对单细胞凝胶电泳法检测细胞核DNA损伤的影响因素

目的 :探讨对单细胞凝胶电泳法 (SCGE)检测细胞核DNA损伤的影响因素。方法 :结合一氧化氮对食管癌细胞系EC10 9细胞核DNA的损伤作用模型 ,对SCGE实验中的影响因素等进行分析讨论和综合评价。结果 :受试物的浓度及其对细胞的作用时间、细胞周期等是SCGE实验中的主要影响因素。结论 :SCGE中的一些因素对实验结果有显著影响。

单细胞凝胶电泳法测定镍化物对人血细胞的DNA损伤

为研究镍化物对人血细胞ＤＮＡ的损伤情况，用单细胞凝胶电泳法测定了不同剂量的Ｎｉ３Ｓ２、ＮｉＣｌ２在２、４、２４小时诱导人全血细胞ＤＮＡ单链断裂的作用。结果表明：当Ｎｉ３Ｓ２染毒剂量为２．５、５．０、１０．０μｇ／ｃｍ２、３７℃作用２小时，即可引起血细胞“慧星”尾长、ＤＮＡ断裂分级较对照有显著改变（Ｐ＜０．０１）。血细胞分别与５００～２０００μｍｏｌ／Ｌ的ＮｉＣｌ２、４０～８０μｍｏｌ／Ｌ的Ｈ２Ｏ２一起孵育２４小时，除了ＤＮＡ断裂分级有显著改变外，慧星尾长与对照差异无显著性。提示：在实验条件下，ＮｉＣｌ２致ＤＮＡ单链断裂作用较Ｎｉ３Ｓ２弱。血液中的某些抗氧化物质可能减弱了镍化物的ＤＮＡ氧化损伤。

单细胞凝胶电泳法检测二硫化碳染毒小鼠精子DNA损伤

目的 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测CS2 染毒小鼠精子DNA损伤 ,研究CS2 的遗传毒性。方法 用单细胞凝胶电泳法 ,以DNA断裂分级及DNA彗星尾长和尾矩来评价CS2 对精子DNA的损伤。结果 CS2 染毒剂量组均出现DNA彗星的拖尾率增加 (分别为 6 7.14 %、84 .2 9%和 91.0 0 % )、损伤强度指数增高 (分别为 5 0 7、6 5 6和 74 5 )、DNA头部百分比减少 (分别为 84 .5 5 %、73.84 %和5 5 .71% )、彗星尾长 (分别为 5 .87、8.81、13.4 9μm)及尾矩 (分别为 1.30、1.6 3、2 .6 6 μm)增加 ,与阴性对照组比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 单细胞凝胶电泳能够快速、敏感地检测CS2 染毒小鼠精子DNA损伤 ,该方法可用于环境致癌物和致突变物的检测。

单细胞凝胶电泳法分析指标及检测DNA交联的标准断裂剂的研究

目的 寻求单细胞凝胶电泳计算机成像与分析系统中的有效分析指标 ,为H2 O2 在 1℃条件下作为检测DNA交联的标准DNA断裂剂提供依据。方法 常规培养Vero细胞 ,消化后悬浮在PBS中 ,H2 O2 染毒 ,分别在 37℃和 1℃条件下孵育 1h ,常规单细胞凝胶电泳 ,专用软件分析其图像。结果 H2 O2 的染毒浓度在 2 5 0 0 μmol/L以下时 ,尾长、尾面积、尾矩和尾积分等指标均有剂量 -效应关系 (T =37℃时 ,r分别为 0 .6 80 ,0 .72 5 ,0 .796 ,0 .798;T =1℃时 ,r分别为 0 .6 85 ,0 .717,0 .6 2 2 ,0 .714,P均 <0 .0 1)。在H2 O2 浓度较高的另一实验中 ,当H2 O2 为 2～ 7μmol/L时 ,仅尾矩和尾积分间存在这种关系 ;H2 O2 各剂量 (2 0、10 0、5 0 0、2 5 0 0 μmol/L)在 37℃时对DNA的损伤程度均明显高于1℃时。两种条件下上述 4个指标都存在剂量 -效应关系。结论 由该系统得到的尾矩和尾积分所反映的DNA损伤信息更准确、更全面、适用范围更广 ,但尾长可用作较初步的研究 ;H2 O2 在

