气单胞菌属低温淀粉酶基因改造与原核表达

【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计特异引物,PCR扩增获得C13片段,将其克隆到pMAL-2X,转化到BL-21(DE3)中,筛选蓝白斑,验证PCR及EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,获得高效表达生物工程菌株pMAL-2X-C13。设计定点突变引物,以pMAL-2X-C13为模板,获得低温淀粉酶基因突变株三株C19、C29、C43。【结果】表达蛋白的分子大小为114kD,突变菌株C19蛋白表达量均高于pMAL-2X-C13。【结论】低温淀粉酶基因突变株C19比原始菌株pMAL-2X-C13淀粉酶基因蛋白表达量更高。

盐单胞菌属一新种——黄海盐单胞菌

以《伯杰氏系统细菌学手册》第1卷(1984年)等为主要依据,对从江苏省黄海盐场晒盐池分离到的H_5菌株进行了鉴定。结果表明,H_5菌株符合盐单胞菌属(Halomonas)的特征。但该菌株的形态、生理生化特性及DNA中G十C mol％等又不同于该属中的已知种。同时,H_5菌株与该属中的相关种——伸长盐单胞菌(Halomonas elongata ATCC 33173)的DNA杂交率为44.7％。因而将H_5菌株鉴定为盐单胞菌属的一个新种,命名为黄海盐单胞菌(Halomonas huanghaiensis sP. nov.),且H_5菌株作为模式株。

14株患病水生动物气单胞菌属细菌的分离鉴定与最佳治疗药物筛选试验

从患病甲鱼、河蟹、牛蛙、鲫体内共分离到14株气单胞菌属细菌,对它们进行了生化鉴定和药敏试验。根据药敏试验结果,选取1株嗜水气单胞菌(J50503-1)和1株温和气单胞菌(NT712-10)作了最小抑菌浓度试验和人工感染及治疗试验。结果表明,氟苯尼考对上述细菌有很好的防治作用。

养殖沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法的建立

利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法。将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中,作为模拟沉积物样品。通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板,建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法,同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性。结果表明,采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA,以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物,并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线,可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法。该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中气单胞菌属中不同种的细菌,检出效率可达103CFU/g。统计分析显示,变异系数为0.21%-0.80%,均小于5%,表明重复性良好。

自淡水鱼中检出弧菌属、气单胞菌属及邻单胞菌属的鉴定报告

本文报告从食用淡水鱼１９３份棉拭涂抹标本中检出弧菌３８株，检出率１９．７％，其中河弧菌１７株（４４．７％），非０－１群霍乱弧菌１７株（４４．７％），拟态弧菌４株（１０．５％）；气单胞菌３６株，检出率１８．６％，其中豚鼠气单胞菌１４株（３８．９％），温和气单胞１７株（４７．２％），舒伯特气单胞菌５株（１３．９％）；邻单胞菌１８株；检出率９．３％，可用免疫血清分型的１１株，分属于６个０群，分型率６１．１％。

腹泻患者粪便弧菌属及气单胞菌属分离鉴定结果分析

作者从1356例腹泻患者粪便中分离出102株弧菌科病原菌,分离率为7.5%,其中:弧菌属86株,分离率为6.3%,共10个菌种。气单胞菌属16株,分离率为1.2%,共3个菌种。均经生化反应和血清试验证实。结果表明:弧菌属和气单胞菌属是嘉兴地区感染性腹泻的常见病原菌。

气单胞菌属、邻单胞菌属和弧菌属的分离与鉴定

近几年来,气单胞菌属、邻单胞菌属、弧菌属引起急性感染日益受到国内外学者重视。本文报道1997年1月～12月我院临床送检321份标本进行分离,现报告如下。1 材料和方法 1.1 标本来源 临床各科送检标本。 1.2 培养基(1)5％羊血琼脂,(2)麦康凯,(3)SS琼脂,(4)TCBS琼脂,各种生化反应培养基。 1.3 分离 将粪便分离于培养基,其他标本分离于血平板,35℃18～24小时,挑取可疑菌落转种克氏双糖铁。

夏秋季腹泻中气单胞菌属的分离与鉴定

目的探讨夏秋季腹泻患者中单胞菌属分离及鉴定结果。方法收集本院2012年6月-2012年10月收治的215例急性腹泻患者为研究对象,收集患者粪便样本进行单胞菌属细胞分离及鉴定。结果 215份大便样本中单胞菌属阳性菌株18株,其中嗜水气单胞菌8株,温和气单胞菌6株,豚鼠气单胞菌4株。经药敏试验发现,单胞菌属对庆大霉素、卡那霉素、链霉素、丁胺卡那、四环素、新霉素、复方磺胺等药物较敏感,而对青霉素G、氨苄霉素耐药性较高。结论夏秋季腹泻患者中单胞菌属检出率较高,应引起临床及实验室的重视。

