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单细胞逆转录聚合酶链反应与膜片钳同步技术 被引量:1
1
作者 徐东杰 张寄南 +1 位作者 曹克将 陈相健 《中华心律失常学杂志》 2005年第1期62-64,共3页
 目的 建立与膜片钳技术相结合的单细胞逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction,RT -PCR)技术。方法 采用传统酶解法分离出SD大鼠单个心室肌细胞,应用全细胞方式膜片钳技术记录通道电流后对同一细胞吸取内...  目的 建立与膜片钳技术相结合的单细胞逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction,RT -PCR)技术。方法 采用传统酶解法分离出SD大鼠单个心室肌细胞,应用全细胞方式膜片钳技术记录通道电流后对同一细胞吸取内容物,采用RT-PCR技术,分别对单细胞内GAPDH及L型钙通道的mRNA表达进行逆转录聚合酶链反应。结果 电泳结果显示GAPDH及L型钙通道条带,对后者的测序分析结果与cDNA基因文库符合率为 100%。结论 此实验方法可以用于同时进行膜片钳操作及单细胞RT-PCR检测。 展开更多
关键词 单细胞逆转录聚合反应 膜片钳同步技术 心室肌细胞 分子生物学
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人源化乙肝表面抗体重链克隆、表达及免疫学特性初步鉴定
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作者 王晔恺 周吉航 +3 位作者 周世权 曾芳 黄燕燕 刘晓光 《医学研究杂志》 2012年第3期54-57,共4页
目的建立一种利用单细胞分选技术克隆人源化乙肝表面抗体重链的方法。方法从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选20个单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,并将IgG(H)基因全长克隆到pEGFP-N1载体... 目的建立一种利用单细胞分选技术克隆人源化乙肝表面抗体重链的方法。方法从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选20个单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,并将IgG(H)基因全长克隆到pEGFP-N1载体,转染COS-7细胞,取上清液进行Western blotting验证,并采用Batty饱和法测定亲和力常数。结果筛选得到IgG(H)能与HBsAg结合,且Ka值达到2.39×109L/mol。结论利用单细胞分选克隆技术获得的抗体重链亲和力较高。 展开更多
关键词 单细胞分选 单细胞反转录聚合反应 乙肝表面抗体 亲和力
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Duchenne型肌营养不良症植入前遗传学诊断研究进展 被引量:2
3
作者 黄文 陈松林 张成 《国外医学(妇幼保健分册)》 2003年第3期129-131,共3页
植入前遗传学诊断是在胚胎着床前确定其遗传物质是否正常 ,从而决定该胚胎能否移植的一门新兴技术 ,该技术已应用于性别、单基因遗传病及染色体遗传病的诊断。目前世界上已有两百多个正常婴儿通过植入前诊断技术诞生 ,该资料回顾了DMD... 植入前遗传学诊断是在胚胎着床前确定其遗传物质是否正常 ,从而决定该胚胎能否移植的一门新兴技术 ,该技术已应用于性别、单基因遗传病及染色体遗传病的诊断。目前世界上已有两百多个正常婴儿通过植入前诊断技术诞生 ,该资料回顾了DMD植入前诊断技术的发展 ,并对其技术路线及目前存在的问题及解决方法进行综述。 展开更多
关键词 植入前遗传学诊断 DUCHENNE型肌营养不良 单细胞聚合酶链反应 技术路线
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植入前遗传学诊断的研究进展
4
作者 朱爱萍 徐清华 +1 位作者 余裕炉 焦保权 《中国优生与遗传杂志》 2003年第6期144-145,共2页
植入前遗传学诊断是对体外受精的胚胎进行遗传学诊断 ,将正常的胚胎植入子宫 ,其技术主要包括胚胎活检、聚合酶链反应及荧光原位杂交。现将这些技术在植入前遗传学诊断中的应用及所存在的相关问题进行综述。
关键词 植入前遗传学诊断 胚胎活检 荧光原位杂交 单细胞聚合酶链反应 胚胎移植
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Duchenne型肌营养不良症的植入前遗传学诊断 被引量:4
5
作者 蒲祥元 金帆 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2009年第5期324-326,330,共4页
植入前遗传学诊断是在胚胎着床前对其遗传物质进行分析,结合体外受精和胚胎移植技术,选择正常的胚胎进行移植的一门新兴的辅助生殖技术,该技术在遗传病的诊断中占有越来越重要的地位。截至到2005年10月世界上已有1959例正常婴儿通过植... 植入前遗传学诊断是在胚胎着床前对其遗传物质进行分析,结合体外受精和胚胎移植技术,选择正常的胚胎进行移植的一门新兴的辅助生殖技术,该技术在遗传病的诊断中占有越来越重要的地位。截至到2005年10月世界上已有1959例正常婴儿通过植入前诊断技术诞生。总结Duchenne型肌营养不良症植入前遗传学诊断的步骤和各项技术,并对其目前存在的问题和解决方法以及其应用前景进行讨论。 展开更多
