核黄素5’-(二氢磷酸酯)单钠盐合成工艺研究

目的:制备核黄素5’-(二氢磷酸酯)单钠盐二水合物。方法:以VB2、三氯氧磷为起始原料,用γ-丁内酯代替吡啶,利用正交试验优化反应条件,制得核黄素5’-(二氢磷酸酯)单钠盐二水合物。结果:总收率72.9%。结论:该合成工艺路线环境污染小,操作简便,易于工业化生产。

H-酸单钠盐生产工艺的改进

H-酸学名为1-氨基-8萘酚-3.6二酸,通常以单钠酸的形式加以利用,H-酸是重要的染料中间体,主要用于制造直接、酸性、活性等类别的染料,如直接靛兰2B,直接黑E,酸性大红2G等。随着活性染料的使用量日益增加,H-酸大量用于制造红、紫、深兰、黑色谱系的活性染料。此外,也常用作煤染剂。因此,对H-酸的需要量也相应的增加。

单钠尿酸盐晶体介导炎性反应机制的研究进展

早在一个世纪以前，加洛德医师指出尿酸盐的沉积是导致痛风的原因而不是结果，而 Hollander等在痛风患者的关节滑液中检出单钠尿酸盐（MSU）晶体，进一步证实了MSU晶体是引起痛风的原因之一［1］。因此，MSU晶体的致炎机制受到了风湿和免疫学家的广泛关注。固有免疫系统在感染和损伤所介导的炎性反应中占主导作用，并且能快速启动宿主防御反应，趋化获得性免疫相关细胞移动至炎症部位而引起免疫应答。研究发现，MSU 晶体可作为一种危险相关模式分子（DAMPs），通过与病原相关模式分子（PAMPs）相似的方式激活固有免疫系统，诱导宿主产生炎性反应［2-4］。近年来，MSU晶体作为强烈的炎症刺激物介导炎性反应的机制已得到了深入研究并取得了很大进展。因此，本文对MSU晶体介导炎性反应的相关机制研究进展进行简要综述。

痛风基因表达谱的差异基因表达及免疫细胞浸润分析

目的:研究痛风患者的差异基因表达及免疫细胞浸润情况,寻找痛风发病的关键基因及免疫细胞,探究免疫细胞与痛风的关系。方法:从GEO数据库下载痛风的芯片GSE160170,借助R语言筛选差异基因,随后采用STRING数据库对差异基因进行分析,并借助Cytoscape软件筛选关键基因,再对其进行富集分析,同时对免疫细胞浸润情况进行分析。结果:研究发现IL-6、IL-1β、TNF、CCL3、CXCL8和CXCL1为痛风发病的关键基因,主要通过IL-17、Toll样受体、NOD样受体、NF-κB等信号通路发挥细胞对脂多糖、细菌来源分子及生物刺激的反应等过程导致疾病发生;免疫浸润结果表明记忆性B细胞、活化的NK细胞、活化的树突状细胞、活化的肥大细胞和嗜酸性粒细胞在痛风患者中表达显著;免疫细胞间的相关性分析结果表明滤泡辅助性T细胞与活化的肥大细胞表达呈正相关,未活化的NK细胞与单核细胞表达呈负相关。结论:关键基因和差异表达的免疫细胞与痛风发病机制密切相关,为痛风的免疫机制研究提供了新思路。

基于xCell算法研究痛风的免疫生物标志物及相关靶向中药的筛选

目的研究痛风致病的关键基因以及免疫生物标志物,挖掘潜在的靶向中药,为痛风的临床治疗提供新方向。方法从GEO数据库下载痛风芯片数据集,使用R软件进行差异基因的筛选,并对这些差异基因进行GO及基因通路KEGG富集分析。应用STRING数据库对差异基因进行蛋白质互作网络分析,利用Cytoscape筛选关键基因。使用ELISA方法对关键基因的蛋白表达水平进行实验验证。进一步使用xCell估计免疫细胞在痛风中的相对表达情况及相关性,最后通过Coremine Medical数据库对显著富集的免疫相关生物学过程及关键基因中药进行预测。结果筛选出痛风差异基因共计852个。在GO富集分析中,与免疫反应密切相关的主要生物学过程包括白细胞的趋化性、IL(白细胞介素)-2的产生以及血管生成的调控;KEGG通路主要富集于IL-17信号通路、趋化因子信号通路和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等。筛选出TNF、IL-6、IL-1β、趋化因子配体8(CXCL8)、FOS原癌基因(FOS)和血管内皮生长因子A(VEGFA)等10个关键蛋白,实验验证关键基因蛋白表达水平与芯片数据的表达趋势一致。免疫分析显示,单核细胞、记忆B细胞、初始CD8+T细胞和树突状细胞与痛风关系密切。中药预测发现,人参、三七、黄芩、三白草和丹参等为治疗痛风的潜在药物。结论本研究揭示了痛风致病的可能关键基因以及免疫机制,挖掘出潜在的靶向中药。这些关键基因和中药有望为痛风的治疗提供新的思路和方法。