草鱼养殖模式对气单胞菌属细菌群落影响分析

为研究草鱼池塘精养、山塘养殖以及鱼菜共生养殖3种养殖模式下气单胞属细菌群落特征差异,2017年5—7月(养殖投喂旺盛期)用采水器在池塘两端和中部采集表层15 cm处水样,混合均匀后,装入灭菌塑料瓶中,低温保存;在池塘两端和中部用采泥器采集表层底泥,现场各无菌称取5 g底泥,置于装有135 mL的无菌生理盐水的塑料瓶中,振荡混匀,低温保存。水样和底泥样4 h内带回实验室,利用RS平板分离法分离水体和底泥样本中的细菌,通过16S rDNA测序方法鉴定、分析分离细菌。试验结果表明,共分离细菌54株,为10属22种,其中气单胞菌属23株,假单胞菌属8株,柠檬酸杆菌属6株,肠杆菌属7株,泛菌属、沙雷氏菌属各3株,果胶杆菌属、沙门氏菌属、克吕沃尔菌属、勒克氏菌属细菌各1株。按细菌种类分,维氏气单胞菌数量最多,为12株,嗜水气单胞菌次之,为10株,烟粉肠杆菌6株,弗氏柠檬酸杆菌5株,其他细菌1~2株不等。不同养殖模式下细菌种类和数量分析表明,鱼菜共生养殖系统细菌种类和数量最多,达到12种21株,潜在致病菌占比较少,草鱼精养殖池塘细菌种类最少,为5种13株,致病菌占比较高。细菌环境分布特征表明,维氏气单胞菌多分布在水体,嗜水气单胞菌多分布于底泥中。

小单胞菌属次级代谢产物及其生物活性研究进展

小单胞菌属(Micromonospora)为稀有放线菌,广泛分布在土壤、海洋和动植物中,其所产代谢产物不仅具有抗菌、抗肿瘤、抗HIV等多种生物活性,而且化学结构新颖多样。本文从化学结构分类、生物活性等方面对近几年已报道的小单胞菌属来源的重要天然产物做了简要综述,以期为小单胞菌天然产物的开发和应用奠定基础。

夏秋季腹泻粪便中弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属的分离与鉴定

从594例急性感染性腹泻病人粪便中检出弧菌属细菌71株,气单胞菌属12株及邻单胞菌属1株,共84株,分离率为14.4%;而志贺氏菌属和沙门氏菌分离率分别为11.95%和1.52%。结果表明,沈阳地区近年夏秋季节由弧菌属、气单胞菌属及邻单胞菌属引起的腹泻较为常见,临床与实验室应重视分离鉴定。

气单胞菌属的分类和鉴定

在1987～1991牟6月,气单胞菌属又命名了5个新种,其中4个与临床有关。这些种和原有的5个种,分别属于不同的DNA杂交群,用简单的表型特征试验可将它们区别。本文回顾文献中一些资料的差异,归纳了这些新种的鉴别要点,并优选10项左右常用的关键性试验,用于与临床有关的7个种的鉴别。

海神单胞菌属的基因组测序数据分析

海神单胞菌属(Neptunomonas)于1999年被首次鉴定,目前包含8个菌种,其中6个已经完成全基因组测序。本文总结了海神单胞菌属的菌种特征和基因组信息,并利用基因组测序数据对该菌属的碳源利用途径、聚羟基脂肪酸酯代谢途径和芳香族化合物降解途径进行了分析。研究发现,海神单胞菌属具有完整的糖酵解和乙酸利用途径,普遍含有Ⅰ型和Ⅲ型的聚羟基脂肪酸酯合成酶,存在芳香族化合物的降解途径。基因组测序数据分析结果可以为海神单胞菌属在聚羟基脂肪酸酯合成与环境治理保护等领域的应用提供理论依据。

用三种培养基从淡水鱼中分离气单胞菌属

我们于1993年7～9月用三种培养基对抚顺地区市售淡水鱼进行了分离气单胞菌的比较研究,结果报告如下:1 材料和方法1.1标本采集:市售3种鲜、活淡水鱼(鲢鱼、鲤鱼、草鱼)。活鱼用无菌棉拭徐抹鳃,死鱼采肛拭。1.2培养基:碱性蛋白胨水:1％NaCl,1％多价蛋白胨,0.3％牛肉膏,pH8.4。