单羧酸转运蛋白1在动物体内的转运调控机制

单羧酸转运蛋白1(MCT1)是动物体内最重要的单羧酸转运蛋白亚型,广泛分布于动物体的各个组织细胞中,通过参与乳酸、短链脂肪酸等单羧酸物质的跨膜转运,发挥着多种生物学功能,包括参与营养物质转运、调节pH、作为癌症治疗的靶点、调控葡萄糖代谢平衡等。本文就近年研究,总结了MCT1在单胃和反刍动物体内的定位分布、表达差异,并重点阐述了MCT1通过转运单羧酸发挥的生物学功能和转运调控机制,为MCT1在动物体内的调控机制研究提供参考。

G蛋白偶联受体81、单羧酸转运体1和4在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的:通过检测G蛋白偶联受体81(G protein-coupled receptor 81,GPR81)、单羧酸转运体(monocarboxylate transporter,MCT)1和4在宫颈鳞癌中的表达,探讨GPR81,MCT1,MCT4在宫颈鳞癌发病中的作用。方法:采用免疫组织化学法(SP二步法)检测GPR81,MCT1,MCT4在16例正常宫颈组织、44例宫颈鳞癌组织中的表达情况,分析其表达水平与宫颈鳞癌临床分期和病理的关系,研究GPR81,MCT1,MCT4在宫颈鳞癌组织中表达的相关性。结果:宫颈鳞癌组中的GPR81,MCT1,MCT4表达水平均明显高于正常宫颈组(P<0.01)。在宫颈鳞癌组中,临床分期为I^II期宫颈鳞癌组织中的GPR81,MCT1,MCT4表达低于临床分期为III^IV期者,其中GPR81的表达差异有统计学意义(P<0.05),MCT1和MCT4的表达差异无统计学意义(P>0.05);中分化肿瘤组的GPR81,MCT1,MCT4表达低于低分化肿瘤组,但差异无统计学意义(P>0.05);无淋巴结转移的宫颈鳞癌组与有淋巴结转移的宫颈鳞癌组的GPR81,MCT1,MCT4表达无明显差异(P>0.05)。GPR81,MCT1,MCT4在宫颈鳞癌组织中的表达无明显相关关系(P>0.05)。结论:GPR81,MCT1,MCT4可能与宫颈鳞癌的发病有关,GPR81可能与宫颈鳞癌的病情进展有关。

胎盘SLC16A1基因及单羧酸转运蛋白1表达量与妊娠期糖尿病的关系

目的探讨胎盘SLC16A1基因及单羧酸转运蛋白1(MCT1)表达量与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法选取该院1361例妊娠女性为研究对象,其中GDM患者281例纳入GDM组,健康妊娠女性1080例纳入正常妊娠组。正常妊娠组及GDM组按1∶1匹配(n=105)后比较两组胎盘MCT1及SLC16A1基因表达量,并采用Logistic回归分析MCT1及SLC16A1基因表达量与GDM的关系。匹配参数为体质量指数、年龄、生产史、GDM病史(匹配容差分别为0.3、0、0、0)。结果GDM组、正常妊娠组SLC16A1基因表达量分别为0.390(0.006,2.980)、0.561(0.014,4.205),GDM组明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。GDM组、正常妊娠组MCT1表达量分别为0.097±0.044、0.166±0.030,GDM组明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示SLC16A1基因表达量增加是GDM的保护因素(OR=0.740,95%CI 0.561~0.974,P<0.05)。结论GDM患者胎盘SLC16A1基因及MCT1表达量均下降,SLC16A1基因表达量增加是GDM的保护因素。

消化道上皮单羧酸转运蛋白1(MCT1)跨膜转运功能的调控机理

良好地吸收营养物质是家畜高效养殖的重要前提。单羧酸是饲粮在消化道发酵产生的重要供能物质,其吸收主要通过单羧酸转运蛋白(MCT1)来实现。深入研究MCT1的转运功能及调控机理对提高家畜生产性能具有重要意义。本文就MCT1的基因及蛋白结构特点、消化道分布与定位特点、转运机制和调控因素及机理进行综述,以期为MCT1的功能调控研究提供参考。

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制。方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药。此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05)。同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。结论抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关。