用单细胞凝胶电泳法检测人造矿物纤维对DNA的损伤

目的比较研究10种人造矿物纤维(MMF）对人淋巴细胞的损伤作用。方法采用日本纤维状物质研究协会提供的10种标准人造矿物纤维(JFM)，用单细胞凝胶电泳法，以人淋巴细胞为靶细胞，用迁移率和迁移度评价对细胞DNA链断裂程序。结果RF1、RF2、RF3、MG、SC1、TO1引起DNA链断裂程度与对照比较，统计学上有显著性差异。其中RF1、RF2、RF3和MG1纤维所引起DNA链断裂程度与温石棉接触。结论10种人造矿物纤维均可引起不同程度的DNA链损伤。但损伤程度除耐火纤维外。均低于温石棉。

中药薏苡仁酯作用喉癌Hep-2细胞的体外研究

目的 研究中药薏苡仁酯对喉癌Hep 2细胞的增殖抑制作用及机制。方法 应用MTT法测定不同浓度的薏苡仁酯对Hep 2细胞增殖抑制情况 ;应用单细胞凝胶电泳法 ,检测薏苡仁酯引起Hep 2细胞的DNA损伤情况。结果 5 μl/ml～ 4 0 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后明显抑制Hep 2细胞的增殖作用 (P <0 .0 1) ;5 μl/ml和 10 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后引起Hep 2细胞DNA损伤 (P <0 .0 1)。结论 在体外培养的条件下中药薏苡仁酯能明显抑制Hep 2细胞的增殖 。

亚砷酸钠致脏器细胞DNA链断裂的实验研究

目的 观察不同剂量亚砷酸钠 (NaAsO2 )在不同时相引发小鼠体内细胞DNA链断裂损伤的影响。方法 采用单细胞凝胶电泳法 (SCGE)分别测定ICR小鼠皮下注射NaAsO2 0 .4 ,2 ,10mg/kg后 1,3,6h的脾脏、胸腺、骨髓和肝细胞的DNA链断裂损伤。结果 不同剂量亚砷酸钠注射后 ,可以发现 2和 10mg/kgNaAsO2 可诱发脾细胞、胸腺细胞、骨髓细胞DNA链断裂 ,各组出现的彗星细胞百分比明显高于对照组 ,同时DNA迁移距离也较对照组明显增大 ;而在染毒后不同时相观察的结果表明 ,NaAsO2 诱发脾细胞出现DNA链断裂损伤在 1h最为明显 ,而胸腺细胞和骨髓细胞相对较晚 ,DNA链断裂损伤高峰出现在染毒 3h ;染毒 6h ,各种组织细胞的DNA链断裂损伤开始减少 ,逐渐趋于正常。各剂量组及时间点均未观察到亚砷酸钠有诱导肝细胞DNA链断裂损伤的作用。结论 2mg/kg和 10mg/kgNaAsO2 可诱发小鼠体内脾、胸腺和骨髓细胞的DNA链断裂损伤 ,但不同细胞对NaAsO2

光气致小鼠肺脏细胞DNA损伤和凋亡

目的研究光气致BALB/c小鼠肺水肿模型的肺脏的DNA损伤和凋亡。方法26只二级BALB/C小鼠,雄性,随机分为正常对照组和染毒组,各13只。正常对照组小鼠给予空气,染毒组小鼠给予11·9mg/L剂量的光气,时间均为5min,染毒后4h,比较2组小鼠肺脏的湿干比、病理学变化,单细胞凝胶电泳测定2组肺Ⅱ型细胞DNA损伤情况及对小鼠肺脏进行DNA琼脂糖凝胶电泳。结果11·9mg/L的光气染毒5min,小鼠肺脏湿干比(6·42±1·00)比正常对照组(4·25±0·47)显著增加(P<0·05);光镜下观察肺组织可见肺水肿发生;单细胞凝胶电泳法测定染毒组肺Ⅱ型细胞的尾长、尾部DNA、尾距均显著高于正常对照组(P<0·001);DNA琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯状样改变。结论光气染毒可造成小鼠肺水肿,引起肺Ⅱ型细胞发生DNA损伤和肺脏细胞凋亡。

