全反式维甲酸增强携单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因的超声微泡对SMMC-7721细胞的旁观者效应

目的观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶/丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响。方法免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达;将含有HSV-TK基因的质粒通过静电吸附在脂质微泡表面上,采用超声辐照转染并用倒置显微荧光镜及RT-PCR观察TK基因的转入及表达;MTT法观察经全反式维甲酸诱导后HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应。结果经全反式维甲酸诱导后SMMC-7721细胞膜上Cx32表达明显增加,而胞质内仅少量表达;通过超声辐照后HSV-TK基因可顺利转入SMMC-7721细胞中并稳定表达;与对照组相比,经全反式维甲酸诱导组可明显提高HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应(P<0.05)。结论全反式维甲酸可提高SMMC-7721细胞中连接蛋白Cx32的表达且能正确定位于细胞膜上,这可能与其能增强HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应有关。

HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究

目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。