土人参的组织和单细胞培养及试管苗开花结实

以土人参的花梗、茎和叶片为外植体在ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织，诱导率为７５％─９０％。愈伤组织经分化和生根培养再生了完整植株。由组织培养再生苗的幼茎诱导的愈伤组织建立悬浮系。由悬浮系分离的单细胞在２／３ＭＳ液体培养基中振荡培养或振荡培养３周后转入双层培养均再生了愈伤组织，再生率分别为０．２８％和０．４１％。愈伤组织在含有较低浓度６－ＢＡ的培养基上分化出苗。幼苗生长迅速，每３周扩增６．７倍，再生植株移栽到土壤中２－３个月开花结实，并长出粗壮的肉质根。再生小植株在试管中继代２－３个月也可开花结实。本文还讨论了愈伤组织的增殖与继代培养对分化的影响以及６－ＢＡ、ＧＡ３和ＭＥＴ在分化和生长发育中的作用。

小麦单细胞培养的研究──再生植株后代主要农艺性状变异及遗传稳定性

试验采用东北农业大学小麦生理和生物技术实验室获得的以普通小麦７７４２再生植株的２５个单细胞无性系为试验材料，对无性系后代株高和熟期等主要农艺性状进行分析．结果表明，株高和熟期等均发生明显变化，株高趋于交接，而且分离出明显接于对照（７７４２）的株系；熟期趋于提早，提早幅度大（５～８ｄ），多数株系均与矮秆结合．株高变矮和熟期提早在早期世代都可以稳定遗传．无性系后代茎秆、颖壳颜色及穗型等形态性状也发生变化，并可稳定遗传．表明小麦体细胞无性系变异是小麦矮秆早熟品种改良的有效途径．

玉米细胞悬浮系的建立与单细胞培养效果

以330、辽7352和丹340共3个玉米自交系的雄幼穗为外植体获取愈伤组织,建立悬浮细胞系,在改良MS、改良B5、改良1/2B5 培养基中进行细胞悬浮培养。试验中发现 ,基因型和培养基对细胞悬浮系有很大影响,其中供试材料330表现最好,圆形细胞率平均达16.5%,改良1/2B5 培养基有利于细胞悬浮培养,500mg·L-1的水解酪蛋白对悬浮细胞生长有促进作用。2,4 -D的浓度影响悬浮细胞的生长和细胞成活率,浓度为1.0～2.0mg·L-1时比较适宜。细胞悬浮培养5～7d继代1次。在悬浮培养1个月后 ,经400目镍网过滤筛选,获得单细胞。单细胞培养中,激素水平和培养方式影响单细胞的分裂率,其中2,4-D的浓度为0.5～1.0mg·L-1时比较适宜。浅层培养和看护培养有利于单细胞的生长。在单细胞培养过程中试验获得了愈伤组织。

小麦单细胞培养的研究——再生植株后代穗部产量构成性状变异

在单细胞植株再生基础上建立起体细胞无性系变异体系。本文是在前文研究基础上，以２５个单细胞无性系为试验材料，进一步对无性系后代穗部产量构成性状进行分析。结果表明，穗部产量性状变异范围较广，有利的变异类型在第４代稳定遗传，并已繁殖到第８代。１９９４年和１９９５年优良稳定株系进行田间品种比较试验，初步筛选出有希望直接应用于生产的株系。

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织，通过继代培养，最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２，４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后，转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养，由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞，细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度，从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．

小麦单细胞培养的研究——再生植株后代籽粒高分子量谷蛋白亚基组成及强度

采用 SDS- PAGE方法对东农 774 2单细胞培养再生植株农艺性状稳定的后代籽粒高分子量谷蛋白亚基进行研究。结果表明 ,与未培养的东农 774 2比较 ,再生植株后代籽粒高分子量谷蛋白亚基发生等位变异。

玉米细胞悬浮系建立和单细胞培养影响因素的研究

以玉米幼胚为外植体进行离体培养,获取愈伤组织,建立悬浮细胞系.试验结果表明:基因型无论是对细胞悬浮系建立还是对单细胞培养都有很大影响;改良1/2B5培养基用于细胞悬浮培养能获得良好的细胞生长与分裂;继代培养时间以及大量元素减半都影响玉米悬浮细胞的生长.

