甲状旁腺激素相关蛋白、单羧酸转运泵家族1信号通路对肺腺癌细胞衰老的调节作用及其机制

目的探讨调节甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、单羧酸转运泵家族1(MCT1)信号通路对Lewis肺腺癌细胞株LLC细胞衰老的影响及其机制。方法将LLC细胞分为A、B、C、D组,每组10孔。分别加入PTHrP信号通路激活剂PTHrP(1~34)、PTHrP受体竞争抑制物PTHrP(7~34)、MCT1信号通路抑制剂AZD3965、PBS培养72 h后收集细胞。用β-半乳糖苷酶(βGal)染色法观察各组细胞衰老程度,结果以细胞中βGal阳性染色面积占细胞总面积的百分比表示。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达。建立细胞pHi与细胞内BCECF荧光强度关系的标准曲线,细胞pHi结果以495 nm/440 nm延荧光强度比值表示。按照试剂盒说明书操作检测各组细胞外乳酸水平。结果 A、B、C、D组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比分别为8.47%±0.15%、12.56%±0.20%、16.66%±0.20%、9.52%±0.30%。B、C组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比与D组相比,P均<0.05。A、B、C、D组细胞中PTHrP mRNA表达量分别为11.49±0.42、7.68±0.10、8.56±0.13、9.35±0.13,MCT1 mRNA表达量分别为7.84±0.19、4.38±0.09、3.53±0.10、6.58±0.21。A组细胞中PTHrP mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中PTHrP mRNA表达量低于C、D组(P均<0.05);C组细胞中PTHrP mRNA表达量低于D组(P<0.05);A组细胞中MCT1 mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中MCT1 mRNA表达量高于C组(P<0.05),但低于D组(P<0.05);C组细胞中MCT1 mRNA表达量低于D组(P<0.05)。A、B、C、D组细胞pHi分别为3.39±0.12、6.05±0.12、7.08±0.09、4.66±0.08,细胞外乳酸水平分别为(8.34±0.12)、(5.13±0.15)、(3.39±0.10)、(7.33±0.11)U。A组细胞pHi低于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞pHi低于C组(P<0.05),但是高于D组(P<0.05);C组细胞pHi高于D组(P<0.05);A组细胞外乳酸水平高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞外乳酸水平高于C组(P<0.05),但是低于D组(P<0.05);C组细胞外乳酸化水平低于D组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,各组细胞衰老程度与PTHrP mRNA表达量、MCT1 mRNA表达量、pHi、细胞外乳酸水平均相关,r分别为-0.613、-0.880、0.906、-0.961,P均<0.05。结论调节PTHrP、MCT1信号通路可以影响肺腺癌细胞衰老。其机制可能是由于PTHrP信号通路和MCT1信号通路相互影响,共同调节肺腺癌细胞的乳酸转运。

PTHrP、MCT1信号通路对非小细胞肺癌细胞衰老的调节机制研究

目的研究探讨甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、单羧酸转运泵家族1(MCT1)信号通路对非小细胞肺癌衰老的调节机制。方法将2014年5月-2018年5月在该医院培养的80孔非小细胞肺癌A549细胞分为A、B、C、D共4组,每组20孔。其中A组细胞中加入PTHrP信号通路抑制剂、B组细胞加入MCT1信号通路抑制剂、C组细胞加入PTHrP信号通路激活剂、D组细胞加入等量的PBS培养液,4组细胞经联系72 h培养。采用β-半乳糖苷酶染色法(β-Gal)观察4组细胞的衰老程度。对4组细胞进行PCR扩增,以实时荧光定量PCR方法检测PTHrP mRNA、MCT1mRNA的表达量。并对各组细胞中pHi染色小体的和细胞外乳酸水平进行检测比较。并采用Pearson检验对各指标间进行相关性分析。结果①4组细胞间β-Gal染色阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中A组、B组阳性率(13.98±2.53)%、(14.23±3.21)%均高于D组(10.09±2.98)%,C组阳性率(8.29±2.10)%则低于D组,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。②4组细胞的PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),其中A组、B组PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达量[(7.09±1.53)、(5.29±1.22);(7.26±1.61)、(4.98±1.17)]低于D组[(9.13±1.98)、(7.19±1.68)],而C组表达率[(12.32±2.09)、(9.57±1.98)]则高于D组,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。③4组细胞的p Hi染色小体的和细胞外乳酸水平比较有统计学差异,A组、B组pHi染色小体水平高于D组,C组则低于D组,A组、B组细胞外乳酸水平低于D组,C组则高于D组,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。④Pearson相关性检验显示,各组细胞的β-Gal染色阳性率(即衰老程度)与PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达量呈负相关性,与pHi染色小体水平呈正相关性,与细胞外乳酸水平呈负相关性(P<0.05)。结论 PTHrP、MCT1信号通路状态可以对非小细胞肺癌细胞的衰老起到调节作用,PTHrP、MCT1间相互影响,共同调节肺癌细胞的乳酸转运过程。