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一株虾源假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)的分离鉴定及口服后对对虾体内弧菌的影响
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作者 朱娜 王秀华 +3 位作者 张红芳 李婷 王平 张雪梅 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期223-232,共10页
为探讨对虾细菌性病原的微生物防控技术,采用牛津杯打孔法对分离自对虾育苗池的一株编号为2021041402-14的细菌(简称“02HN”)进行了抗菌测试,分析其对欧文氏弧菌(Vibrio owensii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、坎贝氏弧菌(V.campbellii)、... 为探讨对虾细菌性病原的微生物防控技术,采用牛津杯打孔法对分离自对虾育苗池的一株编号为2021041402-14的细菌(简称“02HN”)进行了抗菌测试,分析其对欧文氏弧菌(Vibrio owensii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、坎贝氏弧菌(V.campbellii)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)等6株虾病原菌的抑菌效果及最低抑菌浓度,通过浸泡感染测试了菌株02HN对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生物毒性,采用16S rRNA、gyrB-rpoD串联基因序列比对法及生理生化方法对该菌进行了鉴定,并将该菌添加到饲料中投喂对虾,评价该菌对对虾体内弧菌数量的影响。结果表明:菌株02HN对欧文氏弧菌、哈维氏弧菌、坎贝氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和美人鱼发光杆菌均具有抑菌效果,其最低抑菌浓度分别为2.32×10~4、2.32×10~3、2.32×10~6、2.32×10~6、2.32×10~3、2.32×10~6 CFU/mL;采用02HN浓度为1×10~7 CFU/mL以下的菌液浸泡凡纳滨对虾,生物毒性不明显;分子鉴定显示,该菌与杀鱼假交替单胞菌(Pseudoalteromonas piscicida)及金丽假交替单胞菌(P.flavipulchra)最为接近,为一株假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.);对虾摄食菌含量分别为1×10~5、1×10~7cells/g的饵料后,其存活及生长无显著性变化,但能显著降低对虾肝胰腺中的弧菌数量(P<0.05)。研究表明,菌株02HN在对虾养殖中具有开发应用潜能,本研究结果可为对虾细菌性病原的生物防控提供生物材料及技术思路。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 假交替单胞菌 拮抗菌 对虾病原菌
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假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.AJ5产κ-卡拉胶酶的培养条件优化(英文) 被引量:7
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作者 马悦欣 董双林 +2 位作者 刘双连 牟海津 江晓路 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期757-764,共8页
【目的】本研究的目的是优化Pseudoalteromonas sp.AJ5菌株的培养条件使之产生高活性的胞外κ-卡拉胶酶。【方法】通过富集培养技术从刺参肠道分离出一株卡拉胶降解菌AJ5,该菌株能利用卡拉胶作为惟一碳源和能源。依据形态学和生理学特征... 【目的】本研究的目的是优化Pseudoalteromonas sp.AJ5菌株的培养条件使之产生高活性的胞外κ-卡拉胶酶。【方法】通过富集培养技术从刺参肠道分离出一株卡拉胶降解菌AJ5,该菌株能利用卡拉胶作为惟一碳源和能源。依据形态学和生理学特征及16SrRNA基因序列分析,将该菌株鉴定为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)。通过单因素试验和正交试验对Pseudoalteromonas sp.AJ5菌株产胞外κ-卡拉胶酶的培养条件进行了优化。【结果】单因素试验结果表明,Pseudoalteromonas sp.AJ5菌株的最佳培养条件为250mL三角瓶装入75mL发酵培养基、摇床转速150r/min、接种量7%、pH8.0。单因素试验和正交试验结果显示该菌株的最佳培养基组成为κ-卡拉胶1g/L、牛肉膏2g/L、NaCl20g/L、K2HPO4·3H2O1g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、MnCl2·4H2O0.2g/L、FePO4·4H2O0.01g/L;培养温度为28℃,培养时间为28h。【结论】Pseudoalteromonas sp.AJ5菌株分泌胞外κ-卡拉胶酶,在最佳培养条件下,该菌株的κ-卡拉胶酶活力比优化前提高了4倍。 展开更多