单羧酸转运蛋白1、2在乳腺浸润性导管癌中的表达变化及其与病理级别之间的关系

目的探讨单羧酸转运蛋白(MCT)1、2在人不同病理级别乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达变化及其对增殖、生长的分子机制。方法收集人不同病理级别乳腺IDC标本37例,以肿瘤周围相对正常乳腺组织作为对照,运用苏木素-伊红(HE)染色作病理诊断分级,石蜡切片免疫组织化学显色,并用Western印迹方法观察MCT 1、2的表达变化。结果与正常乳腺组织相比,MCT 1、2在乳腺IDC中均有高表达;其表达量随病理级别的升高逐渐增强。结论 MCT 1、2在乳腺IDC组织中表达增强,其强度变化与肿瘤的恶性程度呈正相关。

单羧酸转运蛋白1、4在甲状腺乳头状癌中的表达及其相关性研究

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)1、4在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及临床病理学意义。方法收集2015年1月-2018年2月在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的220例PTC标本及104例良性甲状腺组织标本。采用免疫组化SP法检测MCT1和MCT4的表达水平,探讨二者与临床病理的关系。结果MCT1在188例PTC组织中呈阳性表达,在29例良性甲状腺组织中呈阳性表达;MCT4在190例PTC组织中呈阳性表达,在35例良性甲状腺组织中呈阳性表达;PTC组织中MCT1、MCT4阳性率均明显高于良性甲状腺组织(P<0.01)。MCT1和MCT4蛋白表达水平与PTC患者年龄、性别、肿瘤大小均无明显相关性,而与颈部淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论MCT1和MCT4在PTC中高表达,且与颈淋巴结转移密切相关,有望成为甲状腺乳头状癌生物行为的有效标志。

单羧酸转运蛋白1在APP／PS1转基因小鼠脑内的表达

目的：观察单羧酸转运蛋白1（MCT1）在淀粉样蛋白前体（APP）／早老素1（PSl）双重转基因阿尔茨海默症（AD）模型小鼠脑组织中的表达变化，探讨MCT1表达变化与AD学习记忆能力障碍／丧失之间的关系。方法：用水迷宫检测APP／PSI转基因小鼠的学习记忆能力，用APP／PSl转基因小鼠和昆明小鼠作为AD组及正常对照组，取其海马和大脑皮质，免疫组织化学和免疫印迹检测MCT1的表达。结果：免疫组织化学显示，MCT1在对照组和AD组海马及大脑皮质区均有表达，但AD组MCT1阳性细胞数目减少，胞体变小，星形胶质细胞的突起变短变细；AD组海马及大脑皮质区域MCT1平均吸光度值较对照组显著降低；免疫印迹显示，AD组海马和大脑皮质MCT1蛋白量较对照组显著降低。结论：MCT1在APP／PSI转基因小鼠海马及大脑皮质细胞中呈表达下调趋势，提示MCT1的表达降低很可能与AD学习记忆能力障碍／丧失有关。

人肺癌组织单羧酸转运蛋白—1基因的表达及其意义

目的：研究人肺癌组织中单羧酸转运蛋白－1（MCT1）基因的表达水平，探索肿瘤治疗新策略。方法：以寡聚脱氧核苷酸为探针，用原位分子杂交法探测人肺癌组织和人正常肺组织MCT1mRNA的表达水平。结果：人 肺癌组织的MCT1mRNA的表达显著强于正常肺组织，呈过表达。结论：MCT1基因的过表达可能是肺癌组织细胞的分子生物学特征之一。

单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性

目的探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-Br PA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路。方法 MTT法检测3-Br PA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染c DNA上调MCT1的表达后,检测3-Br PA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响。结果 3-Br PA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72%和7.8%;但200μmol/L 3-Br PA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6%和82.3%。MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200μmol/L 3-Br PA对细胞的增殖抑制率为72.44%,明显高于对照组(P<0.05);25、50、100、200μmol/L 3-Br PA作用细胞6 h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98%、88.44%、43.3%、27.56%。结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-Br PA的敏感性,其机制可能是将3-Br PA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用。

