DHA单酰基甘油酯型藻油对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

研究DHA单酰基甘油酯对小鼠急性酒精性肝损伤的保肝作用及机制。将雄性小鼠随机分为正常组、模型组、实验组(DHA单酰基甘油酯组)、阳性对照组(DHA三酰基甘油酯组和DHA乙酯组)5组。给药15 d后,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量,肝组织Toll样受体4(TLR 4)、髓样分化因子(MyD88)、核转录因子κB(NF-κB)基因表达水平。观察肝组织病理性改变;分析小鼠粪便细菌多样性。DHA单酰基甘油酯能显著降低急性酒精肝损伤小鼠血清ALT、AST、ALP、TG、TC和LDL浓度,而显著增加HDL浓度,改善酒精引起的肝组织病理性改变,而且DHA单酰基甘油酯对小鼠肝损伤改善效果优于DHA三酰基甘油酯和DHA乙酯。此外,DHA单酰基甘油酯能显著抑制酒精肝损伤小鼠肝组织TLR 4、MyD88、NF-κB基因表达,对酒精引起的肠道菌群紊乱具有一定恢复作用。DHA单酰基甘油酯对酒精诱导小鼠肝损伤具有一定保护作用,其机制可能与抑制TLR 4/NF-κB通路和改善肠道菌群有关。

单酰基甘油酯酶促进肿瘤生长及侵袭研究进展

单酰基甘油酯酶（MAGL）是丝氨酸水解酶超家族成员之一,与激素敏感性脂解酶一起将脂肪细胞和其他细胞内储存的三酰甘油分解为甘油和脂肪酸。此外,它还能够作用于内源性大麻素系统。但目前其生物学功能尚未完全了解。近年来部分学者开始关注其在癌症中的作用。本文通过对MAGL生理生化作用的描述,简要介绍其研究现状。

单酰基甘油酯酶促肿瘤侵袭的研究进展

单酰基甘油酯酶(Monoacylglycerol Lipase,MAGL)是催化单酰甘油分解成脂肪酸和甘油的丝氨酸水解酶,且与内源性大麻素系统密切相关。近年来,研究发现,MAGL在人侵袭性肿瘤细胞和原发性肿瘤细胞中高表达,促进肿瘤发生,然而其具体机制尚不明确,本文从脂肪酸代谢网络、内源性大麻素系统等角度出发,对MAGL促进肿瘤发生的可能机制进行了综述。

NO_2吸入诱导小鼠肺组织上皮细胞间质转化及单酰基甘油酯酶抑制的保护作用

通过二氧化氮(NO_2)动式吸入染毒模型,探讨其对小鼠肺组织上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的影响及单酰基甘油酯酶(MAGL)抑制在此过程中的保护作用.首先检测暴露后肺组织硝酸盐、亚硝酸盐的含量,并考察对EMT标志蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的影响.其次,在MAGL抑制剂JZL^(-1)84预处理后再次进行小鼠NO_2动态吸入染毒,检测不同处理条件下前列腺素E2(PGE2)含量,并考察JZL^(-1)84对E-cadherin和α-SMA表达水平的影响.结果表明,NO_2吸入显著上调小鼠肺组织中硝酸盐和亚硝酸盐的含量,且使小鼠肺组织中E-cadherin表达明显降低,α-SMA表达显著升高,说明NO_2通过其体内代谢衍生物可诱导小鼠肺组织EMT发生.而MAGL抑制可显著降低NO_2诱导的小鼠肺组织中前列腺素E2(PGE2)含量升高,并缓解吸入暴露造成的E-cadherin表达下降和α-SMA表达量增加,抑制EMT过程.由此提示,NO_2吸入暴露可诱导小鼠肺组织EMT发生,而MAGL抑制通过调控PGE2水平对这一损伤效应具有保护作用.

