单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

乙酰紫草素体外抗2型单纯疱疹病毒机理的研究

目的研究乙酰紫草素(acetylshikonin,AS)体外抗2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)的活性及作用机理。方法以阿昔洛韦(acyclovir,ACV)为阳性对照药物,采用CCK-8法检测细胞活力,确定AS对成年非洲绿猴肾细胞(Vero)的最大无毒浓度;致细胞病变法和噬斑形成抑制实验测定AS对HSV-2的抗病毒活性;实时荧光定量PCR及半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)法测定病毒载量以评估AS对HSV-2复制周期不同阶段的抑制作用;透射电镜观察AS对HSV-2病毒粒子结构的影响。结果AS对Vero细胞的最大无毒浓度(maximal atoxic concentration,TC0)为3.785μmol/L,浓度为1.678~3.785μmol/L时能有效抑制HSV-2复制,减少噬斑形成,半数有效浓度(50%effective concentration,EC50)为0.334μmol/L。在12和36 h,病毒释放期加入AS的实验组TCID50低于病毒感染对照组(13.43±10.04 vs.127.00±0.32;3.47±0.55 vs.5.80±0.12),差异均有统计学意义(t=8.359、4.161,P均<0.05);在12、24、36 h,AS直接灭活病毒组病毒载量低于病毒感染对照组(0.24±0.09 vs.1.35±0.07;4.46±0.06 vs.6.75±0.04;2.70±0.04 vs.5.27±0.10),差异均有统计学意义(t=9.920、33.360、24.020,P均<0.05)。此外,AS处理可导致HSV-2病毒粒子形态异常,随着AS浓度升高,作用后的HSV-2超微结构发生渐进改变。结论AS对HSV-2具有一定抗病毒效应,其机理可能为直接破坏病毒颗粒完整结构发挥抗病毒作用。

余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究

目的从余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物3种提取物体外筛选抗单纯疱疹病毒1型和2型的活性成分。方法通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、空斑减数法,判断药物的毒性及其抗病毒效应。结果余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物对于单纯疱疹病毒1型的半数抑制浓度分别为25.28,66.17,100.94μg/ml;余甘子的3种提取物对于单纯疱疹病毒2型的半数抑制浓度分别为31.70,180.3,112.1μg/ml。结论余甘子3种提取物在体外对单纯疱疹病毒1型和2型均有一定的抑制作用。

马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究

目的观察马齿苋合剂水提液对单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的抑制作用。方法马齿苋水提液作用于Hep-2、Vero细胞和原代兔肾(PRK)3种细胞上研究其抗病毒作用。结果马齿苋合剂水提液在Hep-2、Vero细胞和PRK细胞上均有明显的抗HSV-2作用,对HSV-2的最小有效浓度(MTC)为0.5 mg/ml,而且毒性低,最大无毒浓度(TDO)为12mg/ml,治疗指数(TI)为30.0,并有直接杀灭HSV-2的作用。结论马齿苋合剂水提液具有抗HSV-2作用。

壳聚糖碘液体外抗人单纯疱疹病毒2型的作用

目的研究壳聚糖碘液体外对人单纯疱疹病毒2型的作用效果。方法采用非洲绿猴肾细胞(Vero)培养单纯疱疹病毒2型(HSV-2),观察病毒半数感染量(TCID50)和病毒感染后的细胞病变效应(CPE),并通过MTT法测定药物对HSV-2感染细胞的保护率EC50。结果壳聚糖碘液对HSV-2的50%抑制浓度(EC50)为0.025mg/mL,治疗指数(TI50)为24;壳聚糖碘液对HSV-2的90%抑制时间在感染后的2h之前;且壳聚糖碘液和HSV-2预作用的时间越长,HSV-2的滴度越小。结论壳聚糖碘液在体外对人单纯疱疹病毒2型活性具有抑制作用。

生命泉膏滋抗实验小鼠阴道单纯疱疹病毒2型感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道 HSV- 2感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后动物的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL 高、中剂量组 ,[8.33、1.6 7、0 .34 g/ (kg.d) ]能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 HSV- 2感染。

非淋菌性尿道炎与单纯疱疹病毒2型感染关系的研究

目的 进一步探讨目前我国男性非淋菌性尿道炎感染的病因。方法 用细胞培养法和免疫荧光法联合检测 10 0例非淋菌性尿道炎 (NGU )组和 3 0例对照组患者尿道分泌物标本单纯疱疹病毒 2型 (HSV2 )。结果 结果 10 0例NGU标本中有 13例HSV2 阳性 ,阳性率为 13 % ,对照组HSV2 均阴性。结论 HSV2 感染与非淋菌性尿道炎发病有一定关系。

单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。

单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是人类疱疹病毒家族中α家族成员,可引起多年龄段的人群生殖器疱疹及其他疱疹疾病。由于该病毒具有复杂的基因结构及感染病理,其感染至今尚无有效的治疗方法。该病毒可抑制机体免疫系统,在神经细胞潜伏感染,具有重激活特性,因此,其疫苗的研制亦需要复杂的技术,且面临重重的挑战。

