单纯疱疹病毒Ⅰ型与阿尔茨海默病相关性及中药抗单纯疱疹病毒Ⅰ型感染研究进展

目的对单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-1)与阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)的病理关系、可能机制及中药抗HSV-1感染研究进行综述。方法检索CNKI和PubMed数据库,收集1990年1月1日至2022年5月30日中医、西医关于HSV-1与阿尔茨海默病关系研究及中药防治HSV-1研究的报道。结果HSV-1反复感染可诱导β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)累积和微管相关蛋白磷酸化(Tau protein phosphorylation,p-Tau)表达增加;ApoE4基因有利于HSV-1进入大脑增加HSV-1诱发AD的风险,Aβ可能是一种诱捕HSV-1的抗菌肽;研究发现多种中药单体或复方具有较好的抗HSV-1作用。结论HSV-1感染可能是阿尔茨海默病发生发展的因素之一,其机制可能与Aβ诱捕HSV-1病毒有关,ApoE4基因增加了HSV-1诱发AD的风险,目前中药抗HSV-1感染研究已取得了一定进展,为从中药筛选抗HSV-1新药提供了有力支撑。

蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究

目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒I型(hHSV-1)的抑制作用。方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5%12-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果。结果:HEWL对细胞的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000μg.mL-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的最小有效浓度(MIC)为104.17μg.mL-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg.mL-1,治疗指数(TI)为10.67。在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均>500μg.mL-1。更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg.mL-1,IC50为3.91μg.mL-1,TI为64。0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力。结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关。

荧光恒温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型RNA方法的建立

目的利用荧光恒温扩增技术(SAT)建立一种快速、可靠的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)检测方法。方法根据Genbank上获取HSV-1开放读码框Us5区域的RNA序列设计扩增引物及优化探针,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对HSV-1 RNA进行核酸扩增,同时利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪进行实时荧光信号收集和检测。收集儿童病毒性脑炎或疑似患儿样本212份(脑脊液样本150份、血浆样本62份),以巢式PCR+测序为参比方法,对SAT结果进行Kappa一致性分析。结果 SAT检测HSV-1 RNA的灵敏度为100拷贝/μL,采用SAT检测212份临床样本,共检测出18例HSV-1阳性样本,巢式PCR检出16例阳性,经测序证实其中12例为阳性结果。SAT与巢式PCR+测序方法的Kappa值为0.785,其敏感性为100.0%、特异性为97.0%。结论建立的SAT检测脑脊液和血浆中HSV-1 RNA的方法具有敏感性高、特异性强、准确、快速、可靠的优点,适用于临床对单纯疱疹病毒性脑炎早期的快速诊断。

19种南药提取物体外抗单纯疱疹病毒I型活性研究

目的从19种南药提取物中筛选具有抗单纯疱疹病毒I型活性的成分。方法采用细胞病变效应法(Cytopathogen-ic effect,CPE)测定不同提取物的细胞毒性及抗HSV-I活性。结果从19种南药提取物中找到了5种含有抗单纯疱疹病毒I型的活性成分。结论对这5种提取物及其相关化合物的进一步研究,有希望开发出抗单纯疱疹病毒I型的新药。

I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响

背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1（F株）感染体外培养的人CECs，应用逆转录PCR（RT—PCR）、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况。结果RT．PCR法检测结果显示，感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞（即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组）的表达明显增强，不同时间点间比较差异无统计学意义，组别与时间点间不存在交互作用（MMP-2mRNA：F目目=0．968，P=0．436；F蚴I=47．649，P=0．000；F女Ⅱ#目=0．757，P=0．536．FAKmRNA：F时间=0．658，P=0．631；F组别=35．182，P=0．000；F交互作用=1．386，P=0．137）。Westernblot法检测结果显示，感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义（P’0．05），感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强（P〈0．05）。免疫组织化学染色检测结果显示，随着感染时间的延长，MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期，FAK的激活可刺激MMPs活性增强，从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。

