N6-甲基腺嘌呤甲基化:中医药防治疾病的新兴靶点

N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰是真核细胞信使RNA(messenger RNA,mRNA)最常见的一种表观遗传修饰方式,近年来发现其在疾病的发生发展中扮演重要角色。通过国内外权威数据库检索分析,阐述了m6A修饰的概念、作用机制及其研究背景,介绍了参与调控m6A的三大类甲基化酶在m6A修饰过程中扮演的角色及其在疾病发生发展中的作用,并对近年来中药及其有效成分通过干预m6A修饰防治疾病的相关研究成果进行了系统地梳理和归纳发现,中药及其有效成分是宝贵的天然m6A调节剂,其在防治癌症、心血管疾病、生殖系统疾病及骨相关等疾病中具有较好的干预作用,但其干预m6A修饰防治疾病的研究正处于探索阶段,进一步探析其具体网络调控机制无疑是未来中医药研究的热门方向。为今后进一步探索中医药通过m6A修饰治疗疾病的潜在价值,挖掘开发可调控表观遗传的中药提供理论参考及依据。

基于Fe_(3)O_(4)磁分子印迹纳米粒子比色检测蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤残留

[目的]实现蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)残留的快速、灵敏、可视化检测。[方法]基于Fe_(3)O_(4)磁分子印迹纳米粒子(Fe_(3)O_(4)MMIP NPs)的类过氧化物酶活性和特异识别性,构建了一种简单、快速、高选择性检测6-BA的比色方法,并用于蔬菜中6-BA残留检测。[结果]在pH 4.0、H 2O 2浓度0.02 mol/L、TMB浓度0.02 mol/L和反应时间5 min时,Fe_(3)O_(4)MMIP NPs表现出最佳的类过氧化物酶催化活性。6-BA在1~300 ng/mL质量浓度范围内与空白和样品吸光度值的差值呈良好的线性关系,检测限为0.697 ng/mL。该方法被成功应用于蔬菜(黄瓜、西红柿、黄豆芽、绿豆芽)中6-BA残留检测,回收率为83.47%~106.76%,相对标准差为0.37%~5.66%。此外,4℃下,Fe_(3)O_(4)MMIP NPs贮存60 d后仍能保持良好的催化活性。[结论]基于Fe_(3)O_(4)MMIP NPs检测6-BA的比色方法具有简便、快速、经济等优势,能够用于蔬菜中6-BA残留检测,具备一定的可靠性和实用性。

3-甲基腺嘌呤对转化生长因子-β诱导大鼠肝脏星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响观察

目的观察3-甲基腺嘌呤(3-MA)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响。方法取对数生长期的HSC-T6细胞分为空白组、TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组。TGF-β+3-MA组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入3-MA(0.5 mg/mL)处理24 h,TGF-β+PBS组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入等量PBS处理24 h,空白组加入等量PBS处理,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β蛋白和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5蛋白。结果TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。结论3-MA可抑制TGF-β诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬。

N6-甲基腺嘌呤相关长链非编码RNA对卵巢癌患者预后的预测价值及免疫功能分析

目的研究N6-甲基腺嘌呤(m6A)相关长链非编码RNA(lncRNA)对卵巢癌预后的预测价值及免疫功能分析。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取卵巢癌患者转录组数据及临床数据,采用相关性分析筛选出与m6A共表达的lncRNA。通过Cox回归分析、最小绝对收缩和选择算子(LASSO)分析及随机森林模型确定构建预后风险评估模型的m6A相关lncRNA,利用受试者工作特征(ROC)曲线、Kaplan-Meier生存曲线、主成分分析(PCA)、Cox回归分析、列线图验证模型的预后价值及独立性。采用免疫相关性分析探究模型与免疫治疗的关系。采用实时定量聚合酶链反应验证卵巢癌细胞中m6A相关lncRNA的表达。结果共得到4个m6A相关lncRNA(AL138820.1、AC019080.1、AC007637.1、RFX3-AS1),其中,AL138820.1、AC007637.1高表达是卵巢癌患者预后的危险因素(HR﹥1),而RFX3-AS1高表达是卵巢癌患者预后的保护因素(HR﹤1)。卵巢癌患者预后影响因素分析结果显示,风险评分、年龄及肿瘤分期均为卵巢癌患者预后的独立影响因素(P﹤0.05)。构建列线图用于预测卵巢癌患者1、3、5年总生存率,该列线图的校准曲线在实际观测值和预测值之间表现出很高的准确性。实时定量逆转录聚合酶链反应结果显示,与人正常卵巢细胞株IOSE80比较,卵巢癌细胞系SKOV3中AL138820.1、AC019080.1、AC007637.1表达升高,RFX3-AS1表达降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论本研究确定了卵巢癌中4个m6A相关lncRNA并构建了验证稳健的风险模型。该模型具有一定预测预后及免疫功能的价值,为基于m6A的卵巢癌早期诊断及治疗提供新的思路。

