水/有机溶剂体系中产紫青霉全细胞催化合成单葡糖醛酸基甘草次酸

研究了产紫青霉Penicillium purpurogenum Li-3全细胞β-D-葡萄糖醛酸苷酶在水/有机溶剂体系中催化水解甘草酸,合成单葡糖醛酸基甘草次酸(GAMG)的反应。确定了最适反应体系为水/叔丁醇(体积比为3∶7),最适反应条件为:底物甘草酸用量1.5g·L-1、反应温度45℃、pH值5.0、全细胞酶量7g·L-1、摇床转速120r·min-1,在此条件下反应48h,产物GAMG产率可达79.12%,全细胞酶具有较好的稳定性和可重复使用性,显示了良好的应用前景。

水／离子液体[BMIM]PF6两相体系中全细胞催化生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸

研究了水/离子液体两相体系中重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115(r-PGUS-P)全细胞转化甘草酸(GL)生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)的反应。确定最适反应体系为离子液体[BMIM]PF6/水(2∶8,体积比),最适缓冲液pH、反应温度、底物浓度和细胞加入量分别为5.4、45℃、6.0mmol.L-1和8.0g.L-1。在此条件下反应58h,产物GAMG得率和化学键选择性分别为69.6%和67.2%,与纯水相反应体系相比,分别提高了12.4%和12.61%。离子液体循环使用7次后,回收利用率为93.47%。产物GAMG和副产物甘草次酸(GA)在此两相体系中得到有效分离,为后续产物分离带来便利。

固定化细胞连续生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸

产紫青霉菌株(Penicillium purpurogenum Li-3)能定向转化甘草酸(GL)为单葡萄糖醛酸基甘草次酸(glycyrrtinic acid 3-O-mono-β-D-glucuronide,GAMG),针对课题组前期海藻酸钙包埋产紫青霉Li-3的珠体机械强度不高,操作使用性能低等问题,通过添加天然物质和化学处理改变凝胶结构,提高改性海藻酸钙珠体的机械强度,并考察了改性海藻酸钙固定化细胞的催化性质。利用改性海藻酸钙固定的产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)微球在具有隔离筛的改进型填充床反应器中连续转化甘草酸(GL)生产单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)。结果表明添加4%的硅藻土能够改善固定化细胞微球的机械强度,提高了反应的转化率。改性前后的固定化细胞微球的最适p H值和最适温度均未发生变化,但改性的固定化细胞反应转化率与对照相比分别提高了22%和30%。向底物中添加0.12%的吐温-80能进一步使GAMG的产量提高44%。同时,改性的固定化细胞微球具有较好的贮存稳定性和重复使用性。最后利用改性固定化细胞微球在具有隔离筛的改进型填充床反应器内实现了连续生产GAMG,在最佳反应条件下,GAMG的产量为0.193 g/(L·d),GL的转化率为34%,时空产率约为13.7μmol/(L·h)。利用改性固定化细胞微球在改进型的填充床反应器内进行连续反应生产GAMG,为建立高效全细胞转化甘草酸合成GAMG的反应体系奠定了基础。

响应面设计法优化单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)发酵转化培养基

以甘草酸(glycyrrhizin,GL)为底物,利用产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)液态发酵转化单葡萄糖醛酸甘草次酸(GAMG),采用响应面设计法对初始发酵培养基进行优化。用部分因子分析法研究原始发酵培养基各成分对响应值的显著程度,发现甘草酸(GL)、NaNO3和K2HPO4的质量浓度对发酵产生GAMG的影响显著(P<0.01)。用中心组合设计确立甘草酸、NaNO3和K2HPO4的适宜质量浓度分别为2.8、3.0和0.8 g/L。在优化条件下进行发酵时,GAMG的转化率从75.49%提高到89.11%,比优化前提高了13.62%。