黄芪水煎液抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的实验研究

目的研究黄芪抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用。方法在人胚肺二倍体细胞系统中,采用对病毒所致细胞病变的抑制实验,观察黄芪水煎液抗HSV-I的药效。结果黄芪水煎液的半数抑制浓度为0.98 μg/ml,最小有效浓度为1.95 μg/ml,治疗指数为128。结论黄芪有较显著的抗HSV-Ⅰ作用,且对细胞毒性低。

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B胞浆区编码基因的原核表达、纯化及抗体制备

目的获得高纯度的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1糖蛋白BgB胞浆区蛋白并制备其特异性抗体。方法从感染HSV-1的BHK细胞中提取总RNA用RT-PCR特异性扩增HSV-1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆入表达载体pGEX4T-1中,进行融合表达。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗体,进行Westernblot鉴定。结果用IPTG诱导后,表达出相对分子质量Mr约42000的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备的抗体滴度为1400。结论获得重组HSV-1gB胞浆区蛋白及其特异性抗体,为后续功能研究奠定了基础。

单纯疱疹病毒Ⅰ型载体构建在神经系统疾病治疗中的应用

Ⅰ型单纯疱疹病毒具有嗜神经特性。感染神经细胞后在神经细胞中呈潜伏感染状态,可作为神经系统疾病基因转移治疗过程中理想载体。本文就该载体构建及神经系统疾病治疗的研究做一综述。

小鼠脑无症状性单纯疱疹病毒Ⅰ型感染的实验研究

【目的】观察单纯疱疹病毒I型(herpes simplex virus-type one,HSV-1)是否可以引起脑组织的无症状性感染,探讨多发性硬化的发病机制。【方法】将Balb/c小鼠分为实验组、对照组和脑炎组,在不同时间点观察小鼠神经病学体征、行为学以及体重变化;用聚合酶链反应法检测三叉神经节病毒DNA片段;免疫荧光法检测脑组织疱疹病毒抗原表达,以判定脑组织病毒增殖性感染的存在。【结果】实验组小鼠各时相点神经病学体征、神经行为学和体重变化与对照组小鼠相比较差异无统计学意义。在病毒接种的各时相点,大部分小鼠三叉神经节检测到了疱疹病毒DNA片段,同时脑的颞叶、顶叶和额叶皮层均发现片状HSV抗原阳性表达神经元,以7 d组阳性细胞最多,荧光亮度最强,15 d组阳性细胞减少,荧光亮度减弱。【结论】单纯疱疹病毒Ⅰ型能够引发小鼠脑组织的急性、短暂性、无症状性非坏死性感染。

嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒介导GALV fus基因治疗肺腺癌的体外试验研究

目的:探讨特异性启动子UL38及无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(CMVP)调控的嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因系统体外对人肺腺癌的选择性杀伤效应。方法:选择非洲绿猴肾细胞(Vero),肺腺癌细胞(A549)和正常人胚胎成纤维细胞(HFL-Ⅰ GNHu 5),将构建成功的重组HSV-Ⅰ载体通过脂质体转染、导入包装细胞Vero中制备重组HSV-Ⅰ病毒,用来转染A549和HFL-Ⅰ GNHu 5,观察其转染、表达状况及体外抗肿瘤作用,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段取代GALV.fus作对照质粒。提取受染A549和HFL-Ⅰ GNHu 5细胞的总蛋白,以Western Blot法鉴定GALV.fus基因的表达。结果:成功包装重组HSV-Ⅰ载体,致融性病毒感染A549后引起强烈的细胞膜融合,且杀伤作用随着感染剂量的增加而增强。而非致融病毒仅引起病毒细胞毒性效应,细胞呈圆形,镜下未见细胞融合斑。CMVP调控的重组HSV-Ⅰ在HFL-ⅠGNHu 5生长静止抑制状态均引起细胞膜融合,UL38P调控的重组HSV-Ⅰ仅在生长状态导致细胞膜融合;而细胞处于静止和抑制状态时,不引起细胞膜融合以及任何细胞病理改变。以Western Blot法检测受染A549和HFL-Ⅰ GNHu 5细胞,均可检到GALV.fus基因蛋白表达。结论:UL38p调控的GALV.fus基因在有效的载体内对体外肺癌细胞有强效的选择性杀伤效果和应用安全性,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法。