信使RNA N6-甲基腺嘌呤甲基化修饰在血管性痴呆中的作用机制研究进展

信使RNA(mRNA)中的腺苷酸可发生甲基化转化为N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)进而调节mRNA的功能和代谢,这是一种高度动态可逆的表观转录组修饰方式。血管性痴呆(vascular dementia,VD)是由多种脑血管原因(如动脉粥样硬化、淀粉样改变等)引起的一种神经退行性疾病,近年来,有研究发现m^(6)A与VD的发病和进展密切相关,m^(6)A甲基化在调节神经元氧化应激、炎症反应、脑血管内皮损伤、线粒体功能障碍和突触可塑性等方面具有较大影响。文章对近几年关于m^(6)A甲基化修饰在VD中的潜在作用机制进行综述,以期为后续研究和靶向治疗VD提供新的科学思路。

豆芽中4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤残留的降解规律研究

目的:研究豆芽中植物生长调节剂4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的降解规律。方法:通过超高效液相色谱-串联质谱法,以未检出4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的黄豆芽、绿豆芽为空白基质,采用加标回收试验研究样品在冷藏和冷冻条件下4-氯苯氧乙酸钠和6-苄基腺嘌呤的动态残留量。结果:冷冻条件下,黄豆芽、绿豆芽中4-氯苯氧乙酸钠降解半衰期分别为44.1 d、90.0 d,6-苄基腺嘌呤降解半衰期分别为32.4 d、40.8 d。冷藏条件下,黄豆芽、绿豆芽中4-氯苯氧乙酸钠降解半衰期分别为37.5 d、45.3 d,6-苄基腺嘌呤降解半衰期分别为11.8 d、31.8 d。结论:该研究为豆芽中4-氯苯氧乙酸和6-苄基腺嘌呤因自身降解造成初检结论被推翻的情况提供了理论参考。

同位素内标稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定植物源性食品中的6-苄基腺嘌呤

本研究建立了植物源性食品中6-苄基腺嘌呤的同位素内标稀释超高效液相色谱-串联质谱分析方法。结果表明,该方法灵敏度高、重现性好,可用于多种植物源性食品中6-苄基腺嘌呤的检测。

