人类PIF1蛋白质N-末端多肽的表达纯化和生物学活性研究

解螺旋酶参与几乎体内所有的DNA代谢，具有重要的生理功能。为了从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能，我们以HeLa细胞的cDNA文库为模版，PCR扩增得到PIF1基因5’端含有1～534核苷酸的cDNA序列一PIFAC。在PIF△C的5’端引入六组氨酸标签后插入pET15b表达载体，得到重组质粒pET15-PIF△C。以此重组质粒转化Rosetta TM2（DE3）感受态细胞，使PIFAC蛋白质在大肠杆菌中得到表达。在4℃通过快速液相色谱纯化系统，通过一系列色谱层析柱纯化了PIFAC蛋白质。以纯化的PIFAC蛋白质免疫家兔制备了抗血清，并检测了纯化的PIFAC的生物化学活性。结果显示不含解旋酶模序的人类PIF1蛋白质的N-末端，具有使单链DNA复性的特性。PIF1解螺旋酶具有解开DNA双链和使双链DNA复性这一矛盾的特性，暗示了人类PIF1解螺旋酶可能参与损伤DNA的修复，包括断裂的双链DNA的修复。