三种单链特异性核酸酶检测桉树ESTP的酶切条件优化

单链特异性(SSS)核酸酶是基因组学研究的有效工具。本研究对绿豆芽核酸酶、S1和芹菜汁提取物三种SSS核酸酶检测桉树ESTP检测的酶切条件进行了优化,优化因子依次包括Mg2+浓度、酶切温度、酶用量和/或pH值等因子。三种酶的最适酶切温度均为60℃。绿豆芽核酸酶优化后的酶切反应体系为:10×Buffer(pH5.56)1.0μL(NaAc300mmol/L,Nacl1.0mol/L,ZnAc210mmol/L,甘油50%,MgCl2100mmol/L),PCR产物5μL,酶4.5U,超纯水补至10μL;S1的优化酶切体系为:10×Buffer(pH5.46-5.67)1.0μL(MgCl2100mmol/L,ZnAc22mmol/L,Bis-Tris200mmol/L,TritonX1000.02%,BSA0.002mg/mL),PCR产物5μL,S1酶5U,超纯水补至10μL;CJE的优化酶切体系为:10×Buffer(pH7.5)1.0μL(MgCl2100mmol/L,Hepes100mmol/L,KCl100mmol/L,TritonX1000.02%,BSA0.002mg/mL),PCR产物5.0μL,CJE酶1.0μL,超纯水3.0μL。综合考虑酶切效果和成本,推荐S1为检测桉树ESTP的经济、有效的SSS核酸酶。