黄芪总黄酮、黄芪多糖、甘草次酸及阿魏酸清除氧自由基作用的研究

目的 :比较黄芪多糖、黄芪总黄酮、甘草次酸及阿魏酸对氧自由基的清除作用 ,为寻找天然高效的自由基清除剂提供参考。 方法 :采用分光光度不测定羟自由基 (· OH)及超氧阴离子自由基 (O2 - ) ,计算表观清除率及 IC5 0 。 结果 :黄芪多糖、黄芪总黄酮、甘草次酸及阿魏酸对 (· OH)的 IC5 0 分别为 0 .0 5 9、 0 .0 2 4、 0 .0 32 5、 0 .0 36 mg/ ml;其清除能力 :黄芪总黄酮 >甘草次酸 >阿魏酸 >黄芪多糖 ;黄芪多糖、黄芪总黄酮、阿魏酸及甘草次酸对 (O2 - )的 IC5 0 分别 0 .0 9、0 .0 86、0 .0 12、 0 .0 12、 0 .0 14mg/ ml,其清除能力 :阿魏酸 >甘草次酸 >黄芪多糖 >黄芪总黄酮。 结论 :黄芪多糖、黄芪总黄酮、甘草次酸及阿魏酸对 (· OH)及 (O2 - )均有较强的清除作用 。

N-乙酰胺基乙酸甘草次酸酯的合成及HPLC检测

甘草次酸（glycyrrhetinic acid，2）是从豆科植物甘草的根茎中提取得到的五环三萜类化合物。药理活性研究表明：2的3-羟基被取代后，其抗炎活性、抗溃疡活性较为显著，且3、30-位分别成酯后具有较高的抗炎活性。

结肠定位释放甘草次酸-羟丙基-β-环糊精包合物包衣片的制备

目的:制备甘草次酸-羟丙基-β-环糊精(GTA-HP-β-CYD)包合物结肠定位释放包衣片。方法:超声-冷冻干燥法制备GTA-HP-β-CYD包合物,考察包合条件对包合效率及包合物稳定常数的影响,X-射线粉末衍射法和红外光谱法表征包合物的形成。直接粉末压片法制备GTA-HP-β-CYD包合物片芯,微型流化床进行丙烯酸树脂包衣,通过不同pH条件下的体外释放度测定,初步确定pH依赖型结肠定位释放包衣片的制备工艺。结果:在优化的包合条件下,GTA在包合物中的载药量为9.3%,溶解度增加54.6倍。当EudragitⅢ包衣增重为10%和16%时,均具有一定的pH依赖性结肠定位释放特征;以EudragitⅢ和EudragitⅡ的混合液(2∶1)为包衣材料,其包衣增重为17%时,包衣片具有结肠定位释放与脉冲释放特征。结论:初步建立具有结肠定位释放特征的GTA-HP-β-CYD包衣片制备工艺,为体内药效学研究提供了实验依据。

甘草次酸对自由基清除作用的电化学研究

研究了应用电化学分析方法测定甘草次酸对自由基的清除作用。用石墨烯修饰玻碳电极,建立了一种应用石墨烯修饰玻碳电极的电化学方法测定甘草次酸及其对·OH(羟基),O2·-(超氧),ROOH(脂质过氧)自由基的清除作用。实验结果表明:甘草次酸的检出限为2.24×10^(-3)g/L,相对标准偏差RSD为8.94%(n=5)。同时,甘草次酸对3种自由基均具有清除作用,清除能力大小为:O_2^(·-)>ROOH>·OH,清除率与浓度呈良好的线性关系。该方法具有易于操作、灵敏度好、检出限低以及价格低廉等优点。

阿魏酸钠和18β-甘草次酸对氧自由基的清除作用

用自旋捕集技术和化学发光法研究阿魏酸钠(SF)和18β-甘草次酸(GA)对氧自由基的清除作用.SF和 GA 0.3 mmol/L 对人多形核白细胞(PMN)释放的氧自由基有明显的清除作用.它们对 PMN