单酰基甘油酯酶对MHCC97H肝癌细胞体内增殖的影响

目的探讨单酰基甘油酯酶(MAGL)在M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中不同表达对MHCC97H肝癌细胞体内增殖能力的影响及其机制。方法将人外周血来源单核细胞诱导分化为M2型TAMs并通过流式细胞术鉴定。建立TAMs与MHCC97H肝癌细胞共培养模型,qRT-PCR检测TAMs细胞中MAGL表达。质粒转染MAGL在TAMs细胞中表达,qRT-PCR及酶联免疫吸附试验检测TAMs细胞的炎症因子mRNA水平及其分泌量。构建MHCC97H小鼠皮下荷瘤模型,观察MAGL在TAMs细胞中不同表达对MHCC97H肝癌细胞体内增殖的影响。计量资料的方差齐性检验用F检验,两独立样本均数之间的比较,方差齐者用t检验,方差不齐者用校正t检验。结果成功诱导人外周血来源单核细胞分化为M2型TAMs。建立体外共培养模型,qRT-PCR检测发现MHCC97H肝癌细胞明显下调TAMs细胞中MAGL表达水平。构建小鼠皮下荷瘤模型,发现上调MAGL表达抑制M2型TAMs对MHCC97H肝癌细胞体内增殖的促进作用。进一步机制研究发现,MAGL高表达促进M2型TAMs细胞中炎症因子白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的转录和分泌。结论MAGL高表达抑制MHCC97H肝癌细胞体内的增殖,其机制可能与增强TAMs细胞的炎症因子释放有关。

M2型肿瘤相关巨噬细胞中单酰基甘油酯酶不同表达对MHCC97H肝癌细胞肺转移的影响

目的观察M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中单酰基甘油酯酶(MAGL)不同表达水平对MHCC97H肝癌细胞肺转移能力的影响。方法将人白血病单核细胞株THP-1诱导分化为M2型TAMs并通过流式细胞术分选鉴定。分别予以MAGL抑制剂JZL184下调或质粒转染上调MAGL在TAMs细胞中表达。建立实验分组,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞中MAGL表达水平。构建小鼠尾静脉注射肺转移瘤实验模型,活体荧光成像系统检测小鼠肺转移瘤荧光强度。结果成功诱导THP-1细胞分化为M2型TAMs。建立MAGL高低不同表达的M2型TAMs细胞株,RT-PCR检测各组间MAGL表达差异有统计学意义(TAMs-WT比TAMs-WT+JZL184:t=6.221,P<0.01;TAMs-WT+JZL184比TAMs-MAGL-OE+JZL184:t=5.456,P<0.01)。小鼠肺转移瘤模型显示,MAGL抑制剂JZL184下调MAGL在M2型TAMs细胞中表达后,MHCC97H肝癌细胞小鼠肺荧光强度为(0.980±0.140)×10^4 a.u.,明显大于未干预组的(0.558±0.082)×10^4 a.u.,差异有统计学意义(t=4.497,P<0.05);而在JZL184干预组中上调M2型TAMs细胞中MAGL表达,增强的小鼠肺转移瘤荧光强度为(0.571±0.077)×10^4 a.u.,显著弱于干预的未转染组(t=4.429,P<0.05)。结论M2型TAMs中MAGL表达降低促进MHCC97H肝癌细胞肺转移。