沙打旺(Astragalus adsurgens Pall cv.)单细胞培养再生植株

切取沙打旺无菌苗下胚轴接入固体M5培养基(MS+0.2 mg/1生物素+1 mg/1泛酸钙+1 mg/1 2,4-D+0.7 mg/1 BA+0.2 mg/l NAA)上形成愈伤组织,选用褐绿相间的愈伤组织放入液体CM2培养基(M5+1.3 g/l“1640”)中振荡暗培养。每隔15天换一次液,经过4次换液,用400目网过滤得到大量单细胞。取出单细胞进行双层静止暗培养,每隔7—10天加一次液,一个半月形成小块愈伤组织。然后转入固体M5培养基中增殖,20天形成大块愈伤组织,再转入分化培养基MF2(M5去掉2,4-D)中,一个月左右分化出苗,将苗转入生根培养基,长成完整植株。

小麦单细胞培养的研究——再生植株后代花粉母细胞染色体行为与花粉粒育性

在单细胞培养再生植株后代农艺性状和产量性状研究基础上 ,进一步对再生植株后代的花粉母细胞染色体行为和花粉粒育性进行研究。结果表明 ,花粉母细胞染色体行为发生异常 ,出现落后染色体、环形染色体、染色体桥、断片和粘连以及花粉母细胞仅发生核裂、三极纺锤体、多分体等 ,其中多以落后染色体花粉母细胞出现的频率为最高 ,早期世代为 8.0 3 %～ 51.11% ,随着繁殖世代的增加 ,这种异常的比率逐渐降低 ,到高世代 ( SCC6代 )仅为 0 .50 %～ 9.80 %。花粉粒育性分析结果表明 ,尽管早期世代花粉母细胞发生异常的比率较大 ,但各株系的可育花粉粒比例都在 60 %以上 ,并且均表现为正常结实 ,未发现不育现象。随着世代增加 ,育性也在不断改善 ,高世代绝大多数株系可育花粉粒的比例都在 98%以上。

龙眼单细胞培养及其体胚发生再生植株

以龙眼松散型胚性愈伤组织(CIII类型)为起始材料,进行了单细胞培养及其体细胞胚胎发生再生植株的研究。结果表明:由CIII类型胚性愈伤组织建立起的分散性良好的悬浮细胞系,经过孔径(φ)为40μm的尼龙网过筛,可以获得单细胞悬浮系;采用液体浅层培养,部分单细胞可持续分裂,并且有规则分裂和不规则分裂2种方式,前者可能直接形成体细胞胚胎,后者则先形成多细胞团再形成体胚;在液体浅层培养中,单细胞可不经转移直接形成子叶形体细胞胚胎;这些体细胞胚胎经过成熟培养后,可萌芽生根再生完整植株。

大花君子兰单细胞培养再生绿色植株

以大花君子兰（ｃｌｉｖｉａ ｍｉｎｉａｔａ） 瘤状结构的胚性愈伤组织为单细胞培养来源，在附加２ ｍｇ／ＬＫＴ、１ｍｇ／Ｌ２ ，４ —Ｄ 及３ ％ 蔗糖的ＭＳ基本培养基上培养，诱导出的愈伤组织经同一诱导培养基长期继代培养后形成幼苗，将较大的幼苗转入状苗生根培养基（ 附加０－５ ｍｇ／ＬＫＴ 和０－１ｍｇ／ＬＮＡＡ的１／２ ＭＳ培养基） 上继代培养形成再生绿色植株。绿苗再生频率随继代时间的延长而提高。

高羊茅胚性悬浮细胞系的快速建立及其单细胞培养

本研究采用高羊茅(Millennium和Hundog Ⅴ)成熟种子为材料,以MS为基本培养基,通过添加2.5 mg/L Cu-SO4.5H2O,或提高NH4NO3浓度至2.5 g/L等措施均能明显提高愈伤组织的质量,经过3～5个月的筛选获得疏松干燥、颗粒状、生长旺盛、适合悬浮培养的Ⅱ型胚性愈伤组织。悬浮培养初期需用MSⅠ液体培养基进行一个月的启动培养,之后转用MSⅡ继代保持,约2个月左右即建立起来自高羊茅2个品种的3个悬浮细胞系。生长特性测定结果表明,悬浮培养的初始接种量以1.0～3.0 ml/40 ml为宜,生长周期内其pH值不断波动变化,最适范围在5.0～5.7之间。5～8 d为悬浮系的对数生长期,此时细胞分裂旺盛,增殖较快,是分离单细胞的最佳时期。单细胞培养方式以悬浮培养效果最好。

