邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对雄性幼鼠生精细胞凋亡的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对雄性幼鼠生精细胞凋亡有否影响。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠98只,随机分为14组,7只/组。随机选择1组行生理盐水(0.9%NS 0.2 ml.kg-.1d-1)灌胃喂养3周,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺(CTX 100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)、中剂量(200 mg·kg-1·d-1)、高剂量(300 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周;以及分别按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1、2、3周分组,建立动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精细胞的形态学变化,并应用TUNEL法检查睾丸生精细胞凋亡情况,放射免疫法检测血清性激素(卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T)水平。结果(1)睾丸生精细胞的变化:用药组生精细胞萎缩、发育落后、数量少,线粒体肿胀、空泡化等;在喂养1周的不同剂量组内,随剂量增加生精细胞损害加重,在低剂量不同喂养时间组内,随喂养时间的延长生精细胞损害亦加重;(2)睾丸组织中生精细胞凋亡:与NC组比较,用药组生精细胞凋亡显著增多(P<0.01);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内生精细胞凋亡间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(3)血清性激素水平:与NC组比较,用药组FSH、LH水平升高,T水平下降(P<0.05);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内性激素水平间比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精细胞凋亡有明显影响,且呈时间-量效依赖效应。

果酒中邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯检测方法研究

邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯是使用最广泛的增塑剂邻苯二甲酸二-2-乙基己基酯在体内的主要代谢产物,对人体有一定的危害.建立了一种邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的气相色谱-质谱联用检测方法,并采用该方法对荔枝酒中邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯的含量进行了检测.

琥珀酸单-2-(吡啶-2-基)乙醇酯的合成与植物生长调节活性研究

丁二酸酐与2-乙醇吡啶经酯化反应,合成具有植物生长调节活性的新化合物琥珀酸单-2-(吡啶-2-基)乙醇酯。室内活性试验表明,其对玉米有促进生长的作用;进一步田间试验表明,其能够提高小麦产量、千粒重以及穗粒数,且对小麦安全,能够达到甚至略好于市售生长调节剂胺鲜酯(DA-6)的生长促进效果。该化合物合成方法简单,易于工业化生产。

酶法醇解合成2-花生四烯酸单甘酯

2-花生四烯酸单甘酯(2-AG)是一种内源性大麻素,在神经、心血管和免疫等系统中具有一系列的生理活性。为实现2-AG的绿色高效制备,探究了脂肪酶催化醇解富含花生四烯酸的微生物油制备2-AG的方法。以2-单甘酯(2-MAG)含量为指标,通过单因素实验对酶法催化醇解反应条件进行了优化,并采用溶剂萃取法对产物进行纯化。结果表明:最佳反应条件为以Lipozyme 435脂肪酶为醇解脂肪酶、酶添加量4%(以油质量计)、油与无水乙醇物质的量比1∶40、叔丁醇为溶剂、油溶比2∶3、反应温度35℃、反应时间8 h,在最佳条件下粗产物中2-MAG含量为33.63%;经溶剂萃取纯化后2-MAG的纯度达到了94.79%,其中2-AG含量为40.70%。综上,酶法醇解富含花生四烯酸的微生物油可以获得高2-AG含量的2-MAG。