关键词 κ-卡拉胶酶 优化 发酵条件 培养基组成 假交替单胞菌
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适冷海洋细菌交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)MB-1内切葡聚糖酶基因的克隆和表达 被引量:15
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作者 游银伟 汪天虹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期142-144,共3页
从黄海深海海底淤泥中筛选出一株产纤维素酶的适冷革兰氏阴性杆菌MB 1,克隆和分析了MB 1的 16SrDNA序列 (GenBank接受号 :AY5 5 132 1) ,经鉴定为交替假单胞菌 (Pseudoalteromonas) ,命名为Pseudoalteromonassp .MB 1。克隆了该菌适冷... 从黄海深海海底淤泥中筛选出一株产纤维素酶的适冷革兰氏阴性杆菌MB 1,克隆和分析了MB 1的 16SrDNA序列 (GenBank接受号 :AY5 5 132 1) ,经鉴定为交替假单胞菌 (Pseudoalteromonas) ,命名为Pseudoalteromonassp .MB 1。克隆了该菌适冷内切葡聚糖酶基因celA(GenBank接受号 :AY5 5 132 2 ) ,并在大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1中进行了表达。重组E .coli菌体破碎后 ,获取上清液 ,其中融合蛋白GST CelA浓度约为 78 5mg L。分析了融合酶GST CelA的性质 ,其最适反应温度为 35℃ ,最适反应pH值为 7 2 ,为中性适冷酶。 展开更多
关键词 海洋适冷酶 交替假单胞菌 内切葡聚糖酶 融合蛋白表达
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交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆 被引量:15
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作者 熊鹏钧 文建军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期233-237,共5页
从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚... 从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长 14 79bp ,编码一个 492AA的蛋白质。酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonashaloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有 95%的相似性 ,包括一个糖基水解酶家族 5的催化结构域 ,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域。对酶性质的初步研究发现 ,CelX的最适温度为 40℃ ,酶的最适pH在 6~ 展开更多
关键词 交替假单胞菌 DY3菌株 16SrDNA序列分析 内切葡聚糖酶 基因 纤维素酶 克隆
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气单胞菌属低温淀粉酶基因改造与原核表达
5
作者 楚敏 史应武 +3 位作者 顾美英 杨红梅 霍向东 张志东 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期479-484,共6页
【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计... 【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计特异引物,PCR扩增获得C13片段,将其克隆到pMAL-2X,转化到BL-21(DE3)中,筛选蓝白斑,验证PCR及EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,获得高效表达生物工程菌株pMAL-2X-C13。设计定点突变引物,以pMAL-2X-C13为模板,获得低温淀粉酶基因突变株三株C19、C29、C43。【结果】表达蛋白的分子大小为114kD,突变菌株C19蛋白表达量均高于pMAL-2X-C13。【结论】低温淀粉酶基因突变株C19比原始菌株pMAL-2X-C13淀粉酶基因蛋白表达量更高。 展开更多
关键词 单胞菌 α-低温淀粉酶 基因改造 原核表达
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TRAF6/Runx2信号轴对牙龈卟啉单胞菌诱导血管平滑肌细胞钙化调控作用的研究
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作者 唐路 杨文文 +4 位作者 张献丽 张欣然 薛栋 冷丽君 赵颖 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期401-406,共6页