不同浓度的一氧化氮对食管癌细胞核DNA的损伤作用

目的 :研究不同浓度的一氧化氮 (nitricoxide,NO)对食管癌细胞核DNA损伤作用的特征性规律。方法 :以硝普钠 (sodi umnitroprusside ,SNP)作为NO的体外供体 ,以食营癌细胞系EC10 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的SNP作用一定时间后 ,食管癌细胞核DNA被损伤的情况。结果 :无论SNP的作用时间是 8h ,还是 16h ,彗星状细胞核所占的百分率均越来越高 ,经 χ2 检验差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。曲线回归分析结果表明 ,食管癌细胞彗星状细胞核生成的百分率与SNP的浓度之间明显相关。结论 :在一定的条件下 。

一氧化氮对食管癌细胞核DNA的损伤作用

以硝普钠 ( Sodium Nitroprusside,SNP)作为 NO( Nitric oxide)的体外供体 ,以食管癌细胞系 EC1 0 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的 NO作用不同时间后 ,食管癌细胞核 DNA被损伤的情况 .检测结果表明 ,在一定的条件下 ,NO对食管癌细胞核 DNA的损伤作用具有明显的浓度和作用时间依赖性特征 ,总的来讲 ,NO的浓度越大 ,NO对细胞作用的时间越长 ,细胞核 DNA所遭受的损伤越重 .

γ-射线对淋巴细胞DNA的损伤

目的 了解γ -射线对淋巴细胞DNA的损伤情况 ,为预放射线对人体的损伤提供科学依据。方法 应用碱性单细胞凝胶电泳法 (SCGE)测定 ,观察小鼠和人外周血淋巴细胞的彗星率。结果 在小鼠实验中发现不同剂量组的小鼠彗星率明显高于对照组 ,不同剂量组之间差异也存在显著性 ,并且在各个时点的不同剂量之间的慧星率差异均存在显著性 ,在低剂量组各时点间彗星率差异无显著性 ,而在高剂量组各时点间差异有显著性 ,并且以一天中 16:0 0时点最高。结论 γ -射线能引起淋巴细胞DNA损伤 ,且存在剂量反应关系 ,此外还提示一天中淋巴细胞对γ -射线的敏感性不同。在探伤工人和对照组间差异也存在显著性。

HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤的监测

[目的 ]对HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤进行监测。 [方法 ]采用单细胞凝胶电泳法 ,在荧光显微镜下观察淋巴细胞损伤情况。 [结果 ] 5 6名HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤率为 2 4 1% ,其中急性感染者为2 8 5 % ,慢性感染者损伤率为 2 2 5 % ,携带者损伤率为 18 6% (P <0 0 0 1) ;82名健康者的损伤率为 10 3 % (与感染者比较P <0 0 0 1)。[结论 ]HBV感染可以造成外周血淋巴细胞DNA损伤 ,且不同感染模式的损伤情况不同。

二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的毒性作用

目的探讨二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的影响。方法对妊娠初期的雌性小鼠采用静式吸入染毒法进行二甲苯染毒,观察胎鼠体重变化;原子吸收分光光度测定法(atomic absorption spectroscopy,AAS)检测妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量;单细胞凝胶电泳法(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测妊娠母鼠外周血有核细胞DNA损伤程度。结果染毒各组妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降(P<0.01,P<0.05),并具有统计学意义;染毒组妊娠母鼠外周血有核细胞发生DNA断裂并形成彗尾图像;染毒各组胎鼠体重较正常组相比均显著下降,且存在显著性差异(P<0.05);部分胎鼠表现为胚胎被吸收、脑膜脑膨出、椎骨发育不全等。结论二甲苯可造成妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降、外周血有核细胞DNA损伤并致使流产发生;二甲苯引起胎鼠体重下降,并影响生长发育。

冰冻对精子DNA的影响

目的 :探讨冰冻是否引起精子DNA损伤。 方法 :采用改进后的单细胞凝胶电泳法 (SCGE)对 - 80℃条件下保存不同时间的精子DNA进行分析。 结果 :以DNA头部百分比为检测参数 ,方差分析显示 ,对于时间因素 ,P >0 .0 5 ,无统计学差异。 结论

