单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

白介素2基因佐剂协同单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗免疫诱导的特异性免疫应答

目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定其表达。动物实验分为pcDNA3.1空载体对照组、pgD单独免疫组和pgD+pIL-2联合免疫组3组,具体为通过肌肉免疫接种BALB/c小鼠3次,间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体滴度并做亚型分析,利用3H-TdR掺入法进行Th细胞增殖实验,ELISA试剂盒检测Th细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-10水平,耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)反应;HSV-1病毒角膜攻击后,裂隙灯显微镜观察角膜上皮病变。结果与pgD单独免疫组相比,pIL-2的协同免疫可以显著提高IgG2a抗体滴度、Th细胞增殖反应和DTH反应,Th细胞分泌IL-2和IFN-γ水平也显著提高,IL-10水平明显下降。在动物保护实验中,pIL-2的协同免疫明显增强了pgD疫苗在病毒攻击时对角膜的保护效果。结论IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高pgD核酸疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,增加核酸疫苗的免疫保护效果。

单纯疱疹病毒II型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究

目的探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响。方法用构建的HSV-2pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gDIgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL-4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群。结果HSV-2pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL-4,诱导CD4+,CD8+T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2gD特异性抗体的产生。其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4+,CD8+T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组。结论CTL表位对单纯疱疹II型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用。

单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。

生命泉膏滋抗实验小鼠阴道单纯疱疹病毒2型感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道 HSV- 2感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后动物的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL 高、中剂量组 ,[8.33、1.6 7、0 .34 g/ (kg.d) ]能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 HSV- 2感染。

CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究

目的研究重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pc DNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒p CD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组p K组、pg D组、pc CD40L+pg D组和p K+pg D组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 Ig G抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4+和CD8+T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。结果 (1)体外实验结果:重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pc DNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 Ig G水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4+T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pc DNA3-Kan/CD40L+pg D组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。结论 (1)重组质粒pc DNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pc DNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。

真核质粒IL-2协同单纯疱疹病毒糖蛋白B基因疫苗免疫作用的研究

目的:探讨IL-2真核表达质粒(pcIL-2)协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白B(gB)基因疫苗(pgB)对机体免疫应答的作用。方法:利用已构建具有生物活性的IL-2真核表达质粒(pcIL-2)及单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白B(gB)真核表达质粒(pgB)免疫小鼠,通过双侧股四头肌多点注射免疫BALB/c小鼠,共重复接种3次,每次间隔2周;末次免疫4周后取血进行检测。通过中和试验、ELISA、耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)方法检测pgB质粒单独免疫和pcIL-2质粒协同免疫诱导产生的免疫效果,并通过病毒攻击实验观察各组小鼠的生存情况。结果:与pgB单独免疫相比,pcIL-2的协同免疫使实验小鼠对HSV-1特异性抗体的产生显著增加,明显增强了对病毒的攻击免疫保护作用。结论:pcIL-2基因佐剂可提高pgB基因疫苗的免疫水平,全面增强小鼠对核酸疫苗的免疫应答,增强基因疫苗对机体的免疫保护效果。

单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27重组真核表达质粒的构建及表达

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27。方法通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接。通过双酶切和测序鉴定重组质粒是否构建成功,Western blot法鉴定重组质粒在真核细胞COS-7中表达。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27构建成功,可在COS-7中表达。结论成功构建了可在真核细胞内表达的pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒,为下一步研究该重组质粒作为DNA疫苗的免疫学效应奠定了基础。

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白,存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.490～0.564遗传单位之间,与已报道的HSV-2蛋白编码基因无重叠,因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。

单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gG-2相关研究进展

本文综述了单纯疱疹Ⅱ型的包膜糖蛋白 gG 2作为抗原在HSV 2血清学诊断分型脐包膜糖白 gG

单纯疱疹病毒2型对鼠抗原呈递细胞分泌IL-6影响的研究

目的探讨单纯疱疹病毒2型(HSV2)对鼠抗原呈递细胞(DC2.4、RAW264.7株)分泌白介素6(IL6)的影响及意义。方法用HSV2感染和/或脂多糖刺激DC2.4、RAW264.7株,ELISA法测定IL6分泌水平的变化。结果HSV2感染能促进两种细胞IL6的分泌,不能抑制脂多糖刺激细胞后IL6的分泌。结论HSV2感染促进DC2.4、RAW264.7细胞分泌IL6,使免疫反应趋向于Th2型免疫应答,可能为HSV2感染发生免疫逃避的机制之一。