荔枝草提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的研究

目的探讨荔枝草醇提物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用。方法体外培养HSV-Ⅰ感染兔肾细胞,给予不同浓度梯度的荔枝草醇提物,并以阿昔洛韦(ACV)为阳性对照,采用细胞病变效应(CPE)及四唑盐(MTT)比色法,观察荔枝草醇提物对兔肾细胞的毒性及对HSV-Ⅰ感染兔肾细胞的抑制作用。结果 CPE结果显示荔枝草醇提物在质量浓度为1 350μg/m L时可使细胞产生皱缩、破碎等毒性特征,在质量浓度为169μg/m L时,毒性特征消失,在半数细胞毒性质量浓度675μg/m L下能明显抑制HSV-Ⅰ。MTT法结果显示荔枝草醇提物质量浓度在21~338μg/m L范围内,细胞存活率均大于60%,当质量浓度为42、84、338μg/m L时的吸光度值均大于病毒对照组的吸光度值,差异具有统计学意义。结论荔枝草醇提物在体外对HSV-Ⅰ有一定的抑制作用。

带状疱疹后神经痛动物模型及其机制研究新进展

带状疱疹后神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)是由水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)感染所引起的常见并发症,多见于老年人和免疫功能低下者,严重影响病人的身心健康和生活质量。尚未明确的致病机制让PHN治疗效果欠佳,缺乏有效模拟PHN的动物模型更让PHN发病机制的研究止步不前。本文主要综述目前PHN动物模型构建的研究进展,重点介绍由VZV与单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)诱导的PHN动物模型的建立方法和疼痛行为学表现。旨在比较现有PHN动物模型的研究概况,为进一步阐明PHN致病机制提供有效的研究工具,同时也为PHN动物模型的选择和改良提供参考。

单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染的研究——兔三叉神经节致敏T淋巴细胞检测研究

报告应用抗兔致敏T淋巴细胞的单克隆抗体和ABC免疫组织化学技术对22只实验性单纯疱疹病毒性角膜炎的家兔三叉神经节致敏T淋巴细胞检测的结果。首次揭示在角膜原发感染HSV-Ⅰ过程中三叉神经节内致敏T淋巴细胞的出现。致敏T淋巴细胞在角膜接种后第13天出现,第85天消失。结果表明:T淋巴细胞在TG内HSV-Ⅰ潜伏感染的建立过程中起重要作用。本研究对指导临床治疗提供了理论依据。

Ⅰ型单纯疱疹病毒对牙龈成纤维细胞炎症因子表达的影响

目的:通过观察Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)对牙龈成纤维细胞炎症因子分泌情况的影响,探究HSV-1与牙龈炎症之间的相关性。方法:体外培养人牙龈成纤维细胞,分别用1×10~4PFU/m L、1×10~5PFU/m L、1×10~6PFU/m L 3种浓度的HSV-1病毒加以刺激,48 h、96 h后分别收集各组上清液进行ELISA检测,观察白细胞介素-6(IL-6)的表达情况; 96 h后提取细胞RNA,real-time PCR检测细胞IL-6基因的表达情况。结果:3组实验组的上清液中均有IL-6的表达,且随着刺激浓度的加大、刺激时间的延长,表达量增加; real-time PCR结果显示与对照组相比随着浓度的加大IL-6 mRNA表达水平增加,但1×10~5PFU/m L、1×10~6PFU/m L浓度组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)能增加炎症因子IL-6的表达,并对人牙龈成纤维细胞产生影响,可能会增加牙龈炎症的易感性。