单羧酸转运蛋白1、2、4在急性心衰大鼠模型肾上腺的表达变化

目的观察单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、2、4在急性心衰大鼠肾上腺的表达变化,以探讨急性心衰肾上腺的能量代谢变化。方法随机将成年健康SD大鼠(雌雄不限,250±20 g)50只,分为3组:正常组(n=10)、假手术组(n=20,2 subgroups,10 in each)和模型组(n=20,2subgroups,10 in each)。用1.5%戊巴比妥钠静脉注射制作大鼠急性心衰模型;注毕,运用BL-420F生物机能实验系统记录左室内压峰值(LVSP)和左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)的变化曲线;用IHC和Western Blot检测模型鼠,肾上腺MCT1,2,4的表达变化。结果在急性心衰发生10 min时,肾上腺皮质和髓质MCT1、2、4的表达均有升高,此时假手术组MCT1、2、4也有升高。与正常对照组相比较,两组的MCT1、2、4的表达升高均具有统计学意义(P<0.05);在20 min时,大鼠肾上腺MCT1、2、4的表达较正常组却有所下降,与正常组相比较,仅MCT1的表达下调具有统计学意义(P<0.05),而MCT2、4则无明显差别(P>0.05)。假手术20 min组与10 min组相比较,MCT1、2、4的表达无明显差别(P<0.05)。结论在急性心衰和创伤性应激状态下,肾上腺MCT1、2、4的表达,在十分钟内呈代偿性增加,但随着心衰时间的延长,其表达反而降低,机体的能量代谢出现失代偿,提示MCT1、2、4参与创伤性应激及急性心衰的能量代谢过程。

单羧酸转运蛋白1促进胰腺导管癌细胞浸润转移的机制研究

背景与目的:单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)是细胞转运乳酸、丙酮酸等代谢产物及能量物质的一种重要蛋白质,其在胰腺导管癌中的作用及机制鲜有研究报道。该研究旨在探讨MCT1在胰腺导管癌中的表达及临床病理学意义。方法:纳入78例胰腺导管癌患者的癌组织及癌旁正常组织,运用免疫组织化学技术检测MCT1在癌组织和癌旁正常组织中的表达水平并分析其临床病理学意义。在体外细胞系水平上,我们运用胰腺癌细胞系PANC-1和Capan-1,运用细胞克隆形成实验、细胞划痕和Transwell实验分析沉默MCT1后胰腺癌细胞增殖、迁移和浸润的改变。为明确MCT1的相关作用机制,我们通过生物信息学分析,预测miR-124-3p是MCT1的潜在调控微小RNA;为了进一步验证,我们运用双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p对MCT1的调控效果;运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分别检测51对新鲜胰腺癌组织中MCT1和miR-124-3p的基因表达并分析两者的相关性。结果:MCT1的阳性表达主要位于细胞膜和细胞质。相比癌旁正常组织,MCT1在胰腺导管癌组织中显著高表达,其表达水平与胰腺导管癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移和不良预后具有显著相关性。在体外细胞系水平上,沉默MCT1能够显著抑制胰腺癌细胞系PANC-1和Capan-1的增殖、迁移和浸润;miR-124-3p在胰腺癌组织中显著低表达,并且与MCT1 mRNA的表达具有显著负相关性,能够负调控MCT1的蛋白表达。结论:MCT1是胰腺导管腺癌的致癌基因,miR-124-3p能够负调控MCT1的表达。

直肠癌组织中单羧酸转运蛋白1、单羧酸转运蛋白4的表达情况及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨直肠癌组织中单羧酸转运蛋白1(MCT1)、单羧酸转运蛋白4(MCT4)的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测106例直肠癌患者直肠癌组织中MCT1、MCT4的表达情况,分析其与患者临床特征及预后的关系。对Ⅲ期直肠癌患者(术后均接受辅助性放化疗)进行亚组分析,比较不同MCT1、MCT4表达情况的Ⅲ期直肠癌患者的生存预后。结果106例患者中,57例患者MCT1呈高表达,48例患者MCT4呈高表达。不同临床分期、淋巴结转移情况、血管浸润情况、术后5年内复发和(或)转移情况的直肠癌患者直肠癌组织中MCT1和MCT4的表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。MCT1低表达患者的生存情况优于MCT1高表达患者,MCT4低表达患者的生存情况优于MCT4高表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。MCT1低表达的Ⅲ期直肠癌患者的生存情况优于MCT1高表达的Ⅲ期直肠癌患者,MCT4低表达的Ⅲ期直肠癌患者的生存情况优于MCT4高表达的Ⅲ期直肠癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论直肠癌组织中MCT1和MCT4表达情况与患者临床分期、淋巴结转移情况、血管浸润情况及生存情况有关,可将MCT1、MCT4作为直肠癌预后预测的重要指标。