双能量计算机断层扫描评估单钠尿酸盐负荷预测痛风发作风险——前瞻性、观察性队列研究

目的确定双能量计算机断层扫描(DECT)测量单钠尿酸盐(MSU)晶体的负荷程度能否作为预测痛风急性发作风险的指标。方法本研究为单中心、前瞻性、观察性研究, 纳入2021年8月至2022年2月在青岛大学痛风门诊初诊且通过DECT对双侧足部进行MSU评估的痛风患者229例。入组后, 所有患者开始降尿酸治疗, 并在3个月、6个月时接受随访。在6个月内出现至少1次发作的患者与没有发作的患者进行比较, 计算痛风发作风险的比值比(OR)。结果与无痛风发作患者相比, 痛风发作患者的病程[(6.69±5.42)对(4.14±4.86)年, P<0.01]、基线前1年发作次数[(4.80±1.73)对(2.02±1.23)次, P<0.01]、合并脂肪肝比例(11.0%对1.4%,P<0.05)、足部MSU晶体体积[(3.52±9.74)对(0.29±0.98)cm^(3),P<0.05]显著增高。多因素logistic回归分析显示基线前1年发作次数(OR=1.295, 95%CI 1.032~1.613,P<0.05)和足部MSU晶体体积(OR=3.245, 95%CI 1.164~9.064,P<0.05)是痛风发作的独立危险因素。受试者工作特征(ROC)曲线显示, 在临床预测模型的基础上加入MSU晶体体积的预测模型建立综合预测模型后, 曲线下面积(AUC)值为0.780(95%CI 0.710~0.840), 灵敏度为0.83, 特异度为0.62。使用Bootstrap法对综合预测模型进行内部验证, 该模型预测痛风急性发作的一致性指数(C-index)为0.770(95%CI 0.701~0.833), 该模型的校准曲线显示模型对痛风急性发作的预测概率能较好拟合实际概率, 校准度高。结论足部MSU晶体体积是降尿酸治疗后痛风急性发作的独立危险因素。足部MSU晶体体积越大, 痛风急性发作的可能性越高。本研究为早期预测痛风发作提供了依据, 为早期预防治疗提供了参考。

中性粒细胞胞外诱捕网在痛风中的研究进展

痛风是一种与尿酸过高有关的代谢性风湿病,1990年至2019年我国痛风患病率增长了129.35%。研究显示痛风会增加肾脏病和心血管疾病的风险,对家庭和社会造成经济负担。近年来许多研究发现中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)在痛风发病中起重要作用,揭示了其对急性痛风和慢性痛风的影响。痛风的病理机制与血清中单钠尿酸盐(monosodium urate,MSU)晶体的沉积有关,MSU晶体能激活中性粒细胞释放NETs,而NETs在MSU晶体诱发的炎症反应中起到双重作用,进而影响痛风的发作缓解和慢性进展。此外,NETs还与痛风的骨性侵蚀、心血管疾病等并发症相关。这些发现表明,NETs可能成为痛风诊断和治疗的新靶点。本研究旨在概述NETs在痛风疾病发生发展中的作用机制,并探讨其在痛风诊断和治疗方面的潜在价值。

白细胞介素-33在痛风中的作用研究进展

痛风是由单钠尿酸盐晶体在关节和关节周围组织中沉积引发的炎症性疾病。白细胞介素(IL)-33是IL-1家族成员之一,当组织受损时以警报素的形式释放,与ST2受体结合发挥免疫调节功能。综述近年来IL-33在痛风中的作用研究进展,发现IL-33可通过影响免疫细胞的募集,调控炎症因子的释放参与痛风的发病过程,表现出双向免疫调节作用,既能加重炎症反应,又有助于炎症缓解。