多胚水稻单细胞培养再生植株

1980年我们筛选获得了4个具有遗传特性的多胚水稻品系,并通过细胞胚胎学研究首次发现并证实上述品系中存在着低频率的不定胚。为了对多胚水稻和无触合生殖现象进行单细胞水平的分析研究以及进行单细胞诱导、引变和筛选工作,对多胚水稻单细胞培养的探索是很有必要的。

海甘蓝单细胞培养再生植株的研究

用海甘蓝无菌幼苗的不同部位作外植体，进行游离单细胞培养再生植株的研究。结果表明：来自不同部位的外植体再生能力有差异，其中下胚轴为最佳外植体。另外，６ＢＡ的浓度对经单细胞培养后产生的愈伤组织分化出芽有关键的作用。

基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群

目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并在裸鼠体内连续传代4代,并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4",根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况.联合单细胞培养,取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆,检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性,即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率;取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色,并在共聚焦显微镜下观察其染色情况;根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.结果:裸鼠体内低剂量阿霉素干预,在体内连续成瘤传代过程中,裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%,且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短,以此达到了肝癌干细胞的初步富集;增殖能力:全克隆增殖速度最快,细胞量最大,部分克隆次之,旁克隆增殖速度最慢,并于第10天开始出现细胞皱缩死亡;克隆形成率:BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M,差异有统计学意义(P<0.05);悬浮球形成率:仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球,其余细胞系不形成悬浮球,而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较,无统计学意义(P>0.05);BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况:BEL-7404及BEL-7404-A D M-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在,但部分克隆、旁克隆全染,且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强于BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆.结论:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法所形成的克隆亚群中,全克隆含有更高比例的肝癌干细胞.

一步成形法制备单细胞培养芯片

越来越多的生物学研究聚焦在单细胞层面,然而现有基于化学表面修饰的单细胞定位培养芯片存在制备工艺复杂,且细胞定位层图形质量较差影响细胞定位效果的问题。为此,提出一种一步成形的方法,利用聚甲基丙烯酸2-羟乙酯(poly 2-hydroxyethyl methacrylate,Poly HEMA)抑制细胞粘附的特性并结合毛细微模塑技术制备芯片。细胞验证结果表明,该芯片具有制备过程简单,图形完整性和稳定性良好的特点,为基于单细胞的生物学研究提供了一种新方法。

大豆(Glycine max L.Mer.)单细胞培养再生植株的研究简报

近些年来,大豆组织块离体培养的研究进展较快,已有许多报道,而大豆单细胞培养再生植株的研究仅李宝健等在国外有过报道,国内尚无成功的报告。我们对大豆组织块离体培养进行了试验研究。1.悬浮培养细胞的建立摘取授粉后20天的幼荚,消毒后取出子叶接种在MS培养基上。将干种子消毒后种在MS培养基上,暗处生长,取萌发6—7天的无菌苗下胚轴接种在SL培养基上,40天左右这两种外值体形成愈伤组织。然后将子叶愈伤组织转入液体MS胚(MS+0.5mg/12.4-D+5%椰乳)培养基中;下胚轴愈伤组织转入液体SLA(SL+0.06mg/l Picloram+0.1mg/l BA+0.5mg/l 2.

谷物育种新技术——单细胞培养

现在有人在研究不用种子而用单细胞来培育谷类作物的新品系。这种技术的好处是可以把抗病和高产两种性能很好地结合在一起。这项研究是由美国农业科学研究委员会提供资金,而由好几个单位的农业科学研究人员参加的。他们已经能够把某个特定的植物基因加以纯化。

草木樨子叶愈伤组织单细胞培养及植株再生

本文对草木樨子叶愈伤组织进行了单细胞悬浮培养,对基本培养基MS和改良B_5、2.4—D浓度对单细胞分裂增殖的影响进行了研究,并再生出植株。

白桦单细胞培养体系的建立

以白桦花药(单核靠边期)、种子(萌发)及再生苗的茎段诱导愈伤组织,在NT1、NT2和B5三种不同的培养基中进行悬浮培养,筛选出优良的白桦悬浮体系,而后进行单细胞分离的结果表明,白桦花药愈伤组织在B5培养基上生长迅速,分散性好,适合于细胞分离。分离得到的单细胞用不同方式培养,建立了白桦单细胞两步培养法。