WONCA研究论文摘要汇编(五十七)——有症状及无症状2型单纯疱疹病毒感染者生殖器单纯疱疹病毒脱落

背景自商业提供了2型单纯疱疹病毒(HSV-2)抗体检测以来,经血清学检测所了解的患有生殖器疱疹的人数有所增多。血清阳性无症状者的HSV-2自然史病程尚不清楚。目的评估有症状及无症状HSV-2感染者生殖器HSV病毒脱落及临床过程。设计、设施和受试者将1992年3月至2008年4月,美国华盛顿大学西雅图病毒研究诊所及奥勒冈州波特兰韦斯托弗高地诊所,498例免疫活性HSV-2血清阳性者纳入前瞻性研究。每位参试者自用拭子采集生殖器分泌物至少30 d。主要结果测量对生殖器拭子HSV-DNA做实时荧光定量聚合酶链反应检测病毒脱落率。结果 将410例有症状HSV-2感染者生殖器4 753/23 683 d检出HSV-2[20.1%,95%CI(18.3%,22.0%)]与88例无症状感染者519/5 070 d进行比较(P<0.001)。临床症状不明显者比无症状感染者病毒脱落率要高,2 708/20 735 d[13.1%,95%CI(11.5%,14.6%)]对434/4 929 d[8.8%,95%CI(6.3%,11.5%)](P<0.001)。然而,亚临床症状脱落发生时HSV检出量相似,有症状感染组中位数4.3(四分位间距,3.1～5.6)log10 copies对无症状感染组4.2(四分位间距,2.9～5.5)(P=0.27)。有生殖器病毒脱落计算病变天数,有症状生殖器HSV-2感染者为2 045/4 753 d[43.0%,95%CI(39.8%,46.5%)]与无症状感染者85/519 d[16.4%,95%CI(11.2%,23.9%)]相比(P<0.001)。结论 与有症状感染者相比,无症状HSV-2感染者生殖道内病毒脱落频次要少,但由于病毒脱落伴发于病变,所致差异大部分可归因于生殖器发生的病变少所致。

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。

应用ELISA方法检测单纯疱疹病毒-Ⅱ型抗体的研究

目的了解广东省汕头市人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染状况。方法采用ELISA方法检测HSV-ⅡIgM和IgG抗体。结果性传播疾病(性病)患者的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为16.2%(88/544),HSV-ⅡIgG为62.9%(324/544);正常对照组的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为3.3%(2/60)、HSV-ⅡIgG为41.7%(25/60)。两组的阳性检出率,患者组明显高于对照组(P<0.01)。结论不同人群HSV的感染状况不同;正常人群中存在HSV-Ⅱ感染,HSV-Ⅱ是性病的重要病原体之一。

性病门诊患者与献血员单纯疱疹病毒Ⅱ型血清抗体的调查报告

目的:了解特定人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的流行情况。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测同期性病门诊患者297例和义务献血员91例血清HSV-2抗体(IgG),其中85例的检测结果用蛋白印迹法(WB)验证。结果:性病门诊患者血清HSV-2阳性率20.88％(62/297);义务献血员血清HSV-2阳性率8.79％(8/91)。WB法验证显示:ELISA法的敏感性与特异性分别为93.33％、97.14％,阳性与阴性预期值各为87.50％、98.55％。结论:江门市性病门诊患者血清HSV-2抗体阳性率明显高于献血员(P<0.01),接近某些西方国家的感染率。

140例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原和抗体检测结果分析

目的:探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)抗原和抗体检测对生殖器疱疹的诊断意义。方法:对性病门诊140例有新发水疱的现症生殖器疱疹(GH)病人用ELISA方法进行单纯疱疹病毒II型(HSV-2)抗原和抗体检测,了解现症GH病人HSV-2抗原和抗体之间的关系。结果:对于有新发水疱的现症GH病人HSV-2抗原检测阳性率为89.3%,而HSV-2 IgG阳性率为66.4%,HSV-2 IgM阳性率为14.5%。对初发病人:HSV-2抗原阳性率为89.7%(70/78);HSV-2 IgG阳性率为39.7%(31/78);HSV-2 IgM阳性率为25.6%(20/78)。对复发病人:HSV-2抗原阳性率为88.7%(55/62);HSV-2 IgG阳性率为100%(62/62);HSV-2 IgM阳性检出率为0。结论:对于有新发水疱的现症GH病人HSV-2抗原检测阳性检出率较高。而HSV-2 IgM抗体作为诊断指标仍有待进一步探讨。

邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

目的研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性。方法采用化学修饰的方法将3-羟基-邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2333病毒株及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用。结果酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1mg/ml。结论酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂。

单纯疱疹病毒1型药物敏感性测定方法的建立

单纯疱疹病毒（HSV）分HSV-1和HSV-2两个血清型，其中HSV-1可引起角膜炎、口唇疱疹等多种疾病，由HSV-1引起的生殖器疱疹的发病率也逐年上升。^1以阿昔洛韦（ACV）为代表的核苷类抗病毒药物问世以来，HSV引起的疾病已得到了有效的治疗。随着ACV的广泛应用，HSV出现耐药，且有逐渐增加的趋势，成为临床必须面对的一个问题。^2,3为研究HSV-1的耐药性，我们采用空斑抑制试验测定HSV-1对ACV的敏感性，并在体外建立了ACV耐药病毒株。