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)/Runt-相关转录因子-2(Runt-related-transcription factor-2,Runx2)信号轴对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)诱导小鼠血管平滑肌细胞(vas... 目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)/Runt-相关转录因子-2(Runt-related-transcription factor-2,Runx2)信号轴对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)钙化的调控作用。方法:用热灭活的P.gingivalis和VSMC共培养,在21 d时检测VSMC的钙化沉积和钙含量;并检测VSMC收缩标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α),以及成骨标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)和Ⅰ型胶原A1(type I collagen A1,ColⅠA1)的基因和蛋白表达。此外,检测P.gingivalis诱导VSMC后TRAF6和Runx2的表达,进一步通过抑制TRAF6,检测其对Runx2表达以及VSMC和主动脉的钙化情况的作用。结果:P.gingivalis可促进VSMC发生钙化沉积以及钙含量增加(P<0.05);并且P.gingivalis能显著促进成骨标志物的表达,抑制VSMC收缩标志物表达(P<0.05);当抑制TRAF6表达时,能降低P.gingivalis诱导VMSC中Runx2的表达,并抑制VSMC和主动脉壁的钙化沉积,显著降低VSMC中钙含量(P<0.05)。结论:P.gingivalis促进VSMC成骨标志物表达,抑制收缩标志物表达,最终诱导VSMC发生钙化;并进一步证实P.gingivalis可通过TRAF6/Runx2信号轴调控VSMC和主动脉钙化。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 血管平滑肌细胞 血管钙化 牙周炎 动脉粥样硬化
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慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性
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作者 武金强 谷若萌 马子安 《中南医学科学杂志》 CAS 2024年第1期113-115,134,共4页
目的研究慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性。方法选择300例慢性牙周炎患者,按照牙龈卟啉单胞菌感染情况分为阳性组和阴性组。比较两组牙周健康指标、牙周组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)... 目的研究慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性。方法选择300例慢性牙周炎患者,按照牙龈卟啉单胞菌感染情况分为阳性组和阴性组。比较两组牙周健康指标、牙周组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1 mRNA和GSDMD-N蛋白表达水平,以及龈沟液白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用Pearson检验进行相关性分析。结果阳性组菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)、牙周袋深度(PD)、牙周组织NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA、GSDMD-N蛋白,以及龈沟液IL-1β、IL-18、TNF-α水平均高于阴性组(P<0.05)。NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平与PLI、GI、AL、PD、GSDMD-N蛋白、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均呈正相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌感染加重病情、炎症反应及细胞焦亡,其作用可能与激活NLRP3炎症小体有关。 展开更多
关键词 慢性牙周炎 NLRP3炎症小体 炎症反应 细胞焦亡 卟啉单胞菌感染
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鞘氨醇单胞菌对三氯卡班的降解性能
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作者 李红燕 吴佳欢 +2 位作者 冯涛 吴培鲜 朱国郴 《中国高新科技》 2024年第3期110-112,120,共4页