基于TGF-β_(1)/Smads信号通路探讨水蛭素治疗痛风性关节炎的机制研究

目的:探讨水蛭素治疗单钠尿酸盐(MSU)所致痛风性关节炎的作用机制。方法:用250μg/mL MSU诱导RA-HFLs细胞炎症模型,将细胞分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(1μmol/L)组及水蛭素低(1 U/mL)、中(2 U/mL)、高(4 U/mL)浓度组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清中炎症因子水平;Real-time PCR检测各组细胞中纤维化相关基因表达;Western Blot检测各组细胞中TGF-β_(1)/Smads信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组RA-HLFs细胞凋亡率及IL-1β、TNF-α、NF-κB水平显著升高,细胞活力显著降低,α-SMA、Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及TGF-β_(1)蛋白表达和p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平显著升高(P<0.01或P<0.001)。与模型组比较,水蛭素各浓度组RA-HFLs细胞凋亡率及IL-1β、TNF-α、NF-κB水平显著降低,细胞活力显著升高,α-SMA、Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA及TGF-β_(1)蛋白表达和p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平显著降低(P<0.05~P<0.001)。水蛭素的作用呈浓度依赖性。结论:水蛭素能促进RA-HFLs细胞增殖,抑制细胞凋亡、炎症反应和纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β_(1)/Smads信号通路有关。

加味四妙方通过调控蛋白多糖降解治疗大鼠痛风性关节炎的机制研究

目的:基于蛋白多糖降解探讨加味四妙方对单钠尿酸盐(MSU)诱导的大鼠痛风性关节炎(GA)的作用及其作用机制。方法:将6只SD大鼠随机分为空白组和模型组,每组3只,模型组向关节腔内注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)建立GA模型,对照组注射等体积生理盐水。24 h后对两组大鼠的滑膜组织进行转录组测序,筛选出差异表达基因。体外培养家兔膝关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色、RT-PCR法检测不同代数软骨细胞中蛋白多糖(PGs)的表达。采用Western blot与qRT-PCR法检测不同浓度MSU(200、500、1000µmol/L)处理后MMP-3的蛋白及mRNA表达。将33只SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药组,每组11只。膝关节注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)制备大鼠痛风性关节炎模型,免疫组化检测滑膜组织中MMP-3的表达,番红固绿染色法检测大鼠关节软骨细胞蛋白多糖的表达。结果:MMP-3是显著上调的差异表达基因,与Jak/STAT信号通路、TGF-β信号通路、趋化因子信号通路、IL-17信号通路等密切相关。体外验证发现,与空白组比较,经250、500、1000µmol/L MSU刺激24 h后,MMP-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与空白组比较,MMP-3 mRNA表达水平经250µmol/L MSU刺激后明显升高(P<0.01),经500、1000µmol/L MSU刺激后其表达显著升高(P<0.001)。与空白组比较,经250、500µmol/L MSU刺激后,各组软骨细胞蛋白多糖表达均显著降低(P<0.05);与250µmol/L MSU组比较,10%和20%加味四妙方含药血清(MSM)组均能有效逆转上述结果(P<0.001)。与500µmol/L MSU组比较,20%MSM能够有效上调蛋白多糖的表达(P<0.05)。与空白组比较,模型组软骨细胞蛋白多糖mRNA表达显著降低(P<0.001);与模型组相比,10%MSM与20%MSM均能有效增加其mRNA表达(P<0.001,P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠膝关节肿胀明显(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组能明显抑制其关节肿胀(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组MMP-3表达增加且关节软骨表层蛋白多糖丢失;与模型组相比,各给药组对上述现象均有明显改善作用。结论:加味四妙方通过抑制MMP-3生成调控蛋白多糖降解从而治疗痛风性关节炎。

酸滴定法测定氰尿酸含量实验研究

消毒液生产中排出的碱性废水含有氰尿酸,目前测量氰尿酸的方法,不适合工业化碱性废水。为此研究了一种适用于在碱性溶液中测定氰尿酸含量的方法——酸滴定法,依据氰尿酸溶液p H值分别在4.7和8.5产生突变的原理,通过使用标准盐酸液对碱性氰尿酸溶液进行滴定,测定溶液中氰尿酸含量。实验表明,酸滴定法能够快速、准确测定出碱性溶液中氰尿酸含量,并且误差在5%以内。

痛风发病机制研究进展

痛风是一种由于单钠尿酸盐(MSU)晶体与组织微环境相互作用导致的反复发作的急性炎性反应。MSU晶体启动机体的炎性级联反应涉及多种信号通路,其中包括MSU晶体直接与细胞表面Toll样受体的结合,MSU晶体与细胞膜表面脂类分子的结合以及MSU晶体以内吞的方式进入细胞。NLRP3炎性小体的活化处于炎性反应的中心环节。

