了一定进展,为从中药筛选抗HSV-1新药提供了有力支撑。

单纯疱疹病毒1型感染致Mollaret脑膜炎继发癫痫发作:1例报道并文献综述

目的:报告1例单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1, HSV-1)感染致Mollaret脑膜炎(Mollaret’s meningitis)继发癫痫发作的病例,旨在提高临床医生对该病的认识。方法:回顾性分析我院确诊的1例Mollaret脑膜炎患者的临床资料,并结合相关文献进行总结。结果:患者临床以反复发热伴头疼,及继发癫痫发作为特点,脑脊液二代测序(next-generation sequencing, NGS)检查发现HSV-1核酸序列阳性,诊断为Mollaret脑膜炎,经抗病毒及对症治疗1周后症状完全缓解。结论:Mollaret脑膜炎是临床少见疾病,由HSV-1感染更是少见,易误诊、漏诊,应提高早期识别率,减少不必要的检查及治疗。

新入伍人群单纯疱疹病毒Ⅰ型血清抗体检测分析

目的了解入伍新兵人群中单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染IgG抗体的流行分布,为预防提供科学依据。方法利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对本区近4年来自8个省市的360名入伍新兵血清进行HSV-ⅠIgG抗体检测。结果2002,2004,2006,2008年各年入伍新兵血清HSV-ⅠIgG抗体阳性率呈下降趋势,分别为90.00%,86.67%,85.55%,84.44%,平均86.67%;地区间差别明显,广西(96.00%)和江苏(92.98%)较高,甘肃(74.42%)和湖北(78.13%)较低;入伍前工作与否者的抗体阳性检出率差异无统计学意义。结论入伍新兵人群中HSV-Ⅰ感染水平较高,呈逐年降低趋势并有非常显著性地区差异;新兵入伍期间,应采取健康教育等有效预防措施,降低人群HSV-Ⅰ感染水平。

生殖器溃疡中单纯疱疹病毒的检测和分型

目的 : 了解性病门诊生殖器溃疡患者中单纯疱疹病毒 (HSV)感染情况 ,并评价聚合酶链反应 (PCR) 微孔板反向杂交检测和分型方法在生殖器疱疹诊断中的意义。方法 : 采用病毒分离培养、普通PCR和PCR 微孔板反向杂交法同时对 2 0 0份生殖器溃疡标本作了HSV检测与分型。结果 : PCR 微孔板反向杂交法的敏感性和特异性分别为 98.1%和 95 .9% ,PCR 微孔板杂交法分型结果与病毒分离培养法和普遍PCR的分型结果完全相符。生殖器溃疡中HSV检出率为 3 0 % (60 / 2 0 0 ) ,其中HSV 2感染占 96.7% (5 8/ 60 )。结论 : HSV 2是性病门诊患者生殖器溃疡的主要病因之一 ,PCR 微孔板反向杂交法是一种适用生殖器溃疡标本中HSV的检测与分型的快速。

抗原捕获聚合酶链反应分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒

目的 : 建立直接分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒 (HSV)的抗原捕获聚合酶链反应 (AC -PCR)。方法 : 用抗HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体 ,包被聚苯乙烯离心管 ,捕获HSV ,同时加入 3个引物 :HSV - 1 HSV - 2型共同性上游引物及HSV - 1和HSV - 2型特异性下游引物 ,进行PCR扩增。结果 :HSV - 1和HSV - 2标准病毒株均分别扩增出与设计大小相符的 4 77bp和 399bpDNA条带。AC -PCR可检测到 10PFUHSV - 1和 1PFUHSV - 2。用AC -PCR检测了 36 5份妇女生殖器拭子标本 ,阳性 10 1例(2 7.7% ) ,2 3例为HSV - 1(占 2 2 .8% ) ,78例为HSV - 2 (占 77.2 % ) ;其中 112份标本同时用AC -PCR和分离培养法检测 ,AC -PCR的阳性率为 2 6 .8% (30 112 ) ,分离培养法的阳性率为 2 0 .5 % (2 3 112 ) ,两者差异有显著性 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论 : AC -PCR是特异、敏感。

汕头市部分人群单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体检测

人类单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)主要感染腰部以下部位,在性传播疾病(下简称性病)中占有重要地位.为了解汕头市人群中HSV-Ⅱ感染情况,收集了部分人群做了HSV-Ⅱ抗体检测,报告如下.