为了探究环境因子对微生物降解三氯卡班的影响,以鞘氨醇单胞菌为研究对象,分析了氮源、温度、盐度等因子变化条件下,鞘氨醇单胞菌对三氯卡班的降解性能。结果表明:鞘氨醇单胞菌能高效降解三氯卡班,氮源对鞘氨醇单胞菌在72h内对三氯卡班... 为了探究环境因子对微生物降解三氯卡班的影响,以鞘氨醇单胞菌为研究对象,分析了氮源、温度、盐度等因子变化条件下,鞘氨醇单胞菌对三氯卡班的降解性能。结果表明:鞘氨醇单胞菌能高效降解三氯卡班,氮源对鞘氨醇单胞菌在72h内对三氯卡班的降解有促进作用,降解率达96.70%以上;当温度为25℃和35℃时,菌体对TCC的降解率较高,分别为88.67%和91.00%;低盐对菌体降解三氯卡班有促进作用,高盐对菌体降解TCC胁迫作用不明显,可见鞘氨醇单胞菌具有强耐盐性。 展开更多
关键词 鞘氨醇单胞菌 环境因子 三氯卡班 降解
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美洲鲥鱼嗜水气单胞菌病原的分离与鉴定 被引量:1
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作者 王会林 晋怀远 +2 位作者 高晔 夏苏东 李杰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第2期257-266,共10页
2021年,山东省临沂市一养殖场养殖的美洲鲥鱼(Alosa sapidissima)突发疾病并出现严重死亡,日死亡率高峰期达到2.5%,累积死亡率约为90%。患病鱼主要症状为体表出血、溃疡,解剖可见腹腔腹水、肝脏暗红,并伴有肠炎。组织病理学检测发现,病... 2021年,山东省临沂市一养殖场养殖的美洲鲥鱼(Alosa sapidissima)突发疾病并出现严重死亡,日死亡率高峰期达到2.5%,累积死亡率约为90%。患病鱼主要症状为体表出血、溃疡,解剖可见腹腔腹水、肝脏暗红,并伴有肠炎。组织病理学检测发现,病鱼肝脏出现弥散性坏死,嗜碱性粒细胞增多和细胞肿胀空泡变性;脾脏出现出血性贫血性坏死灶、核破裂和核固缩;肾脏淋巴细胞坏死脱落,肾小体毛细血管球萎缩,近端小管和远端小管内的细胞出现不同程度的细胞结构消失。发病鱼肉眼和显微镜观察未见明显寄生虫,利用PCR方法检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2)、鲈鱼蛙病毒(largemouth bass ranavirus)等淡水鱼类常见病毒均为阴性。细菌分离培养结果显示,从发病鱼的肝脏、肾脏和脾脏中分离得到形态一致的优势菌,命名为AS-AH2101。经16S rRNA测序比对和生理生化鉴定,确定AS-AH2101为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。毒力基因检测结果显示,AS-AH2101携带气溶素(aerA)、溶血素(hlyA)、丝氨酸蛋白酶(ahpA)、热稳定细胞肠毒素(ast)、热敏感细胞肠毒素(altA)和密度感应系统(luxS)基因。人工感染实验结果显示,AS-AH2101能引起蓝曼龙(Trichogaster trichopterus)发病死亡,半数致死量为3.23×10^(4)CFU/尾。药物敏感性研究表明,AS-AH2101对头孢拉啶、阿莫西林、氨苄西林和红霉素等4种抗生素具有耐药性,对四环素和多西环素等11种抗生素敏感。综上所述,本研究报道了我国养殖美洲鲥鱼感染嗜水气单胞菌的典型病例,为美洲鲥鱼在我国养殖过程中的疾病防控以及嗜水气单胞菌病的防治提供了参考和借鉴。 展开更多
关键词 美洲鲥鱼 嗜水气单胞菌 细菌鉴定 毒力基因
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维氏气单胞菌弱毒株FS12001及其疫苗对异育银鲫的免疫效果
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作者 王艳娇 张德锋 +7 位作者 任燕 王庆 王英英 李莹莹 潘厚军 石存斌 莫绪兵 尹纪元 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期202-214,共13页
为探究由维氏气单胞菌(Av)弱毒株FS12001制备的疫苗免疫效果,将Av弱毒株FS12001制备活疫苗、灭活疫苗、ISA763A-灭活疫苗和蜂胶-灭活疫苗,腹腔注射免疫异育银鲫,同时设ISA763A佐剂、蜂胶佐剂及0.65%NaCl作为对照组。于免疫后1、3、5、7... 为探究由维氏气单胞菌(Av)弱毒株FS12001制备的疫苗免疫效果,将Av弱毒株FS12001制备活疫苗、灭活疫苗、ISA763A-灭活疫苗和蜂胶-灭活疫苗,腹腔注射免疫异育银鲫,同时设ISA763A佐剂、蜂胶佐剂及0.65%NaCl作为对照组。于免疫后1、3、5、7和14 d经实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量;于免疫后7、14、21、28、42和48 d尾静脉采血分离血清,检测IgM抗体水平,测定SOD和LZM酶活性;于免疫28 d后用2株Av强毒株分别攻毒各组实验鱼,连续观察记录7 d,计算各免疫组的相对保护率。结果显示,各免疫组脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量高于对照组,且ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的表达量显著高于其他各实验组。