甲状旁腺激素相关蛋白、单羧酸转运泵家族1信号通路对肺腺癌细胞衰老的调节作用及其机制

目的探讨调节甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、单羧酸转运泵家族1(MCT1)信号通路对Lewis肺腺癌细胞株LLC细胞衰老的影响及其机制。方法将LLC细胞分为A、B、C、D组,每组10孔。分别加入PTHrP信号通路激活剂PTHrP(1~34)、PTHrP受体竞争抑制物PTHrP(7~34)、MCT1信号通路抑制剂AZD3965、PBS培养72 h后收集细胞。用β-半乳糖苷酶(βGal)染色法观察各组细胞衰老程度,结果以细胞中βGal阳性染色面积占细胞总面积的百分比表示。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达。建立细胞pHi与细胞内BCECF荧光强度关系的标准曲线,细胞pHi结果以495 nm/440 nm延荧光强度比值表示。按照试剂盒说明书操作检测各组细胞外乳酸水平。结果 A、B、C、D组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比分别为8.47%±0.15%、12.56%±0.20%、16.66%±0.20%、9.52%±0.30%。B、C组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比与D组相比,P均<0.05。A、B、C、D组细胞中PTHrP mRNA表达量分别为11.49±0.42、7.68±0.10、8.56±0.13、9.35±0.13,MCT1 mRNA表达量分别为7.84±0.19、4.38±0.09、3.53±0.10、6.58±0.21。A组细胞中PTHrP mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中PTHrP mRNA表达量低于C、D组(P均<0.05);C组细胞中PTHrP mRNA表达量低于D组(P<0.05);A组细胞中MCT1 mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中MCT1 mRNA表达量高于C组(P<0.05),但低于D组(P<0.05);C组细胞中MCT1 mRNA表达量低于D组(P<0.05)。A、B、C、D组细胞pHi分别为3.39±0.12、6.05±0.12、7.08±0.09、4.66±0.08,细胞外乳酸水平分别为(8.34±0.12)、(5.13±0.15)、(3.39±0.10)、(7.33±0.11)U。A组细胞pHi低于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞pHi低于C组(P<0.05),但是高于D组(P<0.05);C组细胞pHi高于D组(P<0.05);A组细胞外乳酸水平高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞外乳酸水平高于C组(P<0.05),但是低于D组(P<0.05);C组细胞外乳酸化水平低于D组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,各组细胞衰老程度与PTHrP mRNA表达量、MCT1 mRNA表达量、pHi、细胞外乳酸水平均相关,r分别为-0.613、-0.880、0.906、-0.961,P均<0.05。结论调节PTHrP、MCT1信号通路可以影响肺腺癌细胞衰老。其机制可能是由于PTHrP信号通路和MCT1信号通路相互影响,共同调节肺腺癌细胞的乳酸转运。

单羧酸转运蛋白1抑制剂AZD3965对胃癌BCG-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)抑制剂AZD3965通过抑制肿瘤细胞MCT1对胃癌细胞BCG-823增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法:MTT法检测不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)对胃癌细胞的增殖抑制作用。通过倒置显微镜观察胃癌细胞BCG-823在不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)处理后细胞形态的改变。集落克隆形成实验观察AZD3965对胃癌细胞BCG-823集落形成能力的影响。PI单染流式细胞术检测AZD3965对胃癌细胞BCG-823细胞凋亡的影响。Western blotting检测AZD3965作用下MCT1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:经AZD3965作用后BCG-823细胞的生长受到抑制,且随着药物浓度和作用时间的增加,AZD3965对人胃癌细胞BCG-823的增殖抑制作用逐渐增强(P <0. 01)。通过倒置显微镜观察不同浓度AZD3965(20、40、80μmol/L)处理胃癌细胞后,相较空白对照组(0μmol/L AZD3965)胃癌细胞数目明显减少,细胞发生皱缩破裂,细胞形态发生改变。集落克隆形成实验表明AZD3965对胃癌细胞BCG-823有增殖抑制作用。PI单染流式细胞术结果显示,20、40、80μmol/L AZD3965处理BCG-823细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为(13. 33±4. 13)%、(22. 53±2. 97)%和(36. 63±5. 23)%,与空白对照组(0μmol/L AZD3965)相比明显升高(P <0. 01)。Western blotting结果显示,AZD3965可以下调BCG-823细胞中MCT1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。结论:AZD3965可通过抑制MCT1活性,并且激活Bax和抑制Bcl-2,从而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。