m6A甲基化对邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导小鼠睾丸间质细胞自噬的作用

目的 探讨邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]致小鼠睾丸间质(TM-3)细胞自噬中m6A甲基化的作用。方法 将对数生长期的TM-3细胞暴露于浓度梯度(0、5、10、20、40、80μmol·L^(-1))的m6A甲基化抑制剂3-脱氮腺苷(3-Deazaadenosine,DAA)24 h,CCK-8法检测细胞活力,确定3-脱氮腺苷的染毒剂量后,梯度稀释为对照组(0μmol·L^(-1))、MEHP低剂量组(200μmol·L^(-1))、MEHP中剂量组(400μmol·L^(-1))、MEHP高剂量组(800μmol·L^(-1)),将TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L^(-1)MEHP,40μmol·L^(-1)DAA+400μmol·L^(-1)MEHP和40μmol·L^(-1)DAA染毒组24 h,光镜下观察TM-3细胞形态。CCK-8法检测细胞存活率;m6A RNA甲基化定量检测试剂盒检测m6A修饰水平;丹酰尸胺(MDC)荧光染色检测自噬形成情况;Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达水平。结果 与对照组相比,DAA浓度为5、10、20、40μmol·L^(-1)时,细胞活力均无明显变化(P均>0.05);DAA浓度为80μmol·L^(-1)时,细胞活力下降(P<0.01);各MEHP染毒组TM-3细胞活力和m6A甲基化水平均降低(P均<0.01),细胞空隙变大,圆形细胞增多,贴壁细胞的数量明显减少;DAA组m6A甲基化水平较对照组降低(P<0.01);与MEHP中剂量组相比,DAA+MEHP组细胞活力和m6A甲基化水平均下降(P均<0.01),细胞发生皱缩,细胞间隔稍有增大。与对照组相比,各MEHP染毒组、DAA+MEHP组和DAA处理组LC3-Ⅱ的蛋白表达水平均升高(P均<0.05),MEHP低剂量组MDC荧光信号强度、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达量均无明显变化(P均>0.05);MEHP中、高剂量组和DAA+MEHP组荧光强度、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达量均升高(P均<0.01);DAA组荧光强度和Beclin-1的表达水平均升高(P均<0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ无明显变化(P均>0.05)。DAA+MEHP组荧光强度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ较MEHP中剂量组呈上升趋势(P<0.05)。结论 MEHP可能通过降低RNA甲基化m6A修饰的水平来诱导TM-3细胞发生自噬。

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对幼鼠生精上皮的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯（Di-2-ethyhhexyl phthalate，DEHP）及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯（single-ethylhexylphthalate，MEHP）对幼鼠生精上皮有否损害。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只，随机分8组，每组12只。随机选择1组行生理盐水（0．2ml·kg-1·d-1，喂养3周）灌胃，作为正常对照组（NC组）；再选1组行环磷酰胺（CTX100mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃，作为阳性对照组（PC组）；余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量（100mg·kg-1·d-1，喂养3周）、中剂量（200mg·kg-1·d-1，喂养2周）、高剂量（300mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精上皮的变化，并应用TUNEL法检查生精上皮凋亡，免疫组织化学法检测睾丸组织中c-kit、P13K的表达，放射免疫法检测血清性激素（卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T）水平。结果睾丸生精上皮的变化：用药组生精上皮萎缩、发育落后，数量少、线粒体肿胀、空泡化等，但在用药的高剂量组短时间内损害与低剂量组长时间的损害一致；①睾丸组织中生精上皮凋亡：与NC组（凋亡指数AI：0．015±0．002）比较，用药组生精上皮凋亡（DEHP和MEHP组的A1分别为：0．051±0．004、0．073±0．005）显著增多（P〈O．01），但在高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；②睾丸组织中c-kit、P13K的表达：与NC组（c—kit：0．389±0．014、P13K：0．457±0．011）比较，用药组睾丸组织中c-kit（DEHP和MEHP组分别为：0．185±0．018、0．165±0．014）及其下游信号分子P13K（DEHP和MEHP组分别为：0．205±0．019、0．189±0．017）的表达显著减少（P〈0．01），但高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异也无统计学意义（P〉0．05）。血清性激素水平：与NC组比较，用药组FSH、LH水平升高，T水平下降（P〈0．05）；但用药的高剂量组与低剂量组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精上皮有明显损害，推测可能对小儿的生精功能也有损害，小儿应避免过多的长期接触含DEHP及代谢产物MEHP的物质。

邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导人卵巢颗粒细胞系KGN细胞铁死亡的作用研究

目的研究邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)是否诱导人卵巢颗粒细胞系KGN细胞铁死亡并影响其增殖。方法取对数增长期的人卵巢颗粒细胞系KGN细胞,给予不同浓度(0、100、200、400、800、1600μmol/L)MEHP处理24 h。通过普通光镜观察不同浓度MEHP处理后KGN细胞形态的改变;用CCK-8检测MEHP对细胞活力和增殖能力的影响;采用蛋白免疫印迹(WB)观察铁死亡相关蛋白(ACSL4、GPX4、SLC7A11、FTH1)在KGN细胞中的表达情况;使用细胞铁含量检测试剂盒、丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)及超氧化物阴离子荧光探针(DHE)分别检测对照组和400μmol/L MEHP处理组细胞的铁含量、MDA、ROS和超氧化物阴离子水平。结果(1)光镜观察显示,400μmol/L及以上MEHP处理使KGN细胞皱缩变圆,形态异常。(2)CCK-8结果显示400μmol/L及以上MEHP处理抑制细胞增殖,且具有剂量依赖性(P<0.05)。(3)100、200μmol/L MEHP处理组KGN细胞铁死亡相关蛋白表达无显著改变(P>0.05);400μmol/L MEHP处理组KGN中ACSL4蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而GPX4、SLC7A11、FTH1蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。(4)400μmol/L MEHP处理使得KGN细胞的铁含量、MDA水平显著上升(P<0.05),细胞ROS、超氧化物阴离子荧光染色强度明显增加。结论MEHP诱导KGN细胞铁死亡,抑制细胞增殖能力,但MEHP诱导铁死亡的具体作用机制还需进一步探讨。

单2-O-和单6-O-(2-羟丙基)-β-环糊精结构表征

以β-环糊精和环氧丙烷为原料,分别在1.5%、30%(m/m)NaOH水溶液和β-环糊精与环氧丙烷的摩尔比为1∶7的条件下合成了2-O-(2-羟丙基)-β-环糊精和6-O-(2-羟丙基)-β-环糊精,以异丙醇-水-氨水(6∶3∶1,V/V)为洗脱液,分别经柱色谱分离得到单2-O-(2-羟丙基)-β-环糊精和单6-O-(2-羟丙基)-β-环糊精,并利用DSC,ESI-MS,1HNMR,13C NMR对单2-O-(2-羟丙基)-β-环糊精、单6-O-(2-羟丙基)-β-环糊精的结构进行了系统研究。结果发现,2-O-(2-羟丙基)-β-环糊精的热稳定性要高于6-O-(2-羟丙基)-β-环糊精。13C NMR结果表明,当β-环糊精2-位上引入取代基后,会影响2-位、1-位、3-位碳化学位移的变化,当β-环糊精6-位上引入取代基后,会影响6-位、5-位碳化学位移的变化,因此,可以用13C NMR方法有效地识别2-HP-β-CD取代基的位置。

邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯对MCF-7细胞DNA的氧化损伤

目的:研究邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono-2-ethylexyl phthalate,MEHP)对人乳腺癌MCF-7细胞DNA氧化损伤的作用。方法:分别用不同浓度的MEHP(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)和二甲基亚砜(溶剂对照,<0.1%)处理MCF-7细胞12和24 h后用MTT比色法检测细胞的存活率。再分别于染毒后1.5、3、6、12和24 h,测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)水平。结果:与对照组比较,MEHP染毒12 h,6.25和12.5μmol/L组细胞的存活率显著增加(P<0.05)。MEHP染毒24 h,在较高浓度处理组(≥25μmol/L)的细胞存活率显著降低(P<0.05);各处理组细胞的SOD活性有所增加,细胞MDA水平、GSH-Px活性以及8-OHdG生成量无显著变化(P>0.05)。当MEHP染毒MCF-7细胞较短时间(1.5、3和6 h)时,各处理组MDA水平和8-OHdG生成量均显著升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性则显著性降低(P<0.05)。结论:一定浓度MEHP作用在短时间内(1.5、3和6 h)可引起MCF-7细胞的氧化应激反应,并触发细胞DNA的氧化性损伤,具体调控机制有待深入研究。

