大麦DNA单限制性酶切选择性扩增多态性技术及其优化

建立和优化了大麦DNA单限制性酶切选择性扩增多态性技术体系 (SADF)。分别用限制酶PstI、EcoRI和MseI酶切大麦基因组DNA ,再与各自相应的人工接头连接 ,使用带三个选择碱基的引物进行选择性扩增。结果表明 :采用分别优化建立的标准PCR扩增检测体系 ,六个识别碱基的PstI和EcoRI的SADF均能得到丰富稳定的带形 ,四个识别碱基的MseI不能得到明显谱带。SADF扩增产物片段大小范围为 :PstI一般在 2 0 0～ 2 0 0 0bp ,而EcoRI在 2 0 0～ 10 0 0bp ;两者在不同大麦品种中均能检测到多态性 ,可用于不同大麦品种的检测 ,但PstI得到的带型明显优于EcoRI,在大麦中得到的片段具有范围宽、分布均匀、易于观察、多态性高等特点。

野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化

为了提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｓｏｊａＬ．）群体ＤＮＡ多态性的能力，随机扩增产物用限制性内切酶（ＭｓｐⅠ、ＨｉｎｆⅠ、ＴａｑⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＳａｌⅠ、ＤｒａⅠ和ＨａｅⅢ）消化，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物，结果发现：１．有的限制性内切酶能够消化野大豆群体ＤＮＡ的随机扩增产物，有的却不能。２．有的限制性内切酶消化无ＲＡＰＤ个体的扩增产物后能够产生多态性ＤＮＡ片段，有的内切酶不能产生。３．有的引物的无ＲＡＰＤ个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的ＤＮＡ片段；有的引物的扩增产物虽然可被内切酶消化，但不能够产生多态性ＤＮＡ片段。实验证明，用限制性内切酶消化扩增产物，确实能够提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆群体ＤＮＡ多态性的能力。

格尔德霉素(GDA)能导致小麦基因组DNA多态性和甲基化修饰增加

刚露白的普通小麦(Triticum aestivum L.)种子用150μmol/L格尔德霉素溶液处理后,小麦根的生长受到抑制。随机扩增多态性DNA标记技术和双限制性内切酶酶切-随机扩增法检测显示,小麦根端分生细胞基因组DNA的多态性和甲基化比例均增加。本研究从分子生物学和表观遗传学水平探讨了格尔德霉素抑制小麦生长的机制。

基于S-SAP标记技术的柑橘芽变新品系青瓯柑的鉴别

青瓯柑是在普通瓯柑上新发现的一个疑似芽变品系,其与普通瓯柑和无籽瓯柑的差异为在采后贮藏3～4个月内青瓯柑果实外果皮仍可保持显著绿色。为进一步确认青瓯柑与普通瓯柑和无籽瓯柑的亲缘关系,基于新建立的瓯柑EcoRⅠ单酶切S-SAP标记技术体系,采用280个选扩引物组合,对现有的全部3种瓯柑（青瓯柑、普通瓯柑和无籽瓯柑）进行S-SAP标记片段筛选,并从C12（5′-TTAATCGCCTTGCAGCACAA-3′）和EAT（5′-GACTGCGTACCAATTCAT-3′）选扩增产物后进行分析。结果表明：获得1条长约260bp的青瓯柑特异的S-SAP标记片段;青瓯柑属于普通瓯柑芽变,获得的SSAP特异标记技术方法可为青瓯柑品种的认定、种苗鉴别及新品种推广提供技术支撑。

妊娠期阴道白色念珠菌基因型的比较研究

目的明确妊娠期阴道白色念珠菌的基因型是否存在差异,了解不同基因分型方法的优劣。方法对628名妊娠妇女的阴道分泌物进行念珠菌培养和鉴定,以三种方法对比研究不同孕期白色念珠菌的基因型。结果妊娠期阴道念珠菌检出率为31.52%,白色念珠菌为最常见的菌种。INT引物PCR法可将126株白色念珠菌分为A、B、C三组,A组最为多见。EcoRⅠ酶切法可将119株白色念珠菌分为A、B、C三组和9个亚组,A—1亚组最常见。RAPD法扩增后,126株白色念珠菌共获得17种基因型,相似系数SAB=0.805±0.007,不同孕期的组内、组间SAB值均大于0.80。结论妊娠期阴道白色念珠菌具有显著的基因多态性,它们是由基因型非常相似的不同白色念珠菌。INT引物PCR法简便、快速,结果稳定、可靠,适于临床推广应用;RAPD法快速、简便、经济,分辨率高,适于临床和科研应用。

DNA分子标记概述

标记是人类生产和社会实践过程中籍以进行有效识别的标记物。遗传标记(geneticmarkers)则是用于区别不同物种、不同群体、不同基因型个体,并且能稳定遗传,具备足够变异性的一类标记。在生物学研究工作中,遗传标记是重要的工具,是用于观察。

Trichostatin A能导致小麦基因组DNA改变及甲基化修饰

为了研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用机制,本实验以组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A处理小麦根尖,通过随机扩增多态性DNA标记技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)和双限制性内切酶酶切-随机扩增法(Coupled Restriction Enzyme Digestion-Random Amplification,CRED-RA)进行探究的结果发现,与对照组相比,处理组10个随机引物的RAPD扩增条带出现83条多样性差异,多样性比例达到87.4%,同时处理组DNA甲基化比例增加.本研究证实Trichostatin A能使小麦基因组DNA发生改变,并出现了表观修饰,从而从分子和表观水平探讨了该抑制剂的作用机理.

分子鉴定技术在中药中的应用

对近些年来兴起的分子鉴定技术进行了分析总结,主要包括随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增性简单序列重复(ISSR)、限制性内切酶切片段长度多态性(RFLP)、扩增限制性内切酶片段长度多态性(AFLP)、单核苷酸多态性(SNP)、DNA条形码序列分析等技术。从中药材真伪鉴定、中药材正品与替代品鉴定、中药材多基原鉴定和遗传多样性、中药材产地鉴别、中药材年限鉴别5个方面对分子鉴定技术在中药中的应用进展进行了归纳总结,阐述了分子鉴定技术存在的一些问题及其未来的发展方向。