叶面喷施6-BA对盐胁迫下不同种源黑果枸杞幼苗生理指标和光合特性的影响

以青海黑果枸杞和甘肃黑果枸杞实生苗为试验材料,分析不同浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)对盐胁迫下不同种源黑果枸杞幼苗生理指标、抗氧化系统和光合参数的影响。结果表明:(1)施加低、中浓度6-BA降低了无盐条件下两种黑果枸杞叶片和根中Na^(+)和Cl^(-)质量分数、过氧化氢(H_(2)O_(2))质量摩尔浓度、电解质外渗率,提高了抗坏血酸过氧化酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、硝酸还原酶(NR)和ATP硫酸化酶(ATPS)活性,以及还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、氮(N)、硫(S)质量分数和光合氮利用效率;高浓度6-BA对无盐条件下两种黑果枸杞上述指标却有相反的作用。(2)与青海黑果枸杞相比,甘肃黑果枸杞在盐胁迫下叶片中积累了更多的Na^(+)和Cl^(-),并遭受更大的氧化胁迫,表现为叶片中更高的H_(2)O_(2)质量摩尔浓度和电解质渗出率以及更低的光合参数。(3)受到盐胁迫后,青海黑果枸杞体内抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性高于甘肃黑果枸杞,但甘肃黑果枸杞的超氧化物歧化酶(SOD)活性更高。(4)与甘肃黑果枸杞相比,青海黑果枸杞叶中的氮和硫通过提高同化酶—硝酸还原酶(NR)和ATP硫酸化酶(ATPS)活性而积累更多,从而使叶片中还原型谷胱甘肽(GSH)质量分数显著提高。(5)低、中浓度6-BA有利于提高青海黑果枸杞和甘肃黑果枸杞氮硫同化效率、GSH质量分数以及APX和GR的活性,导致在无盐条件下光合作用增强,缓解了盐胁迫下光合作用的下降,限制了叶片中Na^(+)和Cl^(-)的质量分数,提高了光合氮利用效率;然而高浓度6-BA的应用对黑果枸杞的生长具有反作用;6-BA对青海黑果枸杞盐胁迫下各生理指标变化的影响比甘肃黑果枸杞更明显。因此,6-BA的施用,使青海黑果枸杞的NR和ATPS活性提高,增强了抗氧化防御系统的功能,缓解了盐胁迫引起光合作用减弱的现象。

PP_(333)和6-BA对紫楠幼苗根系形态的调节效益

【目的】紫楠Phoebe sheareri幼苗根系不发达严重制约了紫楠幼苗的繁育,外源激素可以调节植物根系形态发育,用多效唑(PP_(333))和6-苄基腺嘌呤(6-BA)对紫楠幼苗进行处理,分析其对根系形态特征的影响,明确最适紫楠根系发育的激素及浓度。【方法】以同一母树上采集的成熟紫楠种子萌发的幼苗为试验材料,设置低、中、高3个浓度(PP_(333)浓度为0.6、6、60 mg·L^(-1);6-BA浓度为10、50、75 mg·L^(-1)),利用根系扫描仪统计紫楠幼苗主根长、主根直径、根系总长度及根系表面积等形态指标,分别分析2种外源激素对紫楠幼苗根系形态的影响。【结果】PP_(333)处理紫楠幼苗会影响紫楠的主根长、2级侧根数目和2级侧根总长度的增加,但对主根直径的增粗起到促进作用;6-BA处理会促进主根长、主根直径、根系总长度、根系总表面积、1级侧根数目和1级侧根总长度的增加,但限制2级侧根数目和2级侧根总长度的增加。PP_(333)和6-BA较CK组均促进拓扑指数增加,促进紫楠根系朝着鱼尾形分支结构进化。通过主成分分析和隶属函数分析,都得出在激素处理下,浓度为50 mg·L^(-1)的6-BA促进紫楠根系发育效果最好。【结论】不同激素类物质及同一激素的不同浓度对紫楠根系的主根、侧根生长有着不同的调控模式,选择50 mg·L^(-1)6-BA来促进紫楠根系的生长发育效果最好。

N6-甲基腺嘌呤修饰在恶性肿瘤发生发展及治疗中的研究进展

近年来RNA修饰引起了全世界生物学家的广泛关注。到目前为止已发现170余个RNA修饰,其中N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)是mRNA最主要的修饰方式之一。它调节RNA的剪接、转位、翻译和稳定性,在细胞的生长、分化和代谢中起着至关重要的作用。作为一种动态、可逆的修饰,m^(6)A的表达水平受RNA甲基转移酶、去甲基酶以及m^(6)A结合蛋白的共同调节。越来越多的研究表明m^(6)A基因修饰与人类癌症的发生发展关系密切。本文就m^(6)A异常修饰在多种恶性肿瘤发生发展及治疗中的研究进展进行综述,旨在为癌症治疗提供新的思路。