务工人员单纯疱疹病毒2型感染状况分析

目的了解浙西地区农村外出务工人员单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染状况及相关危险因素。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测219例外出务工人员和155例健康对照血清中抗HSV-2IgG抗体。结果外出务工人员抗体检出率26.5%,对照组检出率17.4%,两组抗体检出率差异有显著性(P<0.05);按性别、年龄、教育程度、婚姻状况、不洁性行为等感染相关因素作性别分层分析,<25岁女性感染率最高,达41.2%,Logistic回归分析表明,不洁性行为是HSV-2感染的危险因素(P<0.01)。结论外出务工人员HSV-2感染率明显高于对照组,开展针对农村外出务工人员的性病知识健康教育和医疗保健活动势在必行。

单纯疱疹病毒2型与细菌性阴道病关系的Meta分析

目的：探讨单纯疱疹病毒2型（HSV-2）与细菌性阴道病（BV）发生的相关性。方法：通过检索中国知网、CBM、Medline、Springer Link、Elsevier Science、PubMed、Cochrane Library database等数据库,收集自1990年1月到2014年12月公开发表的关于HSV-2与BV病例对照研究的文献,选择OR值及其95%CI作为Meta分析指标。利用Stata 11.0软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并计算。结果：根据统一的纳入和剔除标准,纳入11篇文献,研究表明HSV-2与BV的发生有明显的关系（Z=18.46,P=0.000）,合并计算的OR值为1.40,OR的95%Cl为1.25~1.54。结论：HSV-2感染是BV发生的一个危险因素。

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。

原发性高血压与单纯疱疹病毒2型感染有关

目的:探讨单纯疱疹病毒2型感染与原发性高血压的关系方法 在有1244名住院病人(年龄在35至64岁)参与的对照研究中,488例原发性高血压病人,756例对照,用ELISA方法检测血中特异性单纯疱疹病毒2型IgG抗体,进行两组问比较。本研究分析高血压的危险因素有:年龄,男性,吸烟,糖尿病,血脂紊乱,较少体力劳动,体重指数和单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性:在多因素分析中,应用Logistic回归分析以去除其它危险因素的影响,并计算调整后的比值比(OR值)和95％的可信区间.以表示单纯疱疹病毒2型感染和高血压的关系,及对高血压的危险性。结果 单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性率,高血压组病人明显多于对照组(38.3％ vs.29.8％。P=0.002)。Logistic回归分忻去除其它危险因素的干预,发现单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性与高血压强相关,调整后的OR值为1.413(95.0％CI,1.108 to 1.802;P=0.005),调整变量包括血脂异常、糖尿病、冠心病、男性和吸烟。在单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性病人中,血脂紊乱的病人显著增多(P<0.05)。结论 单纯疱疹病毒2型感染可能是原发性高血压的独立危险因素。

单纯疱疹病毒2型糖蛋白G的基因扩增、克隆及其B细胞抗原表位分析

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白G-2(gG-2)全长基因并对糖蛋白G-2进行B细胞抗原表位预测.方法:用PCR法扩增HSV-2的gG-2基因,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α株后测序.利用Lasergene,C lustal X等软件,进行B细胞抗原表位预测.结果:完成单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆.通过B细胞抗原表位分析,发现HSV-1的gG-1和HSV-2的gG-2氨基端的同源性很低.gG-2蛋白在“独特区”存在抗原指数非常强的抗原表位.结论:成功构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆,为单纯疱疹病毒感染的诊断试剂的研发及抗单纯疱疹病毒疫苗研究寻找更好的靶位点提供研究材料和参考.

单纯疱疹病毒2型药物敏感性测定及其阿昔洛韦耐药株的建立

目的应用空斑抑制试验测定单纯疱疹病毒2型(HSV-2)药物敏感性,并建立体外耐药病毒株。方法将HSV-2接种于乳兔肾细胞中,加入不同浓度的阿昔洛韦(ACV),培养72h后固定、染色、清点空斑数并计算药物的半数抑制浓度(IC50),通过IC50来判断HSV-2的药物敏感性。将HSV-2在含ACV环境中连续培养9代,分别在第3,6和9代测定其IC50。结果ACV对HSV-2标准株Sav毒株的IC50为1.1μg/mL。HSV-2在含ACV的环境中连续培养3代后即产生了耐药性,第3,6和9代的IC50分别为8.4μg/mL,56.9μg/mL和121.3μg/mL。结论空斑抑制试验是测定病毒药物敏感性的有效、实用的方法,建立的体外耐药病毒株可用于HSV-2的耐药性研究。