各疫苗免疫组血清特异性抗体水平均显著高于0.65%NaCl对照组和佐剂对照组。各疫苗免疫组的LZM活性均在28 d最高,灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组及蜂胶-灭活疫苗组SOD活性均在7 d最高。菌株AVCA07攻毒后,活疫苗组、灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的RPS分别为63%、56%、100%和56%;菌株YC170511攻毒后,以上4个免疫组RPS分别为59%、55%、93%和72%。研究表明,用弱毒株FS12001制备疫苗,注射免疫异育银鲫后均可增加脾脏中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量,提高血清抗体水平,增强SOD和LZM酶活性,增强其抵抗Av感染的能力。 展开更多
关键词 异育银鲫 维氏气单胞菌 弱毒株 疫苗 免疫效果
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cphA基因特异性介导维氏气单胞菌碳青霉烯耐药的初步研究
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作者 李安一 李宏 +4 位作者 刘柱 李娟娟 唐燕琼 迟雪 马香 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期100-109,共10页
目的探究cphA基因对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)β-内酰胺耐药性的影响,解析基因功能。方法以维氏气单胞菌C4为研究对象,采用同源重组方法构建cphA基因敲除株;利用比浊法测定生长曲线,微量二倍稀释法检测不同β-内酰胺类抗生素对... 目的探究cphA基因对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)β-内酰胺耐药性的影响,解析基因功能。方法以维氏气单胞菌C4为研究对象,采用同源重组方法构建cphA基因敲除株;利用比浊法测定生长曲线,微量二倍稀释法检测不同β-内酰胺类抗生素对菌株的最小抑菌浓度,实时荧光定量PCR法测定cphA基因对抗生素的响应表达;并通过分子对接解析CphA酶与抗生素互作的重要活性位点。结果成功构建cphA基因敲除株,发现cphA基因缺失不影响维氏气单胞菌生长。虽然cphA基因在碳青霉烯类和青霉素类抗生素处理下均响应性表达增加,但cphA基因缺失仅特异性导致菌株对碳青霉烯类药物由耐受变为敏感,而对其他β-内酰胺类的药物敏感性表型并无影响。此外,分子对接结果表明,CphA酶的Thr135、His174、Asn201氨基酸残基是与亚胺培南分子形成氢键作用的位点。结论维氏气单胞菌中的cphA基因特异性介导碳青霉烯耐药。本研究为进一步完善维氏气单胞菌的耐药研究和β-内酰胺酶的功能研究提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 cphA基因 基因敲除 耐药性
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草莓黄单胞菌RPA-LF快速检测方法的建立与应用
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作者 史春佳 李刚 +5 位作者 刘林川 秦梦瑶 刘丽锋 宋艳红 赵霞 周厚成 《中国果树》 2024年第4期114-121,127,共9页
建立一种适用于田间稳定、快速、准确地检测草莓黄单胞菌的技术方法,有助于该病原菌的早期诊断和有效控制。将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和胶体金侧流层析试纸条技术(lateral flow strip,LF)相结合。... 建立一种适用于田间稳定、快速、准确地检测草莓黄单胞菌的技术方法,有助于该病原菌的早期诊断和有效控制。将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和胶体金侧流层析试纸条技术(lateral flow strip,LF)相结合。根据草莓黄单胞菌的限制性核酸内切酶亚基S基因序列保守区设计RPA特异引物及探针,通过对反应条件优化及对灵敏性、特异性与疑似样本的分析,成功建立了草1莓黄单胞菌RPA-LF检测方法。该方法最佳反应条件为39℃恒温反应10 min,最低检测限为1.0×10^(1)copies/μL,能够特异地检测出草莓黄单胞菌,从采集疑似症状植株到检测可在30 min内实现,而且用RPA-LF方法检测疑似样本结果与常规PCR检测方法一致。综上,建立的草莓黄单胞菌RPA-LF检测方法快速、简单、准确、可视化,可用于该病原菌的早期诊断。 展开更多
关键词 草莓黄单胞菌 RPA-LF检测 田间 早期诊断
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茶多酚对嗜水气单胞菌致病力的抑制作用
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作者 张德福 闫天慧 +3 位作者 励建荣 杨秋红 艾晓辉 董靖 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期21-30,共10页