单酰甘油脂肪酶对人肝细胞癌裸鼠移植瘤的影响及其机制

目的探讨单酰甘油脂肪酶(MAGL)在人肝细胞癌(HCC)裸鼠移植瘤生长中的作用和机制。方法移植的SMMC-7721细胞株分为SMMC-7721WT组(未处理)、SMMC-7721MAGL-KD组(MAGL沉默)、SMMC-7721MAGL-OE组(MAGL过表达)和SMMC-7721Vector组(空载体转染) 4组。将27只雄性BALB/c裸鼠分为4组建立裸鼠皮下移植瘤模型,即A组(注射SMMC-7721WT组细胞株,n=12)、B组(注射SMMC-7721MAGL-KD组细胞株,n=5)、C组(注射SMMC-7721MAGL-OE组细胞株,n=5)及D组(注射SMMC-7721Vector组细胞株,n=5),其中A组又分为A1(正常饲喂,n=4)、A2[(高脂饲喂(HFD)+JZL184(MAGL的特异性抑制剂,n=4)和A3 (HFD饲喂,n=4) 3个亚组。观察并比较4组肿瘤体积变化,瘤体内增殖细胞核抗原(PCNA)、金属基质蛋白酶(MMP) 2、血浆溶血性磷脂酸(LPA)和前列腺素E2(PGE2)的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 MMC-7721WT组、SMMC-7721MAGL-KD组、SMMC-7721MAGL-OE组3组间MAGL蛋白相对表达水平比较差异有统计学意义(0. 377±0. 026 vs 0. 182±0. 055 vs 0. 689±0. 019,F=33. 382,P <0. 001),SMMC-7721MAGL-KD组MAGL蛋白表达水平显著低于SMMC-7721WT组(P <0. 05),SMMC-7721MAGL-OE组显著高于SMMC-7721WT组(P <0. 05);A、B、C、D 4组间裸鼠皮下移植瘤大小比较差异有统计学意义[(4236. 125±1284. 283) mm^3vs (1883. 375±552. 977) mm^3vs (10 146. 061±1842.264) mm^3vs (4307. 452±2070. 708) mm^3,F=6. 804,P=0. 023],C组的裸鼠皮下移植瘤的生长速度比A组更快(P <0. 05),而B组比A组慢(P <0. 05);A、B、C 3组间PCNA和MMP2水平比较差异均有统计学意义(PCNA:25 843. 821±4201. 310 vs 17 426. 95±5139. 202 vs 39 753. 103±5721. 444,F=21. 482,P <0. 001;MMP2:52 841. 621±4339. 253 vs 35 511. 451±8251. 423 vs 68 274. 731±6418. 594,F=11. 526,P <0. 001),B组PCNA和MMP2水平均明显低于A组(P值均<0. 05),而C组均高于A组(P值均<0.05);A1、A2、A3 3组间肿瘤体积比较差异有统计学意义[(23 476. 289±483. 872) mm^3vs (18 593. 851±1385. 805) mm^3vs (37 703.198±2925. 254) mm^3,F=47. 371,P=0. 004],与A1组相比,A3组的裸鼠皮下移植瘤体积增长速度更快(P <0. 05),A2组明显受到抑制(P <0. 05);A1、A2、A3 3组间PGE2水平比较差异有统计学意义[(0. 109±0. 023)μmol/L vs (0. 056±0. 010)μmol/L vs(0. 168±0. 024)μmol/L,F=16. 492,P <0. 001],A3组PGE2水平明显高于A1组(P <0. 05),A2组明显低于A1组(P <0. 05);B、C、D 3组间PGE2水平比较差异有统计学意义[(0. 069±0. 025)μmol/L vs (0. 175±0. 023)μmol/L vs (0. 096±0. 019)μmol/L,F=31. 550,P <0. 001],B组PGE2水平明显低于D组(P <0. 05),C组明显高于D组(P <0. 05)。结论 MAGL可能通过调控PGE2促进裸鼠HCC皮下移植瘤的生长,提示MAGL可能成为未来治疗HCC的潜在靶点。

外周内源性大麻素系统在快眼动睡眠剥夺所致大鼠内脏感觉降低中的作用

背景:内脏感觉过敏是功能性胃肠病的重要病理生理机制之一,快眼动(REM)睡眠剥夺可降低大鼠内脏感觉,但具体机制尚不明。目的:研究外周内源性大麻素系统在REM睡眠剥夺所致大鼠内脏感觉降低中的作用。方法:24只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为实验对照组、睡眠剥夺组和利莫那班干预组。采用花瓶技术制作REM睡眠剥夺大鼠模型。睡眠剥夺48 h后行结直肠扩张(CRD),记录腹壁肌电图,以反映内脏感觉功能的变化。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法分别测定大鼠肠道组织中1型大麻素(CB1)受体、脂肪酰胺水解酶(FAAH)和单酰基甘油脂酶(MAGL)mRNA和蛋白表达。结果:予不同扩张压力(40、60和80 mm Hg)后,睡眠剥夺组大鼠腹外斜肌放电次数显著低于实验对照组(P<0.05);利莫那班干预组放电次数显著高于睡眠剥夺组(P<0.05),但与实验对照组无明显差异。与实验对照组相比,睡眠剥夺组大鼠肠道CB1受体mRNA表达上调(P<0.05),结肠FAAH和MAGLmRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:REM睡眠剥夺降低大鼠内脏感觉的作用与外周内源性大麻素代谢降低有关。