黄芪注射液治疗鼠单纯疱疹病毒性脑炎的实验研究

目的探讨黄芪注射液对I型单纯疱疹病毒（HSV—I）感染致病毒性脑炎的疗效及机制。方法将60只小鼠随机分为对照组、模型组和黄芪治疗组，每组20只。建立HSV—I感染致病毒性脑炎模型。观察各组小鼠的死亡率，检测小鼠血中白细胞介素-1β（IL－1β）、γ-干扰素（IFN-γ）、一氧化氮（No）水平，电镜下观察小鼠神经细胞形态结构的变化。结果电镜下HSV—I感染后小鼠脑细胞胞质水肿明显，核仁固缩，核内结构破坏，多数线粒体呈空泡样改变，脊突破坏，髓鞘严重松解，核仁内可见病毒颗粒；IL-1β、IFN-γ、NO水平及小鼠的死亡率均较对照组明显上升（P均〈0．01）。黄芪注射液治疗后小鼠脑组织病理学改变减轻，死亡率及IL-1β、NO水平较模型组明显下降，而IFN-γ继续上升（P均〈0．01）。结论早期应用黄芪注射液对单纯疱疹病毒性脑炎有一定的治疗效果，其作用机制可能是通过调节免疫应答，影响IL-1β、IFN-γ和NO等细胞因子的水平，从而减轻炎症反应。

白细胞介素-9在单纯疱疹病毒性角膜基质炎小鼠角膜组织中的表达

背景单纯疱疹病毒性角膜基质炎（HSK）是一种由CD4＋T淋巴细胞介导的免疫病理性疾病。国外研究发现，白细胞介素一9（IL一9）在多种免疫性疾病的发病过程中发挥重要作用，但在HSK中是否起作用目前少有报道。目的研究小鼠HSK发生和发展过程中IL一9在角膜组织中的表达，探讨IL一9的表达与HSK进展程度之间的关系。方法4～6周龄清洁级健康BALB／c小鼠180只分为对照组20只和实验组160只。对照组仅进行“#”字形划痕，不接种病毒；实验组小鼠角膜用注射针划痕后接种5μl含有1×10^6空斑单位（PFU）／ml的I型单纯疱疹病毒（HSV-1）KOS毒株建立HSK小鼠模型。分别于病毒接种前（0d），接种后1、3、5、7、8、10、14、21d在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜的变化；于接种后14d制备角膜组织切片，苏木精一伊红染色观察角膜的组织病理学改变；采用荧光实时定量PCR（real-timePCR）法检测IL-9mRNA在小鼠角膜组织中的表达；采用免疫荧光组织化学方法检测IL-9蛋白在小鼠角膜组织中的表达。结果裂隙灯显微镜下观察结果显示，小鼠角膜接种HSV-1后第3天，实验组小鼠出现点状、树枝状、地图状角膜上皮缺损，接种后6d内上皮缺损痊愈，但于接种后第7天起出现角膜基质灰白色混浊，14d基质混浊加重并达高峰，之后逐渐减轻。Real—timePCR结果显示，未接种病毒（0d）的正常小鼠角膜组织中仅有极微量的IL-9mRNA表达，实验组小鼠接种病毒后1、3、5、7、8、10、14dIL-9mRNA在角膜组织中的相对表达量分别为6．37±0．45、5．66±0．53、3．93±0．35、5．62±0．34、3．23±0．18、2．57±0．14、2．19±0．20，总体表达差异有统计学意义（F=92．764，P=0．000），其中接种后各时间点IL-9mRNA相对表达量与0d比较明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05），接种病毒后21d，IL-9mRNA相对表达量与0d比较差异无统计学意义（P=0．340）。免疫荧光组织化学法检测显示，IL-9蛋白在实验组小鼠角膜的上皮层、基质层及内皮细胞层呈强阳性表达，而对照组小鼠角膜组织中未见IL-9蛋白的表达。结论采用角膜划痕和HSV-1KOS毒株接种法可成功建立BALB／c小鼠HSK模型，IL-9参与了HSK的免疫炎症反应。

甘草甜素抗单纯疱疹病毒Ⅰ的实验研究

目的旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物。方法分体外及体内实验两个部分。体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药。通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用。结果甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0.56mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组。结论甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率。

携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定

目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusⅠ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1。方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒。重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法。Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达。结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml1,×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml。受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达。