针对嗜水气单胞菌污染水产品所致动物感染和消费者食源性疾病等问题,筛选能够抑制嗜水气单胞菌致病力的天然产物茶多酚。溶血试验表明茶多酚对气溶素溶血活性具有直接抑制作用,通过荧光热漂移和七聚体形成试验分析其作用机制。结果表明... 针对嗜水气单胞菌污染水产品所致动物感染和消费者食源性疾病等问题,筛选能够抑制嗜水气单胞菌致病力的天然产物茶多酚。溶血试验表明茶多酚对气溶素溶血活性具有直接抑制作用,通过荧光热漂移和七聚体形成试验分析其作用机制。结果表明,茶多酚虽在128μg/mL以下不抑制嗜水气单胞菌的生长,但能在1~8μg/mL直接抑制其主要毒力蛋白气溶素的溶血活性。荧光热漂移和七聚体试验发现,茶多酚通过与气溶素直接结合,降低了气溶素七聚体的形成并抑制其活性。细胞试验结果表明,4~8μg/mL茶多酚能对气溶素导致的人肺癌上皮细胞死亡具有显著的保护作用。此外,50 mg/kg茶多酚治疗可使斑点叉尾鮰嗜水气单胞菌感染模型的存活率提高至60%。综上,茶多酚通过直接与气溶素结合,抑制气溶素形成功能性七聚体而降低其活性,从而显著降低嗜水气单胞菌的体内、外致病力。研究结果提示茶多酚可作为抗生素替代或辅助药物用于治疗嗜水气单胞菌相关感染。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 气溶素 茶多酚 抗毒力 水产品
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少动鞘氨醇单胞菌合成结冷胶研究进展
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作者 郑丽圆 李宛莹 +3 位作者 喻林兵 夏永军 艾连中 熊智强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期298-303,共6页
结冷胶是少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)产生的一种细菌胞外多糖,耐热、耐酸性良好,具有优越的凝胶性能,广泛应用于食品、医药和化工等领域。通过代谢调控可使结冷胶改性并提高产量,但目前关于结冷胶在生物合成和代谢调... 结冷胶是少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)产生的一种细菌胞外多糖,耐热、耐酸性良好,具有优越的凝胶性能,广泛应用于食品、医药和化工等领域。通过代谢调控可使结冷胶改性并提高产量,但目前关于结冷胶在生物合成和代谢调控方面的研究较少。该文结合近年来国内外结冷胶研究现状,总结了少动鞘氨醇单胞菌产结冷胶的生物合成途径及其代谢调控,期望为结冷胶生产菌株改造提供理论依据。 展开更多
关键词 结冷胶 少动鞘氨醇单胞菌 生物合成途径 代谢调控
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七彩神仙鱼BTN1A1基因克隆及其在嗜水气单胞菌胁迫下的表达分析
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作者 何恺轩 温彬 +1 位作者 高建忠 陈再忠 《广东农业科学》 CAS 2024年第4期45-53,共9页
【目的】克隆七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)嗜乳脂蛋白1A1(Butyrophilin 1A1,BTN1A1)基因,分析其在病原刺激下的表达模式,为了解七彩神仙鱼BTN1A1基因功能提供依据。【方法】利用生物信息学对七彩神仙鱼2个BTN1A1基因(BTN1A1-... 【目的】克隆七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)嗜乳脂蛋白1A1(Butyrophilin 1A1,BTN1A1)基因,分析其在病原刺激下的表达模式,为了解七彩神仙鱼BTN1A1基因功能提供依据。【方法】利用生物信息学对七彩神仙鱼2个BTN1A1基因(BTN1A1-1和BTN1A1-2)进行结构和进化分析。根据前期获得的七彩神仙鱼皮肤转录组数据,选取BTN1A1-1和BTN1A1-2基因的CDS区设计引物进行克隆。采用qRT-PCR分析BTN1A1在各组织中的表达及嗜水气单胞菌刺激下的表达模式。【结果】BTN1A1-1和BTN1A1-2的ORF序列长度为894、1275 bp,分别编码298、424个氨基酸。BTN1A1-1和BTN1A1-2蛋白均具有1个信号肽、1个Ig结构域、1个lg_like结构域和1个跨膜结构域的经典结构,BTN1A1-2还具有1个胞质结构域。七彩神仙鱼BTN1A1-1与慈鲷科其他鱼类相似性较高,与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)BTNIAI对应氨基酸序列同源性最高、为94.14%。但BTN1A1-2与其他鱼类发生分离,形成独特分支。BTN1A1-1和BTN1A1-2在七彩神仙鱼各组织中均有表达,但在鳃、肠道、皮肤等与免疫相关的组织中表达量相对较高。七彩神仙鱼BTN1A1-1在嗜水气单胞菌胁迫后表达量先显著下降后上升,而BTN1A1-2表达量则先显著上升后下降。【结论】七彩神仙鱼BTN1A1-1基因相对保守,而BTN1A1-2基因在进化上较为特殊。二者在免疫刺激下的差异表达暗示其可能在七彩神仙鱼免疫防御中发生功能分化。 展开更多