气相色谱-质谱联用法检测全麦粉脂质成分

通过气相色谱-质谱联用法(GC-MS)测定6个不同品种全麦粉脂质的组成及含量。结果表明:在全麦粉脂质中鉴定出16种化合物,为5种烷基间苯二酚(AR)同系物、4种单酰基甘油酯(MG)同系物、3种甾醇、1种甲基烷基间苯二酚(MAR)和3种烷烃共5大类。不同小麦品种脂质的各组分含量不同,藳优9409和瑞华麦521中的AR同系物总量均较高,分别达到了(343.3±7.3)μg/g和(279.5±5.7)μg/g,可以作为优质全麦粉资源应用于生产和消费中。

海藻MGMG型甘油糖脂的研究

目的鉴定中药海藻(羊栖菜Sargassum fusiforme)中的单半乳糖基单酰基甘油酯(monogalactosylmonoacylglycerol,MGMG),分析sn-1型和sn-2型位置异构体的化学特征。方法利用多种色谱手段分离得到MGMG,采用NMR、HR-ESI-MS等谱学方法鉴定结构,采用HPLC、HPLC-ESI-MS/MS分析位置异构体的互变及其色谱-质谱特征。结果分离到并鉴定5个MGMG,酰基分别为十八碳四烯酰基、十八碳三烯酰基、二十碳四烯酰基、十八碳二烯酰基和十八碳单烯酰基;sn-1型和sn-2型MGMG单体均不稳定,会相互迅速转变直至sn-1型为主(相对峰面积85∶15)的平衡状态。sn-2型在反相色谱柱上的保留时间较sn-1型小,先被洗脱;两者二级质谱碎片离子丰度有较大差异,以[M+Na-Gal]^+为基峰(100%),sn-2型的[M+Na-RCOOH]^+丰度>50%,sn-1型的[M+Na-RCOOH]^+丰度<20%。结论首次从褐藻门中分离鉴定上述5个MGMG,阐明了sn-1型和sn-2型MGMG之间的互变过程,首次报道这2种位置异构体的色谱-质谱特征,可用于MGMG类化合物酰基取代位置的鉴定。

基于内源性大麻素探讨皂术抗纤方治疗肝纤维化大鼠的作用机制

目的:基于内源性大麻素研究皂术抗纤方对肝纤维化大鼠的药理效应及其作用机制。方法:按照随机数字表法将40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、皂术抗纤方组和安络化纤丸组,每组10只。模型组、皂术抗纤方组和安络化纤丸组给予四氯化碳(CCl4)腹腔注射8周,复制肝纤维化模型。第5~8周,皂术抗纤方组、安络化纤丸组分别给予皂术抗纤方(16.1g/kg)、安络化纤丸(30g/kg)治疗。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织羟脯氨酸(Hyp)、N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)、2-花生四烯酸甘油(2-AG)及内源性大麻素水解酶脂肪酰胺水解酶(FAAH)、单酰基甘油酯酶(MGL)mRNA表达量变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织出现明显肝纤维化,血清ALT、AST水平及肝组织Hyp、AEA、2-AG含量显著升高(P<0.01),FAAH、MGL mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,皂术抗纤方组、安络化纤丸组血清ALT、AST水平及肝组织Hyp含量均显著降低(P<0.01),皂术抗纤方组肝组织大麻素AEA、2-AG含量显著降低(P<0.01),FAAH、MGL mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:皂术抗纤方治疗肝纤维化效果显著,其作用机制与调节内源性大麻素有关。