1例脊柱痛风的诊断及治疗分析

目的总结脊柱痛风的诊断及治疗特点。方法对1例腰椎关节突痛风石老年女性患者的临床资料进行回顾性分析。结果患者症状表现为腰痛伴右下肢疼痛,查体腰椎主被动活动受限,活动时疼痛,双下肢肌力3级,右下肢直腿抬高试验阳性,加强试验阳性,双足第一跖趾关节可见痛风石结节。腰椎MRI检查提示L4/5、L5/S1间隙水平椎管狭窄,L5/S1右侧关节突附近可见些许点状高信号,尿酸678μmol/L。保守对症治疗症状无改善后行手术治疗,术中发现右侧L5下关节突及S1上关节突及椎板处广泛灰白色组织浸润,确诊脊柱痛风。充分清除病灶,松解神经,术后患者腰痛及右下肢放射痛明显缓解。结论脊柱痛风诊断需结合病史、症状、体征、血尿酸及CT、MRI、双能CT等检查。治疗方面,对于非紧急病例应首选保守治疗,对于神经系统症状明显、进展快或继发性脊柱不稳的患者可采取手术治疗,术后保守治疗。

一种改良膝关节痛风性关节炎兔模型

背景:良好的动物模型是研究痛风性关节炎重要的实验方法和手段。然而,目前尚无十分理想的痛风性关节炎动物模型,这给寻找新的药物、方法治疗痛风性关节炎带来阻碍。目的:评价改良后的兔膝关节痛风模型的有效性。方法:选取新西兰大白兔随机分成4组。空白对照组不做任何处理,右膝作为观察侧;假手术组取大网膜,处理后不包裹单钠尿酸盐结晶,单纯将大网膜植入兔右侧膝关节髌上囊腔;经典模型组将单钠尿酸盐结晶混悬液(0.1 g/L)注射入兔右侧膝关节髌上囊腔;改良模型组取大网膜,处理后包裹单钠尿酸盐结晶(100 mg/kg),植入兔右侧膝关节髌上囊腔。观察造模后1,2,3 d及造模后1,2,3,4周关节肿胀程度、活动情况及关节炎症反应等来评估改良模型的优缺点。结果与结论:(1)造模后4周内各个时间点改良模型组的兔关节功能均显著降低(P<0.05);(2)经典模型组和改良模型组造模后关节肿胀指数分别在造模后第1或2天达到高峰,其后均开始下降,而改良模型组较经典模型组下降缓慢,造模后第4周时与空白对照组相比存在显著性差异;(3)大体观察:改良模型组和经典模型组均呈现出明显的关节炎症改变:滑膜广泛增生,伴充血水肿;关节腔内有较多关节液形成;周围组织充血水肿;软骨未见明显破坏;(4)经典模型组和改良模型组造模后血清和关节液中白细胞介素6及白细胞介素1β水平分别在术后第1和第2天达到高峰,其后均开始下降,改良模型组下降较经典模型组缓慢,至造模后4周时仍高于其他3组(P<0.05);(5)结果说明,通过向兔膝关节腔内植入用自体大网膜包裹的单钠尿酸盐结晶可以成功地制造兔膝关节痛风性关节炎的模型,模型可维持至4周以上,较经典模型维持时间显著延长。

从近5年国内外指南变迁看痛风患者的降尿酸药物治疗

痛风(gout)是由于嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少导致持续高尿酸血症(hyperuricemia)、形成单钠尿酸盐(monosodium urate,MSU)晶体并沉积于体内引起的晶体性关节病。我国高尿酸血症的患病率为13.3%,痛风的患病率为1.1%,上升趋势明显[1]。由于无症状的高尿酸血症患者也可以通过双能CT或者超声在关节中发现MSU晶体[2],2019年痛风、高尿酸血症和晶体相关性疾病协作网对痛风相关的概念和术语进行了规范,提出痛风的疾病状态包括临床前阶段和临床阶段[3]。临床前阶段包括无症状的高尿酸血症、无症状的MSU晶体沉积和无症状高尿酸血症伴MSU晶体沉积。临床阶段包括痛风、痛风石性痛风和侵蚀性痛风。痛风临床阶段的各种疾病状态可以同时出现。