单羧酸转运体-2在大鼠脑组织的定位

目的：观察单羧酸转运体-2（MCT2）阳性细胞在大鼠脑内的分布和形态特征。方法：尼氏染色，免疫组织化学和免疫荧光等。结果：MCT2在嗅球、端脑、间脑、小脑及脑干均有表达，主要定位于神经元的胞体和突起上；在嗅球、端脑和间脑，其表达广泛、分布均匀。在脑干，除了一般内脏运动核、内脏感觉核以外的其他躯体运动核和感觉核以及蓝斑核、下橄榄核、中缝核、巨细胞网状核、中间网状核、外侧网状核等非脑神经核团中的神经元有MCT2的表达。另外，在小脑髓质的小脑外侧核、小脑间位核、小脑内侧核也可见MCT2阳性神经元。MCT2阳性神经元的形态，在不同区域间存在差异。结论：MCT2阳性神经元在大脑皮质、海马、下丘脑、网状结构及神经核团等特殊区域分布，提示在生理条件下，MCT2在维持某些基本的生命活动中具有特殊的重要的作用。

慢性炎性痛大鼠脊髓背角单羧酸转运蛋白-2表达的变化

目的：在大鼠慢性炎性痛模型上,观察大鼠脊髓背角单羧酸转运蛋白-2（MCT-2）表达的变化。方法：健康雄性SD大鼠96只,体重180-220 g,采用随机数字表法将其随机分为2组（n=48）：生理盐水组（NS组）和完全性弗氏佐剂组（CFA组）。CFA组左侧后足足底中部皮下注射完全性弗氏佐剂（CFA）100μl;NS组注射等量的生理盐水。在注射前（T0）及注射后3 h（T1）、第1天（T2）、3天（T3）、5天（T4）、7天（T5）、14天（T6）和第21天（T7）测定大鼠机械缩足反应阈值（MWT）和热缩足反应潜伏期（TWL）,并于上述各时间点分别随机取4只大鼠,处死后取脊髓背角,采用Western blot法测定MCT-2表达的变化。结果：CFA组大鼠在注射CFA后3 h即出现痛觉过敏,并持续至第14天,其疼痛程度显著大于NS组（P〈0.05）;且T1-6时脊髓背角MCT-2与NS组相比显著增加（P〈0.05）。大鼠脊髓背角MCT-2的表达与MWT和TWL相关（P〈0.05,P〈0.01）。结论：慢性炎性痛大鼠脊髓MCT-2表达上调,该变化可能参与慢性炎性痛中枢敏化的形成和维持。

哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌的筛选与鉴定

经选择性富集、分离得到4株可以选择性转化(R,S)-哌嗪-2-甲酰胺产生(S)-哌嗪-2-羧酸单一对映体的菌株和1株可以选择性转化(R,S)-哌嗪-2-甲酰胺产生(R)-哌嗪-2-羧酸单一对映体的菌株。通过基于16SrD-NA序列分析的系统发育分析和形态培养特征观察、生理生化特征分析对试验菌株进行鉴定,结果表明:菌株412和437分别属于鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)和琼氏不动杆菌(Acinetobacterjunii),菌株211和610属于短波单胞菌属(Brevundimonas)、菌株416属于假单胞菌属(Pseudomonas)。

聚己二酸单(2-羧苯酚)酯的合成和表征

以己二酸酐和邻羟基苯甲酸为原料,制备了己二酸单(2-羧苯酚)酯,并以它为单体聚合得到了相应的聚酯酸酐.研究了温度、真空度对聚合物分子量的影响,得到了最佳的聚合条件:真空度66.66 Pa,聚合温度200℃.在此条件下聚合2.5 h,得到的聚己二酸单(2-羧苯酚)酯重均分子量达6 498.另外,还对聚合物在不同pH值条件下的体外降解行为进行了研究.

单(2-羟乙基)铵甲酸盐离子液体用于乙醇水溶液萃取精馏的过程模拟

利用Aspen Plus模拟软件,模拟研究了由乙醇质量分数为95%的工业酒精通过常压萃取精馏制取无水乙醇的工艺过程,并对单(2-羟乙基)铵甲酸盐离子液体和乙二醇传统萃取剂的分离性能进行了比较分析。考察了原料和萃取剂的进料位置、萃取剂用量、回流比等参数对分离效果的影响,获得了优化的操作条件,即精馏塔塔板数28,原料进料板为第17块,萃取剂进料板为第2块,溶剂比为0.6,摩尔回流比为1.6。在优化操作条件下,塔顶产品中乙醇的质量分数可达99.98%,与乙二醇为萃取剂的传统萃取精馏过程相比,再沸器热负荷降低28%,具有明显的节能效果。