单羧酸转运蛋白1在低糖条件下促进M1型小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶表达

目的探讨在缺血环境下诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)与M1型促炎性小胶质细胞的关系。方法小鼠6只,采用光化学栓塞法制作脑缺血模型;BV2细胞使用含5 mmol/L低糖培养基刺激2 h。使用免疫荧光染色、Western blotting方法检测缺血小鼠大脑中小胶质细胞和低糖刺激的BV2细胞中iNOS、MCT1及精氨酸酶1(ARG1)的表达。用RNA干扰及质粒转染技术分别调控未处理BV2细胞中的MCT1表达,检测iNOS及ARG1的变化。结果激光制作脑缺血模型成功后,缺血侧半球中iNOS和MCT1以及ARG1的表达升高(P<0.01),且MCT1主要表达在离子钙接头蛋白分子1(Iba1)阳性和iNOS阳性的小胶质细胞中。低糖刺激BV2小胶质细胞后,iNOS和MCT1表达升高(P<0.001),而ARG1表达降低(P<0.01),MCT1主要表达在iNOS阳性的BV2细胞中。RNA干扰BV2细胞后,细胞中MCT1表达降低,iNOS表达下降(P<0.01);质粒转染BV2细胞后,MCT1表达增高,iNOS表达增加(P<0.01)。但在两种情况下,ARG1表达水平均未发生明显变化。结论在低糖环境中小胶质细胞向M1表型极化,MCT1和iNOS表达同时增高,MCT1参与iNOS的表达上调,可能处于iNOS调节通路的上游。

半抗原3-苯氧基苄基-2,2-二甲基环丙烷-1,3-二羧酸单酯的合成

为了建立拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫分析方法 ,由菊酸经过氯化、酯化和氧化作用合成了半抗原(3-苯氧基苄基 - 2 ,2 -二甲基环丙烷 - 1,3 -二羧酸单酯 ) ,产物的结构经IR ,1

CD147/HAb18G单克隆抗体对人脑胶质瘤细胞乳酸转运及细胞生长的影响

目的研究CD147/HAb18G基因工程单克隆抗体对体外培养U251细胞单羧酸转运蛋白-1(monoc arboxylatetransporter-1,MCT1)表达分布和糖酵解乳酸代谢的影响。方法体外培养U251细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别加入不同剂量的CD147/HAb18G单抗封闭细胞表面CD147分子。免疫荧光法检测各组细胞膜上MCT1表达分布改变,分光光度计检测各组细胞内乳酸含量,分别绘制生长曲线并记录生长数据。结果低剂量组和高剂量组MCT表达分布改变,相比对照组其胞膜有效表达减少[随机计数500个细胞中胞膜完整表达细胞数:对照组(367.34±6.92),低剂量组(161.92±7.33),高剂量组(54.58±4.80),P<0.01],胞质无效表达增多[胞质表达细胞数:对照组(12.08±3.03),低剂量组(70.83±4.71),高剂量组(264.58±6.14),P<0.01];细胞内乳酸浓度在低、高剂量组明显增高[对照组(0.222±0.020)mmol/L,低剂量组(0.418±0.015)mmol/L,高剂量组(0.713±0.018)mmol/L,P<0.01],生长指标抑制,生长曲线低平[对照组最大细胞密度(5.24±0.37)×105/ml,低剂量组(4.23±0.48)×105/ml,高剂量组(3.19±0.46)×105/ml,P<0.01]。以上改变在低剂量组和高剂量组间差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论 CD147/HAb18G单抗通过干扰CD147对MCT1表达的引导使胶质瘤细胞膜上MCT1有效分布减少,影响其糖酵解产生乳酸的排出,具有抑制肿瘤生长作用。