关键词 七彩神仙鱼 嗜乳脂蛋白 嗜水气单胞菌 免疫调节 基因表达
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三角帆蚌HcCnAα基因克隆及维氏气单胞菌感染后的表达
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作者 龙凯 孙瑜 +2 位作者 李艳红 腾树君 吴正理 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期32-43,共12页
钙调神经磷酸酶(CN)属苏/丝氨酸蛋白磷酸酶,在软体动物的抗菌应答、免疫调节中发挥重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得三角帆蚌CN基因α型催化亚基(HcCnAα)的cDNA序列,并进行了生物信息学分析。构建pET30a-HcCnA... 钙调神经磷酸酶(CN)属苏/丝氨酸蛋白磷酸酶,在软体动物的抗菌应答、免疫调节中发挥重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得三角帆蚌CN基因α型催化亚基(HcCnAα)的cDNA序列,并进行了生物信息学分析。构建pET30a-HcCnAα原核表达载体,将诱导表达、纯化、复性后蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。用蛋白质印迹法(Western blot,WB)和荧光定量PCR(qPCR)技术分析健康状态和感染维氏气单胞菌GL2后HcCnAα在三角帆蚌不同组织中的表达情况。结果显示,HcCnAαcDNA全长2737 bp,其中3′UTR长131 bp,5′UTR长1154 bp,CDS区为1452 bp,编码483个氨基酸,序列包含蛋白磷酸酶保守的PP2Ac结构域。WB和qPCR结果显示,HcCnAα在三角帆蚌各组织中广泛存在,并在闭壳肌、斧足、性腺、鳃中的表达量较高,在血液中的表达量最低。维氏气单胞菌GL2感染三角帆蚌后3~24 h,鳃中HcCnAα的表达量显著升高,6 h时闭壳肌中表达量也显著升高,感染后24 h,肝胰腺、斧足、血液、外套膜中的表达量显著升高。而感染后48 h,闭壳肌、鳃、外套膜、肝胰腺中的表达量显著降低。研究表明,三角帆蚌HcCnAα基因与其他物种CnAα基因高度相似,具有保守的PP2Ac结构域,在各组织中普遍表达,并参与了三角帆蚌在细菌感染后的免疫反应。本研究首次克隆了三角帆蚌HcCnAα基因并制备了多克隆抗体,揭示了HcCnAα基因参与三角帆蚌的抗感染免疫应答,为深入研究三角帆蚌的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。 展开更多
关键词 三角帆蚌 维氏气单胞菌 钙调神经磷酸酶 多克隆抗体 细菌感染
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大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的分离鉴定及全基因组分析
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作者 王迎平 赵静贤 +13 位作者 尚佳富 郝成森 左妤祺 朱桓奕 冯旭东 徐婷婷 倪兴维 刘霞 杨晓伟 曹蓝云 张立武 谭昌藩 曹礼静 赵光伟 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1706-1716,共11页
【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病... 【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病性试验观察分离菌对小鼠主要脏器造成的病理损伤;而后分别利用PCR方法和Kirby-Bauer(K-B)纸片法对分离菌的常见毒力基因和耐药特征进行检测分析;最后利用二代测序技术绘制其全基因组草图,并通过生物信息学方法对其分子特征进行解析。【结果】自然感染大口黑鲈肝细胞肿大,空泡变性,肠黏膜下层出血,肠壁坏死;于患病黑鲈体内分离到1株优势菌,在血平板上呈乳白色,半透明,直径约1 mm的小菌落,呈β溶血,革兰染色为阴性短杆菌,两端钝圆,经生化试验和16S rDNA测序证实分离菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),将其命名为SCMS。试验小鼠接种后24 h内死亡率为100%,病理特征与自然感染大口黑鲈相似;SCMS株中共检测到9种毒力基因,分别为Aha、Ahp、Aer、Alt、gcaT、Act、Exu、Ela和eprCAI;药敏试验结果显示,分离菌对大多数四环素类、大环内酯类药物表现耐药或中度敏感;全基因组测序显示,分离菌全长4329602 bp,GC含量为61.5%,基因组信息在GenBank中的登录号为JARFUQ000000000,相似性分析显示分离菌与人源、食品源豚鼠气单胞菌具有高度相似性;病原毒力因子数据库(VFDB)比对显示,分离菌携带多种与黏附、侵入及分泌系统相关的毒力基因;耐药基因数据库(CGE)分析显示,菌株中携带7种耐药基因,部分基因与耐药表型存在不一致的现象。【结论】本试验通过全基因组测序技术解析了1株大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的毒力基因和耐药基因,其结果可为大口黑鲈临床疾病防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 大口黑鲈 豚鼠气单胞菌 全基因组测序 毒力基因 耐药基因