N6-甲基腺嘌呤修饰在胃癌发生发展中作用的研究进展

N6-甲基腺嘌呤修饰(N6-methyladenosine,m6A)是在真核细胞中最广泛的RNA修饰,属于表观遗传学修饰的一种,参与多种肿瘤的发生发展。胃癌是全球癌症死亡率排名第三的恶性肿瘤,目前对于胃癌的发生发展机制了解不完全,早期胃癌难发现,进展期胃癌手术机会少且药物治疗效果欠佳。而在胃癌中,m6A修饰相关因子表达异常,引发了m6A修饰失调,进而影响到胃癌的进展,这也提示我们m6A修饰相关因子有作为胃癌治疗靶点或诊断标志物的潜力。因此,本文就m6A修饰在胃癌发生发展过程中的作用以及可能涉及到的治疗方法予以综述。

脂肪量和肥胖相关基因修饰N6-甲基腺嘌呤调控肿瘤发生发展的作用机制研究进展

脂肪量和肥胖相关基因(FTO)最初被认为是一种与成人和儿童的早发及严重肥胖密切相关的肥胖敏感基因,后来研究发现,FTO能够作为RNA的去甲基化酶,在N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰中作为调控因子发挥作用,其功能障碍与多种恶性肿瘤的发生发展有关。FTO可以通过修饰m6A影响细胞周期与细胞增殖、逃避细胞凋亡信号、逃避自体免疫微环境、诱导血管生成、激活肿瘤细胞侵袭和转移,调节肿瘤干细胞干性,从而在肿瘤中发挥促癌因子或抑癌因子的作用,有望成为肿瘤分子诊断的潜在生物标志物及肿瘤治疗的新靶点。

N6-甲基腺嘌呤修饰在卵子发生及早期胚胎发育中的调控作用

N6-甲基腺嘌呤(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是指RNA腺苷第6位氮(N)原子的甲基化修饰,是哺乳动物mRNA中最为丰富的表观转录组学修饰。m^(6)A依赖于甲基转移酶(Writer)、去甲基化转移酶(Eraser)和m^(6)A结合蛋白(Reader)的共同调控作用。诸多研究表明m^(6)A及其调节酶几乎存在于各个发育阶段的卵泡及早期胚胎组织中,凭借其动态、可逆、敏感的特性广泛地参与mRNA的代谢过程,在转录后水平调控卵子发生,早期胚胎的核重编程、谱系分化、种植以及妊娠维持,在很大程度上决定了女性的生育能力和妊娠结局,并有望成为诸多生殖障碍相关疾病的诊断、预后标志物以及新的治疗靶点。

6-甲基嘌呤-2'-脱氧核苷治疗猫传染性腹膜炎

猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)引起的以胸腔或腹腔积淡黄色渗出液、腹腔肿块、神经症状等为特征的一种高致死性疾病。为研究6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(MePdR)对猫传染性腹膜炎病例的治疗效果及副作用,选取临床上确诊为猫传染性腹膜炎且主人放弃治疗病例5例,采用6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷按10 mg/kg体重颈部和背部皮下注射,配合抗菌消炎,连续治疗14~30 d,治疗期间注射部位溃烂、硬结病例3例,最终1例死亡,4例治愈,治疗有效率为80%。说明6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷治疗猫传染性腹膜炎具有较好的疗效,但药物易引起注射部位溃烂。

化学干预N^(6)-甲基腺嘌呤修饰的研究进展

信使RNA(Messenger RNA,mRNA)上存在众多修饰,包括N^(6)-甲基腺嘌呤修饰(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)、N1-甲基腺嘌呤修饰(N1-methyladenosine,m^(1)A)及胞嘧啶甲基化(5-methylcytosine,m^(5)C)等.其中,m^(6)A是mRNA内部修饰碱基中占比最高的一种,影响着mRNA的5′和3′端加工、在细胞中的定位、降解和翻译等过程,并在转录后调控基因表达水平,以此参与胞内的多种生理活动.本文综合评述了m^(6)A修饰的分子机制及其与多种疾病的关系,概述了m^(6)A鉴定技术的发展历程,重点讨论了m^(6)A化学干预的最新研究进展,以期让读者全面了解m^(6)A修饰,并为后续开发针对m^(6)A修饰的小分子药物提供参考.

