单酶法RTP-CR检测马铃薯纺锤块茎类病毒

根据Taq酶既有聚合酶活性又有反转录酶活性的特点 ,探索了只在Taq酶单独作用下完成RT PCR反应的条件 ,以达到对马铃薯纺锤块茎类病毒 (PSTV)的快速检测。结果表明 ,反转录阶段退火温度在 37℃、循环数不少于 10次的情况下 ,PCR扩增能得到一条相关特异带。经过嵌合式PCR证明 ,这条带为PSTV的特异带。与其他检测方法相比 ,用单酶法RT PCR检测PSTV步骤简单 。

单酶法快速测定发酵液中的L-乳酸

介绍一种简便、快速测定发酵液中Ｌ－乳酸的新方法．采用不依赖ＮＡＤ的Ｌ－乳酸脱氢酶（Ｌ－ＬＤＨ），以菲咯啉铁复合物（Ｏ－ｐｈｅｎａｔｈｒｏｌｉｎｅ－Ｆｅ３＋）作为其电子受体，吸收波长５１０ｎｍ，在７５１分光光度计上直接测定发酵液中的Ｌ－乳酸．

单酶法合成低分子量右旋糖酐的研究进展

低分子量右旋糖酐(Dextran)是以蔗糖为底物,由右旋糖酐蔗糖酶(Dextransucrase, DSR)催化合成葡萄糖聚合物后,再经酸水解/酶水解形成的化合物,其分子量为10 000-20 000 Da,可广泛应用于医药、食品等行业。本文综述了单酶法合成右旋糖酐的研究进展,包括微生物法/酶法生产右旋糖酐的优缺点,DSR的高效表达,单酶法合成右旋糖酐的过程调控,DSR的固定化技术、结构和催化机理,以及单酶法合成低分子量右旋糖酐的研究现状,并在此基础上提出DSR单酶一步法直接合成低分子量右旋糖酐的思路。借助人工智能技术可获得更详细的DSR结构信息,在进一步解析DSR的结构、功能和催化机理的基础上,对其进行合理的设计和改进,优化酶学性质,实现单酶一步法直接合成低分子量右旋糖酐,可为生产低分子量右旋糖酐提供了新的理论支持。

几种免疫组化单酶双标方法的比较

免疫组化双标方法可在一张组织切片上显示两种抗原物质,从而推断组织间的形态和机能关系。免疫双标法可通过两个基本不同的程序。

枯草芽孢杆菌醛缩酶的克隆表达、纯化、酶学性质研究及应用

果糖-1,6二磷酸醛缩酶是糖酵解途径中的关键酶,可催化果糖-1,6二磷酸(FDP)分解成磷酸二羟丙酮(DAP)和三磷酸甘油醛(G3P)的可逆反应.本文首次克隆枯草芽孢杆菌中的果糖-1,6二磷酸醛缩酶基因(fba),构建原核重组表达载体,利用Ni-NTA柱对重组枯草芽孢杆菌果糖-1,6二磷酸醛缩酶(FBA)进行分离纯化和酶学性质研究,构建表达载体pET28a(+)-fba转化入BL21(DE3)宿主内,在30℃下诱导表达,通过SDSPAGE检测FBA纯度和分子量,FBA分子量约为35 kDa.最适反应条件为pH 7.5、35℃,金属离子K^+、Na^+、Fe^(2+)对该酶有较好的激活作用,而Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)对该酶有一定的抑制作用.基于FBA可专一性分解FDP的基本原理,建立了快速、准确测定酵母发酵液中FDP含量的单酶法.通过单酶法测定FDP含量的样品回收率为99.54%,相对标准偏差为0.427%,测定结果基本不受样品中其他成分干扰.T检验结果表明,单酶法和多酶法对发酵液中FDP含量的检测结果无显著差异,与紫外分光光度法测定的结果存在显著差异,这说明单酶法可以准确测定发酵液中FDP的含量.单酶法测定FDP含量具有快速、准确、灵敏的特点,不仅适合于成分复杂的发酵液中FDP含量的测定,也具有广泛的应用价值.

两种制备海藻糖的生物酶转化工艺技术

海藻糖作为具有特殊生物保护功能的非还原性双糖,被广泛应用在食品、医药等各个领域。以双酶法和单酶法为代表的生物酶转化技术是制备海藻糖的研究热点。双酶法以淀粉为原料,在低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶的协同作用下,将直链淀粉转化成海藻糖。双酶法具有原料便宜易得、工艺较成熟、转化率较高等优点,是最早实现酶法工业化生产海藻糖的方法。单酶法直接利用海藻糖合酶将麦芽糖转化为海藻糖。单酶法因为具有反应过程易控、工艺流程简单、副产物少等优点而受到广泛关注。提高酶的耐高温性能及转化效率是目前2种方法的主要研究方向。随着蛋白基因工程领域的发展,生物酶的优化构建技术日趋成熟,为双酶法的进一步完善和单酶法的工业应用奠定了基础。