关键词 植入前遗传学诊断 DUCHENNE型肌营养不良 单细胞聚合酶链反应
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小鼠不同电特性的心肌细胞Kir2.1、SCN5a和SCN1b通道基因的表达:膜片钳结合单细胞RT-PCR技术研究 被引量:1
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作者 骆红艳 梁华敏 +1 位作者 胡新武 唐明 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期82-86,共5页
本文旨在应用膜片钳技术结合单细胞逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术研究小鼠胚胎心肌细胞的不同电生理学特点的分子生物学基础。应用胶原酶B消化分离得到小鼠胚胎早期(E10.5)单个心肌... 本文旨在应用膜片钳技术结合单细胞逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术研究小鼠胚胎心肌细胞的不同电生理学特点的分子生物学基础。应用胶原酶B消化分离得到小鼠胚胎早期(E10.5)单个心肌细胞,先用膜片钳技术记录单个胚胎心肌细胞的动作电位,随即应用玻璃微电极吸取该细胞内容物,进一步应用RT-PCR技术检测该单个心肌细胞离子通道基因Kir2.1、SCN5a和SCN1b的表达,以GAPDH为内参基因。全细胞电流钳技术记录到心室肌样细胞、心房肌样细胞和起搏样细胞的动作电位。心室肌样细胞和心房肌样细胞动作电位的最大舒张期电位(maximum diastolic potential,MDP)较起搏样细胞更负,0期最大除极速度(maximum velocity of depolarization,Vmax)更快;心室肌样细胞动作电位的MDP相对心房肌样细胞更负。相对应的,心室肌样细胞的Kir2.1、SCN5a、SCN1b三种基因表达均较强;心房肌样细胞的SCN5a表达较强,而SCN1b和Kir2.1相对心室肌样细胞表达稍弱;而起搏样细胞的上述三种基因表达均很弱。不同类型心肌细胞动作电位的基本特点与其基因表达密切相关,应用膜片钳技术结合单细胞RT-PCR技术可以敏锐检测到特定电生理特点的分子生物学基础。 展开更多
关键词 膜片钳技术 单细胞逆转录聚合反应 电生理 分子生物学 胚胎心肌细胞
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Acute pancreatitis in aging animals:Loss of pancreatitis-associated protein protection? 被引量:6
7
作者 Sophia Fu Albert Stanek +4 位作者 Cathy M Mueller Nefertti A Brown Chongmin Huan Martin H Bluth Michael E Zenilman 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2012年第26期3379-3388,共10页
AIM:To investigate the effect of age on severity of acute pancreatitis(AP) using biochemical markers,histology and expression of the protective pancreatitisassociated proteins(PAPs).METHODS:AP was induced via intraduc... AIM:To investigate the effect of age on severity of acute pancreatitis(AP) using biochemical markers,histology and expression of the protective pancreatitisassociated proteins(PAPs).METHODS:AP was induced via intraductal injection of 4% sodium taurocholate in young and old rats.Sera and pancreata were assayed at 24 h for the parameters listed above;we also employed a novel molecular technique to assess bacterial infiltration using polymerase chain reaction to measure bacterial genomic ribosomal RNA.RESULTS:At 24 h after induction of AP,the pancreata of older animals had less edema(mean ± SE histologic score of young vs old:3.11 ± 0.16 vs 2.50 ±-0.11,P < 0.05),decreased local inflammatory