液相色谱-串联质谱法测定豆芽中6 -苄基腺嘌呤 残留量的不确定度

评定液相色谱-串联质谱法检测豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的不确定度,建立不确定度数学评估模型。通过对测量过程中的不确定来源进行分析,计算出不确定度分量、相对合成不确定度,得出不确定度报告。结果表明,影响测定结果不确定度的主要因素有标准溶液的配制和拟合标准曲线求得样品浓度,以及前处理及标准品储备液、混合标准中间液的配置,还有仪器本身带来的不确定度。在实际检测过程中,控制标准溶液的配置过程,增加标准曲线的测定次数,对仪器进行定期校准,提高仪器的稳定性和灵敏度,使检测结果更加可靠。

豆芽中6-苄基腺嘌呤残留的膳食风险评估

近年来,我国相关监管部门、专业人士及社会舆论对豆芽中6-苄基腺嘌呤（6-BA）残留是否会给消费者带来膳食健康风险出现了很大争议,但一直未见有系统的风险评估研究报告。为明确豆芽中6-BA残留的膳食暴露风险,在充分收集市场豆芽残留监测数据和中国裁判文书中豆芽残留数据的基础上,采用点评估方法评估了我国不同人群的6-BA膳食暴露风险。评估结果显示：近年我国各类人群的6-BA膳食暴露（情景Ⅰ）风险商（RQ）平均值为0.001,97.5百分位点值为0.001~0.003;在豆芽制发中普遍使用6-BA的情况下（情景Ⅱ）,其风险商平均值为0.001~0.003,97.5百分位点值为0.003~0.006;在极端高残留假设下（情景Ⅲ）的风险商平均值为0.011~0.025,97.5百分位点值为0.025~0.055;在果蔬中普遍残留假设下（情景Ⅳ）的风险商平均值为0.007~0.020,97.5百分位点值为0.012~0.031。可见,豆芽中6-BA的膳食暴露风险非常低,远未达到健康关注水平。6-BA在豆芽生产中规范使用具有技术必要性和高安全性,建议重新允许使用,同时制定其使用规范和残留限量要求,建议其残留限量（MRL）值可设为0.2 mg/kg。

微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬菜中6-苄基腺嘌呤

1引言 6．苄基腺嘌呤（N^6-Benzylaminopurine，6-BA）作为植物生长激素，不仅在植物栽培方面广泛应用，也可用于蔬菜、水果的防腐保鲜，市售蔬菜、水果中可能有少量残留。人体摄取过量6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐的现象，因此GB2760—1996规定了食品中6-BA最高残留量为0．2mg／kg。

萘乙酸和6-苄基腺嘌呤对甘薯离体器官发生的影响

以重庆市主栽和自育的甘薯优良品种为试材 ,比较了植物生长调节物质萘乙酸 (NAA)和 6苄基腺嘌呤 (BA)对甘薯离体器官发生的影响 .试验结果表明 :(1)NAA能明显地促进不定根和不定芽的分化 .当培养基中添加1 0mg/LNAA时效果最好 ,3种外植体不定根、不定芽的分化频率以及根的分化量都达最大值 ,其中茎段分别为96 2 % ,6 5 4% ,4 1.(2 )BA对甘薯外植体的离体器官发生有一定的影响 ,高浓度的BA明显抑制外植体不定根和不定芽的分化 .(3)茎段为诱导不定根和不定芽的最适外植体 .

6-苄基腺嘌呤和激动素对香石竹切花衰老的生理效应

6-苄基腺嘌呤(6-BA)和激动素(KT)均能改善香石竹切花体内的水分平衡,增加切花的鲜重,增大花径,提高过氧化物酶(POD)活性,延缓可溶性蛋白质含量下降以及丙二醛(MDA)含量和O·_2^-生成速率的增加,延长切花瓶插寿命2～3d。