甘草次酸衍生物TY501抗肺纤维化作用及机制研究

目的探索甘草次酸衍生物TY501对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化模型大鼠的抗肺纤维化作用及初步机制。方法将40只大鼠随机分成5组:假手术组、模型组、吡非尼酮组、TY501高剂量组和低剂量组。经气道给予BLM制备大鼠肺纤维化模型,每天灌胃给予受试药。实验结束后,测定肺系数、氧分压(Pa O2),测定BALF中ALB、ALP、LDH以及肺组织中GSH、HYP含量,测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(COL4)含量。结果 1肺纤维化早期肺泡炎阶段相关指标:各治疗组与模型组相比,肺系数显著下降(P<0.05)、Pa O2明显升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠BALF中ALP、ALB以及LDH呈下降趋势(P<0.05);模型组肺组织匀浆中GSH含量反馈性增高,与假手术组相比存在明显差异(P<0.05),各治疗组较模型组含量降低(P<0.05);(2)肺纤维化晚期肺间质纤维化阶段:大鼠肺组织HYP、血清PCⅢ(TGF-β通路指标)、血清COL4(MMPs通路指标)含量,各治疗组较模型组呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论 TY501对肺纤维化治疗存在价值,能够减轻BLM诱导的肺纤维化程度。TY501可能通过阻断TGF-β的作用、抑制MMPs等多途径抑制肺纤维化的发生,减轻肺纤维化症状。

2种新型18β-甘草次酸修饰物对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用

本文研究了顺式-3-βO-[4-(R)-(3-氯苯基)-2-氧代-1,3,2-二氧磷杂环己基]-18β-甘草次酸(GA16R)和顺式-3β-O-[4-(S)-(3-氯苯基)-2-氧代-1,3,2-二氧磷杂环己基]-18β-甘草次酸(GA16S)2种修饰物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。结果表明,GA16R和GA16S均能减轻CCl4致小鼠急性肝损伤程度,明显降低血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的升高,明显降低肝组织中丙二醛(MDA)的含量,明显增加肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力。证明2种新型甘草次酸化合物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤均有明显的保护作用。

4种11-脱氧甘草次酸3,30一双糖链皂苷的合成

合成4种11-脱氧甘草次酸3,30双糖链皂苷。以苯甲酰基保护的糖基三氯乙酰亚胺酯为供体,在TMSOTf的催化作用下与11-脱氧甘草次酸C3位羟基和C30位羧基进行偶联,以较好的收率制备得11-脱氧甘草次酸3,30双糖链皂苷（6a,6b,6c,6d）。化合物均未见报道,结构经核磁共振（^1H NMR）确证,均为1,2反式构型糖苷键。

功能性食品中甘草次酸的开发

本文论述自由基的产生和对人体的危害及做为自由基清除剂的甘草次酸的提取和在食品中作用。

离子液体[BMIM]BF_4对甘草酸及其衍生物色谱行为的影响

将离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（[BMIM]BF。）加入到高效液相色谱流动相中，研究其对甘草酸（GL）及其衍生物甘草次酸（GA）和单葡萄糖醛酸基甘草次酸（GAMG）色谱行为的影响。结果显示，加入离子液体后的流动相能够明显改善色谱峰形、减少峰拖尾、增大峰面积和峰高、提高检测灵敏度，并缩短GL，GA及GAMG3种化合物的同时检测时间，提高检测效率。优化色谱条件为：InertSustain C18（4．6mm×250mmi．d．，5μm）反相色谱柱为分离柱，柱温40℃；甲醇-1．0mmol／L[BMIM]BF4（体积比81：19，乙酸调至pH3．0）为流动相，流速0．7mL／min，进样体积20μL，检测波长251nm。GL，GA及GAMG在5．00—100mg／L范围内线性关系良好（r≥0．9998），检出限分别为0．02，0．04，0．09mg／L；加标回收率分别为100．1％，98．0％，98．2％，RSD为0．18％～0．43％。同时测定GL生物转化体系中3种组分，结果满意。

葡糖酸苷酶生产菌株的筛选及其酶学特性的研究

以生物合成单葡糖苷酸基甘草次酸为目的,建立了一种合成单葡糖苷酸基甘草次酸生物催化剂的筛选方法,并筛选到一株青霉菌属真菌,表达的葡糖酸苷酶具有高度底物特异性,能定向水解甘草酸生成单葡糖苷酸基甘草次酸,且研究了其酶学特质。结果表明:该催化反应的活化能Ea为116.072kJ·mol-1,反应动力学常数Km为0.328mmol·L-1,最大反应速度Vmax为3.53×10-3 mmol·L-1·min-1。催化体系的最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.2。该催化剂在45℃以下较稳定,pH稳定性维持在4.6～5.8,Mg2+对催化活力有一定促进作用,而Cu2+、Fe2+、Fe3+、Ag+有较大抑制作用。