人单纯疱疹病毒2型感染致豚鼠输卵管妊娠的研究

目的探讨人单纯疱疹病毒2型感染引起输卵管妊娠的可能性。方法用人单纯疱疹病毒2型感染豚鼠阴道,实时荧光定量PCR技术检测豚鼠子宫颈,子宫内膜,输卵管粘膜细胞中人单纯疱疹病毒2型DNA,原位杂交法检测豚鼠子宫内膜及输卵管粘膜细胞中人单纯疱疹病毒2型DNA,免疫组化法检测子宫内膜和输卵管粘膜细胞人单纯疱疹病毒2型抗原,分别记录数据,计算感染率。结果实时荧光定量PCR法检测豚鼠人单纯疱疹病毒2型DNA,子宫颈阳性率46.67%,子宫内膜阳性率26.67%,输卵管粘膜细胞阳性率10.00%;原位杂交法子宫内膜阳性率23.33%,输卵管粘膜细胞阳性率10.00%;免疫组化法子宫内膜阳性率20.00%,输卵管粘膜细胞阳性率6.67%。结论人单纯疱疹病毒2型可沿豚鼠阴道感染子宫颈,上行感染子宫内膜,进而引起输卵管感染,是导致输卵管妊娠的重要原因之一。

单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27重组真核表达质粒的构建及表达

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞蛋白27(ICP27)基因与pcDNA3.1(+)真核表达质粒的重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27。方法通过RT-PCR方法从HSV-2培养物中提取RNA制备ICP27的编码基因UL54DNA,将其与载体pcDNA3.1(+)连接。通过双酶切和测序鉴定重组质粒是否构建成功,Western blot法鉴定重组质粒在真核细胞COS-7中表达。结果重组质粒pcDNA3.1(+)/ICP27构建成功,可在COS-7中表达。结论成功构建了可在真核细胞内表达的pcDNA3.1(+)/ICP27重组质粒,为下一步研究该重组质粒作为DNA疫苗的免疫学效应奠定了基础。

感染2型单纯疱疹病毒对人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达的影响

目的探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人宫颈上皮细胞HCE自噬及干扰素β(IFN-β)、IL-6表达的影响。方法将体外培养的人宫颈上皮细胞HCE分为观察组和对照组,观察组用Vero细胞病毒接种HSV-2,对照组正常培养不进行处理。收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用免疫荧光法(FITC)检测各组细胞荧光强度,采用Western blotting法检测各组细胞LC3Ⅱ表达量;收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用ELISA法检测上清液IFN-β、IL-6。结果感染HSV-2后观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平迅速升高,与对照组相比,P均<0.05。至感染后4 h观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平均达到峰值,然后缓慢下降。结论感染HSV-2可以提高人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达,且感染早期效果较强。

2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞表达Toll样受体1～10的影响

目的观察2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞株(HaCaT)表达Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)1～10的影响,探讨角质形成细胞(keratinocyte cell,KC)对HSV-2病毒感染初期的免疫防御机制。方法采用非洲绿猴肾细胞株VERO细胞进行HSV-2病毒扩增,再用HSV-2病毒感染HaCaT细胞,应用荧光实时定量PCR检测感染后24h,48h和72h时TLR1～10mRNA的表达量。结果静息状态下TLR1～10mRNA在HaCaT细胞中均有表达,经HSV-2病毒感染后HaCaT细胞转录TLR2～4和9mRNA的表达量与对照组相比,均显著升高,差异有统计学意义(P均<0.05),而TLR1和7mRNA的表达量与对照组相比,均下降,差异也有统计学意义(P均<0.05),TLR5～6,8和10mR-NA的表达量与对照组相比,差异则均无统计学意义(P均>0.05)。结论 KC表达TLR1～10,其中TLR2～4和9在HSV-2感染初期对识别及清除病毒并防止其感染扩散有积极的作用,而TLR5～6,8和10在HSV-2病毒感染KC初期可能不起作用。

性病门诊妇女宫颈糜烂与单纯疱疹病毒2型活动感染关系探讨及临床治疗初探

目的 探讨性病门诊妇女宫颈糜烂与单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )的活动感染的关系 ,并初步探讨用干扰素栓治疗的临床效果。方法 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对 110例不同程度 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度 )宫颈糜烂病人和 2 9例正常对照检测血清HSV 2型特异性IgM抗体。同时用ELISA法对病例组和对照组宫颈糜烂面分泌物和宫颈表面分泌物检测HSV 2抗原。HSV 2抗原检测阳性的患者用干扰素栓治疗。结果 110例不同程度宫颈糜烂病人HSV 2型特异性IgM抗体阳性率为 4 0 91% (45 /110 ) ,宫颈糜烂面分泌物HSV 2抗原阳性率为 34 5 5 % (38/110 ) ,抗原抗体同时阳性的感染率为 2 0 0 0 % (2 2 /110 ) ,均显著或非常显著地高于对照组 (P =0 0 12 ,0 0 0 0 3,0 0 0 76 )。在病例组中 ,HSV 2抗原检出率随糜烂程度加重而增高。 38例抗原阳性患者用干扰素栓治疗痊愈显效率为73 6 8% ,病毒抗原转阴率为 71 10 %。结论 性病门诊妇女宫颈糜烂的产生与HSV 2的原发活动感染有关 ,用干扰素栓治疗有效。