response(histologic score of stromal infiltrate:3.11 ± 0.27 vs 2.00 ± 0.17,P < 0.05) and increased bacterial infiltration(174% ± 52% increase from sham vs 377% ± 4%,P < 0.05).A decreased expression of PAP1 and PAP2 was demonstrated by Western blotting analysis and immunohistochemical staining.There were no differences in serum amylase and lipase activity,or tissue myeloperoxidase or monocyte chemotactic protein-1 levels.However,in the most-aged group,serum C-reactive protein levels were higher(young vs old:0.249 ± 0.04 mg/dL vs 2.45 ± 0.68 mg/dL,P < 0.05).CONCLUSION:In older animals,there is depressed PAP expression related to a blunted inflammatory response in AP which is associated with worsened bacterial infiltration and higher C-reactive protein level;this may explain the more aggressive clinical course. 展开更多
关键词 Acute pancreatitis AGING RATS Pancreati-tis-associated protein Molecular biology
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人源HBsAb重链体外表达和亲和力、特异性初步鉴定
8
作者 周吉航 王晔恺 +3 位作者 周世权 曾芳 黄燕燕 刘晓光 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第9期2123-2125,共3页
目的:制备人源HBsAb重链,初步鉴定其亲和力和特异性。方法:利用流式单细胞分选技术获得单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,构建IgG(H)基因的表达质粒,转染COS-7细胞并诱导表达。间接ELISA测定... 目的:制备人源HBsAb重链,初步鉴定其亲和力和特异性。方法:利用流式单细胞分选技术获得单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,构建IgG(H)基因的表达质粒,转染COS-7细胞并诱导表达。间接ELISA测定检测亲和力,Western blot鉴定抗体特异性。结果:成功构建表达质粒,间接ELISA显示亲和力Ka值达到2.39×109 L/mol,Western blot鉴定重链有较高的特异性。结论:人源HBsAb重链的体外制备对乙肝防治具有重要价值。 展开更多
关键词 单细胞分选 单细胞逆转录聚合反应 乙肝表面抗体 亲和力
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植入前遗传学诊断的新进展 被引量:5
9
作者 焦泽旭 庄广伦 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第3期250-252,共3页
植入前遗传学诊断作为产前诊断的一种形式 ,可在胚胎种植前进行诊断 ,从而防止遗传病的发生。其技术主要包括胚胎活检、聚合酶链反应及荧光原位杂交。现就这些技术在植入前遗传学诊断中的应用、存在的问题、解决及改进的方法进行综述。
关键词 荧光原位杂交 植入前遗传学诊断 单细胞聚合酶链反应 胚胎种植 产前诊断
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单基因病植入前遗传学诊断难点及误诊原因分析 被引量:5
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作者 徐艳文 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期251-254,共4页
可供检测的遗传物质极少是单基因病植入前遗传学诊断(PGD)的瓶颈问题。单基因病PGD误诊的原因主要包括单细胞聚合酶链反应(PCR)固有问题、胚胎细胞固有问题以及与诊断技术不相关的人为错误等。文章首先分析单基因PGD的诊断难点,在此基... 可供检测的遗传物质极少是单基因病植入前遗传学诊断(PGD)的瓶颈问题。单基因病PGD误诊的原因主要包括单细胞聚合酶链反应(PCR)固有问题、胚胎细胞固有问题以及与诊断技术不相关的人为错误等。文章首先分析单基因PGD的诊断难点,在此基础上介绍欧洲人类生殖与胚胎协会(ESHRE)PGD联盟报道的误诊案例及其对诊断技术的验证。 展开更多
关键词 植入前遗传学诊断 单细胞聚合酶链反应 等位基因脱扣 胚胎嵌合型
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