亲水性离子液体[EMIM]BF_4对固定化β-葡萄糖醛酸苷酶催化活性的影响

以壳聚糖为固定化载体,采用吸附交联法制备固定化β-葡萄糖醛酸苷酶;以1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([EMIM]BF4)/缓冲溶液均相体系为介质,研究了亲水性离子液体[EMIM]BF4对固定化酶生物催化甘草酸(GL)合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)的影响.实验结果表明,当均相体系中[EMIM]BF4的体积分数为16%,pH为5.4,反应温度为50℃及摇床转速为200 r/min时,酶活力达到最高,并且明显优于纯缓冲溶液体系中的最高酶活.重复利用性实验结果表明,与纯缓冲液介质体系相比,固定化酶在含亲水性离子液体[EMIM]BF4的均相介质中表现出较好的操作稳定性.表观动力学参数和活化能数据表明,亲水性离子液体[EMIM]BF4在催化体系中能够增强酶和底物GL的亲和力,有效稳定酶-底物的过渡态,并降低反应活化能,而使固定化β-葡萄糖醛酸苷酶表现出较高的催化活性.

甘草次酸对K562细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:研究MMP-2、MMP-9在K562细胞中的表达及甘草次酸(GA)对其表达影响。方法:采用MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖抑制的作用;半定量RT-PCR法和免疫组化分别检测GA对K562细胞基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。结果:K562细胞抑制率与甘草次酸浓度及用药后培养时间呈正相关。GA能抑制K562细胞MMP-2、MMP-9mRNA及蛋白的表达,并呈剂量相关性。结论:MMP-2、MMP-9在白血病的发生发展中可能起一定作用,GA可抑制其增殖可能与下调MMP-2、MMP-9mRNA及蛋白表达有关。

甘草皂苷类化合物结构与保肝活性关系的DFT研究

三萜皂苷类化合物是中药甘草保肝作用的主要药效物质。本文以甘草中的三种皂苷类化合物甘草酸、单葡萄糖醛基甘草次酸和甘草次酸为研究对象,采用密度泛函理论方法(DFT)在B3LYP/6-31+G*水平上,对三萜皂苷类化合物进行量子化学计算。依据化合物的几何结构、NPA电荷、偶极矩、溶剂化能和前线轨道能等参数,分析甘草中皂苷类化合物的结构与保肝活性之间的关系,以期对中药甘草的深入研究与开发提供理论基础。计算结果表明,三种甘草皂苷类化合物的活性部位在五环三萜上,而糖环不是其药理活性部位,但是糖环的结构和数目会影响药物分子的理化性质。根据前线分子轨道能级之差ΔE值可知,三种化合物的保肝活性顺序为:GA>GAMG>GL。

11-脱氧甘草次酸乙酯3-单糖链皂苷的合成及其活性研究

合成了5种11-脱氧甘草次酸3-单糖链皂苷并初步探讨其生物活性.以苯甲酰基保护的糖基三氯乙酰亚胺酯为供体,在三氟甲磺酸三甲基硅脂(TMSOTf)的催化作用下与11-脱氧甘草次酸乙酯C(3)位羟基发生糖苷化反应,以较好的产率制备得苯甲酰基保护的11-脱氧甘草次酸乙酯3-单糖链皂苷7a～7e,用NaOMe/MeOH溶液脱除苯甲酰基得11-脱氧甘草次酸乙酯3-单糖链皂苷8a～8e.合成的5个11-脱氧甘草次酸3-单糖链皂苷均为新化合物,结构经1H NMR、质谱、元素分析确证,活性实验表明化合物8a对高浓度N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中枯草芽孢杆菌的生长具有保护作用,化合物8e对高浓度DMF中大肠杆菌、酵母菌的生长具有保护作用.