显微注射生长激素基因导入中国对虾（Penaeus chinensis）受精卵的研究

本实验采用显微微量注射方法，将羊生长激素基因导入中国对虾受精卵，受精卵发育到状幼体第三期后采样检测。ＰＣＲ检测结果表明：７个样品共９３尾幼体，有３个样品呈现阳性信号，基因转移比率至少在３％以上。同时斑点杂交结果也证明有两个明显阳性斑点。

显微注射法制备转基因小鼠的技术研究

转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集，受精卵的体外培养，胚胎移植等技术，转基因动物制作是其应用技术之一，它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核，使外源ＤＮＡ随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将ｐＣＸＴＧＡＰ、ｐＣＳＬＮ等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型，并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的１６３８％。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。

转基因小鼠技术中获得原核期受精卵最适时间的研究

显微注射法是制备转基因动物的首选方法 ,而原核清晰受精卵的获得是影响显微注射成败的关键。本文对小鼠HCG超排注射后大量原核期受精卵获得的最佳时间进行了研究 ,以提高显微注射成功率。结果显示采集雄性原核清晰受精卵的最佳时间段为注射HCG后 2 5～ 2 7h。

角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制

本研究采用转基因技术中最常用的受精卵原核显微注射法,制备角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠。我们将经过超排处理的供体雌鼠拉颈处死,从其输卵管壶腹部取出卵丘细胞团,用透明质酸酶消化、清洗,得到形态饱满、极体和双原核明显的受精卵培养。将构建好的包括角质细胞特异性角质素5(K5)启动子、Cre重组酶基因和人生长激素(hGH)polyA的转基因载体pK5-Cre-hGH制备成一定浓度的注射片段,通过显微注射的方法将4.2 kb的转基因片段引入小鼠受精卵的雄原核。共注射了720枚受精卵,移植至29只假孕母鼠的输卵管中发育,获得子代小鼠48只,经PCR鉴定有12只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为25%。此结果通过Southern杂交得到进一步证实。

转基因鱼

本文综述了转基因鱼研究的进展,并介绍了目的基因的选择及其导入的主要方法。此外,还对转基因鱼研究中尚存的一些问题作了说明。 自从八十年代中期开始鱼类基因转移研究以来,进展非常迅速。1985年Zhu等成功地将带有小鼠重金属结合蛋白(mMT)启动子的人生长激素(hGH)基因导入鲫鱼受精卵,并获得生长速度快的子代鱼。随后,世界一些国家开展了鱼类基因转移的研究,并取得很大成就。本文拟对转基因鱼研究现状及尚存的问题作一概述,供研究者参考。

转基因鸡制备方法的研究进展

在获得转基因哺乳动物的基础上,由于禽类(鸡)作为生物反应器本身所具有的优势,许多研究者投向制备转基因鸡的研究上。本文简要叙述了常用的制备转基因鸡的方法。其中,结合本实验室的情况,重点介绍了胚盘直接注射法。

转基因小鼠——一种新型实验动物

转基因小鼠是通过人工的方法把外源基因整合到小鼠生殖细胞培育而成的携带外源基因的小,鼠它能把该基因传递给后代。 Gordon等首次将克隆化基因注入小鼠受精卵,再移植于假孕雌鼠输卵管中,育成了转基因小鼠[‘’。尔后,国内外许多学者纷纷从事这方面的研究,并成功地将10多种基因导入小鼠体内,得到各型转基因小鼠。本文简要介绍特基因小鼠培育的方法和意义。

转基因动物与动物营养

1 转基因技术 1.1 显微注射法 在众多转基因技术中,显微注射法因其出现早,研究深入,被推荐为一种最经典有效的方法。显微注射法的基本原理是将外源基因直接用显微注射器注入受精卵(雄原核)内,利用受精卵分裂繁殖中DNA的复制过程,将外源基因整合到DNA中进行表达。显微注射法的优点是导人外源基因的效率较高,常能获得良好的表达,操作简单,易于掌握,注射的基因不受片段大小限制,无需载体。此法不足之处为外源基因绝大部分是头尾相连,拷贝数不等地随机整合到受体染色体上,因而其表达水平在转基因个体间常不稳定。另外,显微注射法不能将外源基因导入发育较晚阶段的胚胎细胞;显微注射法所针对的是受精卵,对一些单胎动物或少胎动物,加之低整合率,阳性后代出现的机率很少。

转基因家畜的研究及进展

1980年,Gordon应用显微注射法首次成功地将重组的外源DNA直接注入小鼠受精卵的雄原核中获得了携带外源基因的小鼠。Gordon和Ruddle1981年将带有外源基因的小鼠称为转基因小鼠(tansgenicmice)。“转基因动物”一词也应运而生。动物转基因技术克服了物种之间的生殖隔离,实现了动物物种之间遗传物质的变换和重组。因此,研究转基因家畜在理论和生产应用上都有广阔而诱人的前景,本文就转基家畜研究的方法、现状以及存在的问题和展望进行了综述。

高新技术在畜牧业中的应用

近年来,现代生物技术在畜牧业巾的应用日益广泛,经济效益显著,发展前景广阔,现综述如下。1.胚胎分割移植技术在自然条件下,一头良种母牛一生只产10多头小牛,采用胚胎分割移植技术,一头良种母牛一年至少可获得50多头小牛,大大提高了良种繁殖率。据研究证明,分裂为8细胞前的胚胎,每个细胞均可发育成新个体。应用显微外科技术,将胚胎分割培养,再移植到受体母畜子宫内可发育成新个体。美国用胚胎分割移植技术,将良种奶牛胚胎分割成多片移植,一头牛一年可繁殖小牛数万头。通过显微外科技术将不同品种或物种多胚胎切割搭配,使其细胞融合发育成新个体,目前已获得牛、绵羊的种内嵌合体及山羊与绵羊的种间嵌合体。日本用人工授精及受精卵分割移植技术,获得了双子牛,并移植解冻受精卵产出小猪。中国科学院遗传研究所用胚胎移植技术,借黄牛之腹加速繁殖纯种奶牛。在发达国家牛胚胎移值已形成为一种新产业,年产值已达2000万美元。