荧光恒温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型RNA方法的建立

目的利用荧光恒温扩增技术(SAT)建立一种快速、可靠的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)检测方法。方法根据Genbank上获取HSV-1开放读码框Us5区域的RNA序列设计扩增引物及优化探针,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对HSV-1 RNA进行核酸扩增,同时利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪进行实时荧光信号收集和检测。收集儿童病毒性脑炎或疑似患儿样本212份(脑脊液样本150份、血浆样本62份),以巢式PCR+测序为参比方法,对SAT结果进行Kappa一致性分析。结果 SAT检测HSV-1 RNA的灵敏度为100拷贝/μL,采用SAT检测212份临床样本,共检测出18例HSV-1阳性样本,巢式PCR检出16例阳性,经测序证实其中12例为阳性结果。SAT与巢式PCR+测序方法的Kappa值为0.785,其敏感性为100.0%、特异性为97.0%。结论建立的SAT检测脑脊液和血浆中HSV-1 RNA的方法具有敏感性高、特异性强、准确、快速、可靠的优点,适用于临床对单纯疱疹病毒性脑炎早期的快速诊断。

应用ELISA方法检测单纯疱疹病毒-Ⅱ型抗体的研究

目的了解广东省汕头市人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染状况。方法采用ELISA方法检测HSV-ⅡIgM和IgG抗体。结果性传播疾病(性病)患者的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为16.2%(88/544),HSV-ⅡIgG为62.9%(324/544);正常对照组的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为3.3%(2/60)、HSV-ⅡIgG为41.7%(25/60)。两组的阳性检出率,患者组明显高于对照组(P<0.01)。结论不同人群HSV的感染状况不同;正常人群中存在HSV-Ⅱ感染,HSV-Ⅱ是性病的重要病原体之一。

妊娠期单纯疱疹病毒分型检测应用进展

单纯疱疹病毒（ herpes simplex virus，HSV）是人类病毒性疾病中常见的病原体之一［1］，属于疱疹病毒科α病毒亚科双链DNA病毒，呈球形，完整病毒由核心、衣壳、被膜及囊膜组成［2］。当孕妇感染这种病原体后，可以不表现出明显症状，但会引起习惯性流产、死胎、死产，以及胎儿先天缺陷或发育异常等不良妊娠结局［3，4］。随着围生医学的不断发展，优生优育越来越受到人们的重视，而HSV病毒感染也正是围产医学与优生遗传医学研究的重要内容之一［5］。目前HSV病毒感染有上升趋势，因此实验室HSV病毒抗体检测对临床诊断及预防不良妊娠至关重要。为此，笔者就实验室血清HSV1／2型特异性抗体IgG、IgM检测结果在妊娠期间的应用进展做一综述。

定量PCR检测黄芪A_6组分与无环鸟苷联合抗1型单纯疱疹病毒的协同作用

目的 :探讨抗疱疹病毒药物黄芪A6 组分(A6)和无环鸟苷(ACV)联合抗 1型单纯疱疹病毒(HSV1 )的作用机制。方法 :利用竞争PCR检测A6 和ACV联合抗HSV1 的协同作用 ,并与细胞病变(CPE)抑制法进行比较。结果 :竞争PCR测定A6、ACV和A6+ACV对HSV1 的最小抑制浓度(MIC)分别为 1 88mg/ml、3 3 7μg/ml和 0 47mg/ml+ 0 84μg/ml;CPE抑制法测定A6、ACV和A6+ACV对HSV1 的MIC分别为 6 2 5mg/ml、5 0 μg/ml和 0 94mg/ml+ 1 2 5 μg/ml;联合抑制指数的分数(FICI)均小于 0 5 ;显示明显的联合协同抑制作用。结论 :定量PCR是筛选抗病毒药物的有效方法 ;结果还表明A6 和ACV对HSV1 的抑制作用主要表现在病毒增殖周期的复制阶段。

精神分裂症合并1型单纯疱疹病毒性脑炎个案报道及文献复习

单纯疱疹病毒性脑炎是病毒直接侵犯脑组织所致的中枢神经系统感染性疾病,病变脑组织可出现水肿、坏死、软化等改变。病毒通过嗅神经或三叉神经选择性侵犯额颞叶等部位,引起一系列的临床表现。弥漫性脑损害时,更易引起精神病样症状。约1/3~1/2病例以精神障碍为首发或唯一症状,早期易误诊为其他精神疾病。该病例病史长达几十年,突然出现精神行为异常加重,且伴有意识改变,在外院长期诊断为“精神分裂症”,病情变化前规律服用抗精神病类药物治疗,入院后完善腰椎穿刺获取脑脊液送检,最后经基因检测证实为HSE 1型感染,明确诊断精神分裂症合并1型单纯疱疹病毒性脑炎。

牙源性粘液瘤中单纯疱疹病毒Ⅰ型的检测

研究目的：探索ＨＳＶ－Ⅰ与牙源性粘液瘤发生发展之间的关系。研究方法：利用敏感性高的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１７例牙源性粘液瘤中ＨＳＶ－Ⅰ的表达。结果：１７例牙源性粘液瘤中均未能扩增出与ＨＳＶ－Ⅰ同源的ＤＮＡ序列。结论：牙源性粘液瘤的发生发展与ＨＳＶ－Ⅰ的感染关系不大。