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豚鼠气单胞菌研究进展
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作者 袁中华 宋海超 +3 位作者 刘俊彤 康元环 孙武文 单晓枫 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期106-110,共5页
豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学... 豚鼠气单胞菌属于气单胞菌属,在自然界中通过食物和水广泛传播,是人、动物和水生生物共患的条件性病原菌,严重危害人类身体健康,同时是造成多种淡水鱼疾病的主要原因,给水产养殖业造成了巨大的威胁。目前,对豚鼠气单胞菌发展的研究,学界很少从系统去概述,论文从豚鼠气单胞菌的病原学、临床特征、流行现状、致病机理及防治等几个方面的最新研究进展进行概述,旨在为其防治及研究提供参考。 展开更多
关键词 豚鼠气单胞菌 流行病学 临床特征 致病机理 防治
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牙龈卟啉单胞菌感染在食管鳞癌中的作用及机制研究
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作者 孔金玉 刘怡文 +3 位作者 钱梦凡 孙蔚 邢玲(综述) 高社干(审校) 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期715-720,共6页
食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,预后差,生存率低。食管癌病因复杂,包括遗传、环境、微生物等多种因素。近年来,微生物在癌症的发生和发展中的作用成为研究热点。作为牙周病最重要病原体,牙龈卟啉单胞菌在食管鳞癌的发生、发展中起... 食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,预后差,生存率低。食管癌病因复杂,包括遗传、环境、微生物等多种因素。近年来,微生物在癌症的发生和发展中的作用成为研究热点。作为牙周病最重要病原体,牙龈卟啉单胞菌在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用。该文就牙龈卟啉单胞菌与食管鳞癌发生发展的关系及发病机制作一综述,以期为食管癌防治提供新思路。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 食管鳞癌 口腔微生物 食管微生物 预后 机制
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嗜水气单胞菌外膜蛋白TolB的原核表达及生物信息学分析
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作者 陈甜梦 蔡彤璇 +3 位作者 王嘉璐 田牧野 赵宝华 刘东 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期136-143,共8页
为筛选TolB作为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)渔用疫苗候选抗原,从嗜水气单胞菌中克隆了外膜蛋白tolB基因并异源表达,采用生物信息学方法预测TolB的理化性质和结构特征。结果显示,tolB基因片段(去除信号肽)全长1 263 bp,编码1条含... 为筛选TolB作为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)渔用疫苗候选抗原,从嗜水气单胞菌中克隆了外膜蛋白tolB基因并异源表达,采用生物信息学方法预测TolB的理化性质和结构特征。结果显示,tolB基因片段(去除信号肽)全长1 263 bp,编码1条含有420个氨基酸残基的多肽,分子质量45.78 ku。成功在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中异源表达TolB蛋白,其为稳定的亲水性外膜蛋白。TolB蛋白家族在不同菌株间具有同源性,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近。TolB蛋白二级结构以无规则卷曲为主,具有潜在的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助T细胞(Th)抗原表位;相互作用网络主要为TolPal系统蛋白。综上,TolB具有成为嗜水气单胞菌亚单位疫苗有效候选抗原的特性。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 TolB 原核表达 蛋白质纯化 生物信息学
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