抗HBs Ag单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建

采用重叠PCR技术 ,以抗乙肝表面抗原 (HBsAg)IgG铰链区基因为Linker将Fab抗体基因的重链和轻链连接起来 ,构成单链Fab基因。通过测序鉴定 ,克隆的单链Fab基因与理论上的完全一致 ,并成功构建含完整单链Fab基因的毕赤酵母 (P pastoris)表达载体。

抗苏丹红单链Fab抗体的构建、表达及功能鉴定

从分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株SU211中克隆抗体轻链Lc基因和重链Fd基因,将Lc、Fd基因以及Linker克隆到载体pET24a(+)中,构建scFab表达载体并在E.coli BL21(DE3)获得表达,SDSPAGE和Westernblot分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为57 kD,与理论预期值相符。经复性后,ELISA鉴定结果表明复性抗体对苏丹红Ⅰ具有很高的结合特异性。本研究为新型基因工程抗体的构建以及苏丹红新型免疫检测技术的建立奠定基础。