单钠尿酸盐晶体诱导小鼠急性腹膜炎模型中线粒体DNA的表达及意义

目的 建立单钠尿酸盐（MSU）晶体诱导的小鼠急性腹膜炎模型,并探究炎症过程中线粒体DNA（mtDNA）的表达及意义.方法 64只C57BL16雄性小鼠采用随机数字法分为2组;PBS对照组（腹腔注射0.2 ml PBS）,MSU组（腹腔注射0.2 ml的15 mg/ml的MSU）,分别在2、4、6、8、12、16、20、24 h后,取小鼠外周血,PBS灌洗腹腔取腹腔灌洗液,并取腹膜组织荧光免疫染色.采用ELISA法检测血浆、腹腔灌洗液中的炎症因子IL-1β、IL-18水平,提取DNA,荧光定量实时PCR法测定各组血浆、腹腔灌洗液中mtDNA表达量.数据分析采用多因素方差分析.结果 MSU组的血浆、腹腔灌洗液中的炎症因子IL-1β[（27.0±2.0） pg/ml和（26.8±2.1） pg/ml]、IL-18水平在2、4h明显升高[（673±454） pg/ml和（752±495） pg/ml],高于其他时间点及对照组（F=22.778,P＜0.05;F=6.660,P＜0.05）;MSU组的血浆、腹腔灌洗液中mtDNA表达量4h开始升高,6h达峰值[（9.85±4.59）×106拷贝,（7.81±3.43）×106拷贝],8h下降,明显高于其他时间点及对照组（F=6.719,P＜0.05;F=1 1.181,P＜0.05）;荧光免疫染色发现MSU组给药12 h后开始形成中性粒细胞的聚集,并在24h形成大量中性粒细胞的聚集.结论 MSU诱导的小鼠急性腹膜炎炎症过程中,随着mtDNA的表达量升高,炎症反应缓解并最终形成中性粒细胞的聚集,mtDNA的表达可能是MSU导致炎症中的保护因素之一.

中性粒细胞胞外诱捕网在痛风性关节炎中的作用:一枚硬币的两面

痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)是一种由大量单钠尿酸盐(monosodium urate,MSU)沉积所导致的急性炎症。MSU晶体引发中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的产生,后者诱发粒细胞和单核细胞释放促炎细胞因子和趋化因子,使炎症反应进一步加剧。NETs的大量形成会对晶体进行包埋降解,抑制炎症扩散。文章概述了GA的发生、发展及自我缓解过程中中性粒细胞在其中所起到的双重作用,以及参与中性粒细胞NETs形成的相关信号通路。

中性粒细胞和NETs在痛风中的作用及研究进展

痛风是由单钠尿酸盐沉积组织所致的炎症性疾病,以急慢性关节炎为特征,与心脑血管疾病、糖尿病、肾脏病等高度相关,已成为全球性的常见病、多发病,严重危害人类健康。中性粒细胞和中性粒细胞胞外网状陷阱(NETs)在痛风急慢性关节炎和痛风石的形成中发挥重要作用,但具体调控机制和通路尚不明确。本研究综述中性粒细胞和NETs在痛风发病中的作用机制及研究进展。

痛风性关节炎的自行消散及中性粒细胞胞外诱捕网的作用

吞噬细胞在促炎消散介质的作用下释放胞外诱捕网,捕获和清除沉积于关节部位单钠尿酸盐晶体。聚集的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)不仅参与慢性痛风石的形成过程,而且在痛风性关节炎(GA)的炎症缓解启动和自行消散过程中发挥双向调节作用。该文从剖析炎症消散机制着手,就NETs对GA自行消散的影响进行系统综述。

血清尿酸及其晶体与骨关节炎相关性研究进展

骨关节炎(OA)是中老年人群中最常见的疾病之一,临床上可出现关节疼痛、活动受限和关节畸形等症状,严重影响了人们的工作能力和生活质量&目前OA具体的发病机制尚未完全明确。近年来对血清尿酸(UA)水平及其晶体在关节内的沉积对OA发生发展影响的关注越来越多。UA是瞟吟代谢的终末产物,瞟吟代谢紊乱、能量代谢异常及肾脏对UA的排泄障碍均可引起血清UA浓度升高&研究表明UA晶体在组织中沉积可引发关节的炎症反应。目前大量流行病学调查及临床观察结果显示血清UA水平及其晶体的沉积对OA的关节结构改变及炎症代谢可能存在一定的影响。体内尿酸水平异常可能参与OA的发病。