彗星试验检测武汉市氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤

目的 研究武汉市主要水源 C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对 Hep G2 DNA的损伤。方法 氯化饮水有机提取物染毒 Hep G2后 ,用单细胞凝胶电泳 (亦称彗星试验 )检测 DNA损伤。结果 氯化饮水有机提取物诱导DNA损伤的最低浓度 ,C江、D湖、H水丰水期 (8月份 )均为 1.6 7m l/ ml培养液 ,平水期 (3月份 )分别为 16 7、 16 .7、1.6 7m l/ ml培养液 ;最高浓度 (16 7m l/ ml培养液 )氯化饮水有机提取物诱导的 Hep G2 DNA迁移度 ,C江、D湖的丰水期均明显高于平水期 (均 P<0 .0 5 ) ;最高浓度氯化饮水有机提取物诱导 Hep G2 DNA损伤的强度 ,H水 >D湖和 C江 (均 P<0 .0 1)。结论 武汉市主要水源 C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对 Hep G2 DNA有损伤作用 ,损伤作用的严重程度 H水 >D湖 >C江 ,丰水期 >

苯并(a)芘和铅对小鼠大脑神经元损伤的研究

[目的]研究苯并(a)芘(BaP)、铅单独及其联合作用对小鼠大脑神经元DNA的损伤。[方法]将80只昆明种小鼠随机分为10组(每组8只) ,即空白对照组、溶剂对照组、低浓度铅染毒组、高浓度铅染毒组、低剂量BaP染毒组、高剂量BaP染毒组、低浓度铅+低剂量BaP联合染毒组、低浓度铅+高剂量BaP联合染毒组、高浓度铅+低剂量BaP联合染毒组及高浓度铅+高剂量BaP联合染毒组。空白对照组不作处理,溶剂对照组用等容量植物油平行处理;低、高浓度的铅染毒分别为5 .4、5 4mg/L的醋酸铅饮水染毒;低、高剂量BaP染毒分别为0 .5、5mg/kg的BaP植物油溶液,每周4次腹腔注射,联合染毒组接受两种处理。染毒8周后取各组小鼠脑组织制作细胞悬液,单细胞凝胶电泳法检测小鼠大脑神经元DNA的损伤。[结果]①单独染毒:BaP 5mg/kg染毒组小鼠大脑神经元DNA的损伤程度高于对照组(P <0 .0 5 )。②联合染毒:5 .4mg/L的醋酸铅+ 0 .5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 5 ) ;5 .4mg/L的醋酸铅+ 5mg/kg的BaP染毒组(P <0 0 1) ;5 4mg/L的醋酸铅+ 0 .5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 1) ;5 4mg/L的醋酸铅+ 5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 1)小鼠大脑神经元DNA的损伤程度显著高于对照组。[结论]高剂量BaP连续8周暴露可损伤小鼠大脑神经元;

DNA修复率预测晚期胃癌含铂化疗方案疗效的研究

目的探讨晚期胃癌外周血淋巴细胞(PBLC)的DNA修复率(DRR)与含铂化疗方案疗效的关系。方法采用单细胞凝胶电泳法检测47例晚期胃癌患者(胃癌组)PBLC的DRR,同时选取20例非肿瘤患者作为对照(对照组)。所有胃癌患者均接受含铂化疗方案治疗并评价疗效。分析两组顺铂暴露前与暴露并经修复后的DRR及胃癌组DRR与临床病理特征和含铂化疗方案疗效的相关性。结果利用尾长(Z=4.662,P=0.000)和尾相(Z=3.827,P=0.000)检测胃癌组PBLC的DRR均低于对照组。胃癌组PBLC的DRR与年龄、性别、ECOG评分、组织分化和嗜酒习惯均无关(P>0.05)。47例患者中43例可评价疗效,其中获CR 1例、PR 12例、SD 13例、PD 17例,疾病控制率为60.5%。以尾长作为评价DRR的指标提示DRR与化疗疗效呈负相关(r=-0.327,P=0.032),而以尾相作为评价DRR的指标提示DRR与化疗疗效无关(r=0.143,P=0.361)。结论胃癌患者较非肿瘤人群DNA修复能力降低,DRR可以预测晚期胃癌患者含铂化疗方案的近期疗效。