单羧酸转运蛋白1调节乳酸转运对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞分化的影响

目的 探讨单羧酸转运蛋白1(MCT1)调控乳酸转运对大鼠脊髓损伤(SC1)后星形胶质细胞(AS)分化的作用及其机制.方法 成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠购自山西医科大学实验动物中心,使用改良Allen's法制作SCI模型,分为假手术组、SCI(12 h)组、SCI+LA组、SCI+AZD组,每组5只,共20只,观察SCI后腹腔注射外源性乳酸钠或MCT1抑制剂对大鼠脊髓AS分化的作用.培养SD大鼠脊髓AS并建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,首先观察不同时间点OGD/R处理AS的乳酸含量和MCT1表达.其次观察OGD/R后添加外源性乳酸钠或MCT1抑制剂对AS分化的影响,分为正常组,OGD/R(OGD4.5 h/R12 h)组,OGD/R+乳酸钠组,OGD/R+乳酸钠+AZD组.最后分析Bay 11-7082(NF-κB抑制剂)或Stattic(STAT3抑制剂)处理通路蛋白对AS分化的影响,分为OGD/R+乳酸钠组,OGD/R+乳酸钠+BAY组,OGD/R+乳酸钠+STA组.采用单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 SCI 12 h组大鼠脊髓MCT1表达高于假手术组(2.776±0.353比1.000,q=13.460,P<0.01).SCI+LA 组脊髓 MCT1(2.767±0.208 比 1.900±0.100,q=10.840,P<0.01)和 S100A10(1.933±0.153 比 1.630±0.061,q=5.924,P<0.05)蛋白表达高于 SCI 组,C3蛋白表达低于 SCI 组(1.603±0.035 比 1.830±0.147,q=4.561,P<0.05);而 SCI+AZD 组脊髓MCT1(1.233±0.153 比 1.900±0.100,q=8.341,P<0.05)和 S100A10(1.237±0.067 比 1.630±0.061,q=7.681,P<0.01)蛋白表达低于 SCI 组,C3 蛋白表达高于 SCI 组(2.340±0.082 比 1.830±0.147,q=10.260,P<0.01).体外培养的原代星形胶质细胞在OGD4.5 h/R12 h组MCT1蛋白表达高于正常组(1.760±0.053 比 1.000,q=6.415,P<0.01),OGD/R+LA 组 AS 胞内乳酸含量(0.028±0.001 比 0.022±0.001,q=6.415,P<0.01),MCT1(2.200±0.100 比 1.633±0.058,q=13.870,P<0.01)和 p-STAT3 蛋白(3.400±0.173 比 2.133±0.252,q=12.850,P<0.01)表达高于OGD/R 组,细胞核 NF-κB 蛋白表达低于 OGD/R 组(1.153±0.129 比 1.933±0.153,q=12.100,P<0.01),A1 分化低于 OGD/R 组(1.133±0.058 比 1.600±0.100,q=7.000,P<0.01),A2 分化高于OGD/R 组(2.300±0.173 比 1.433±0.058,q=15.920,P<0.01).而 O GD/R+LA+AZD 组 AS 胞内乳酸含量(0.014±0.002 比 0.022±0.001,q=9.278,P<0.01),MCT1(1.430±0.082 比 1.633±0.058,q=4.976,P<0.01)和 p-STAT3 蛋白(1.533±0.153 比 2.133±0.252,q=6.085,P<0.05)表达低于OGD/R组,细胞核NF-κB蛋白表达高于OGD/R组(2.400±0.100比1.933±0.153,q=7.239,P<0.01),A1 分化高于 OGD/R 组(2.200±0.200 比 1.600±0.100,q=9.000,P<0.01),A2分化低于 OGD/R组(1.133±0.047 比 1.433±0.058,q=5.510,P<0.05).OGD/R+LA+BAY组A1 分化低于 OGD/R+LA组(0.846±0.050 比 1.000,q=6.527,P<0.01),A2 分化高于 OGD/R+LA 组(1.300±0.100 比 1.000,q=7.491,P<0.05);而 OGD/R+LA+STA 组 A1 分化高于OGD/R+LA组(1.177±0.049 比 1.000,q=7.520,P<0.01),A2 分化低于 OGD/R+LA 组(0.813±0.066 比 1.000,q=4.661,P<0.01).结论 MCT1 调控 SCI 后 AS 乳酸转运,增加 AS 胞内乳酸含量促进其向A2分化,可以通过NF-κB/STAT3信号通路发挥上述调节作用.

单羧酸转运泵基因反义真核表达载体的构建

目的 构建单羧酸转运泵基因反义逆转录病毒真核表达载体。方法 应用RT PCR方法扩增带有双酶切位点的单羧酸转运泵目的基因片段 ,与带有相同酶切位点的pLXSN逆转录病毒真核表达载体粘末端进行反向基因插入连接 ,构建具有反义表达的逆转录病毒载体。结果 构建载体进行双酶切电泳分析及插入片段基因序列分析 ,证明反义载体构建成功。结论 应用RT PCR方法扩增插入DNA片段 ,简单、灵活、快捷。双酶切定向连接构建反义表达载体可实现构建一步到位 ,免去正反向筛选的麻烦。