γ射线诱导人卵巢癌细胞G2-染色单体断裂与修复

应用早熟染色体凝集技术研究了γ-射线诱导人卵巢癌细胞G2-染色单体断裂畸变的剂量效应与畸变修复的时间效应。结果表明:G2-染色单体型断裂畸变(chromatid-type breaks)与辐射剂量呈线性关系;G2-等点染色单体型断裂畸变(iso-chromatid breaks)与辐射剂量呈线性平方关系。2Gyγ-射线诱导的G2染色单体断裂畸变随着孵育时间的延长发生了明显的连接即修复,对G2-染色单体型断裂畸变,有近65％的断裂在辐射后24h内得以修复;对G2-等点染色单体型断裂,在辐射后24h内只有20％左右得以修复,两类断裂畸变的修复主要发生在辐射后2h内,在辐射后12-24h内染色体断裂量趋于稳定,表明修复基本完成。

无溶剂体系固定化脂肪酶催化合成1(2)-丙二醇月桂酸单酯

在无溶剂体系中,以固定化脂肪酶Novozyme 435催化1,2-丙二醇和月桂酸合成1(2)-丙二醇月桂酸单酯,对反应条件进行了优化。确定最优反应条件为:月桂酸和1,2-丙二醇摩尔比1∶1,温度60℃,摇床转速150 r/min,加酶量2%(以底物总质量计),反应时间8 h。在最优反应条件下,体系反应酯化率达到91.89%,1(2)-丙二醇月桂酸单酯纯度达到79.22%。

2-氯苯甲醛单缩二氨基硫脲配合物的电化学合成

Ti(Ⅳ),Ni(Ⅱ),Cu(Ⅰ) complexes bearing mono(2-chlorobenzaldehyde)-thiosemicarbazone(HL) were synthesized in non-aqueous solvent containing ligand(HL) by the electrochemical oxidation of anodic metal with Ti,Ni and Cu,respectively.The complexes were characterized by elemental analysis,IR,UV,magnetic susceptibility and molar conductivity etc.

2株哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌的鉴定

通过对分离得到的哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌的鉴定,从分类学上为筛选得到生物安全性高的生产菌株提供指导。通过形态培养特征观察、生理生化特征鉴定和基于16SrDNA序列分析的系统发育分析对实验菌株进行鉴定。结果表明2株哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌,均为G-杆菌,通过16SrDNA序列同源性比较及系统发育分析,菌株210属于短波单胞菌属(Brevundimonas)、菌株418属于假单胞菌属(Pseudomonas)。菌株210、418的生理生化特征与其系统发育关系最近的种存在差异。通过将目的菌株的系统发育分析结果和形态生理结果与相关已知菌的比较,菌株210、418生物安全性较高,具有应用于工业生产的潜力。

2,2-二甲基丙二酸单甲酯的合成

以新戊二醇为原料,经氧化、酯化、水解反应制备出目标化合物,产率61.2%。考察了硝化反应时间、硝酸浓度、催化剂用量、氢氧化钠质量分数和用量对反应收率的影响。适宜的反应条件为:氧化反应保温时间6h,硝酸质量分数68%,m(SOCl_2)∶m(2,2-二甲基丙二酸)=0.07∶1,n(NaOH)∶n(2,2-二甲基丙二酸)=1∶1,氢氧化钠质量分数10%。

金属离子对2-乙基已基膦酸单(2-乙基已基)酯钠盐的微乳体系水增溶的影响

测算了由 2 乙基已基膦酸单 ( 2 乙基已基 )酯钠盐、正辛醇、正辛烷和水形成的W/O微乳液体系中 ,金属盐 (Mg2 + 、Ni2 + 、Co2 + 、Zn2 + 、Cr3+ 等 )水溶液的最大增溶分数 φ′H2 O。用金属萃取络合物的结构和亲油性解释了金属离子对 φ′H2 O的影响。