基于生态位模型的南、北五味子潜在适生区预测及其影响因子研究

基于184条南五味子(Schisandra sphenanthera)地理分布记录、129条北五味子(Schisandra chinensis)地理分布记录以及23个环境因子数据,采用MaxEnt生态位模型预测南、北五味子潜在适宜分布区,评估了制约其地理分布的主要环境因子。结果表明,北五味子和南五味子MaxEnt模型训练集和验证集曲线下面积(AUC)均大于0.90,建立的模型预测结果准确。北五味子最佳生境主要分布在辽宁省和吉林省的长白山区域以及北京市;南五味子的最佳生境主要分布在秦巴山区内,以及湖南省武陵山脉,郴州市、株洲市和衡阳市,浙江省金华市等地区。限制北五味子生长的重要环境因子变量分别是最湿月份降水量、最热月份最高温度、土壤酸碱度、最暖季平均降水量、最冷季平均降水量和昼夜温差月均值;限制南五味子分布的环境因子变量分别是最冷月份最低温温度、年平均降水量、温度变化方差和降水量变化方差。南、北五味子的潜在适生区呈区域化分布。

基于《德国药品法典》要求的南五味子质量控制方法研究

目的:依据《德国药品法典》(Deutscher Arzneimittel-Codex,DAC)的相关规定,建立符合DAC要求的南五味子薄层色谱鉴别方法和含量测定方法,并比较DAC与《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2020年版对以上2项内容规定的异同点。方法:采用硅胶GF254薄层色谱板,以乙酸-乙酸乙酯-甲苯(1∶18∶46)为展开剂,以五味子乙素和五味子醇乙为系统适应性测试(SST)指标,以五味子酯甲和五味子甲素为检测指标建立了南五味子的薄层色谱鉴别方法。以HALO Biphenyl色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速为0.8 mL·min^(-1),柱温为35℃,以五味子酯甲和五味子酯乙的分离度为SST评价指标考察方法的可行性,建立了南五味子药材中五味子酯甲和五味子甲素的高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法。结果:按照DAC相关要求进行了SST考察,结果显示,建立的薄层色谱鉴别方法具有良好的分离能力,可满足南五味子药材薄层色谱鉴别的要求;HPLC测定结果中五味子酯甲和五味子酯乙的分离度均大于3.5,符合SST要求,可用于南五味子含量测定;方法学考察结果均符合含量测定要求;31批五味子药材中五味子酯甲和五味子甲素的质量分数分别为0~0.7611%和0.0109%~0.7909%,且2个成分含量呈正相关。结论:建立的南五味子薄层色谱鉴别方法和HPLC含量测定方法均符合DAC要求,且操作简便、结果准确、重复性好,可用于南五味子的质量控制;在药材的薄层色谱鉴别及含量测定方法方面,DAC与《中国药典》2020年版大致相同,但在SST方面存在差异,应加以重视。

南五味子加工与储藏工艺的研究

目的优选南五味子饮片加工与储藏工艺,建立相应技术标准操作规程。方法以晒干、醋制、酒制、蜜制、蒸制等加工方式制备5种南五味子饮片,测定主要成分以优选加工方式。以外观性状和五味子酯甲为评价标准,用正交实验法优选醋南五味子的加工炮制方法。对2种储藏环境和五味子中活性成分的含量进行相关性分析。结果主要成分分析发现,醋南五味子的总糖、总酸、粗蛋白、粗脂肪、五味子甲素、五味子酯甲较生南五味子(干制)、酒南五味子、蜜南五味子、蒸南五味子均高。正交试验结果显示,醋南五味子的最佳炮制工艺为取适量南五味子,加入20%的米醋,拌匀后闷润1 h至透心,蒸制7 h后取出,置于60℃下干燥。五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲、五味子醇甲及总木质素的含量与阴凉库、常温库环境有显著相关性(P<0.01),即在阴凉环境下上述5种成分的含量高于常温环境。结论优选的醋南五味子加工与储藏工艺稳定可行,为醋南五味子的产业化生产提供技术支持。

南五味子药材UPLC指纹图谱及一测多评法研究

建立南五味子药材超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和6种木脂素类成分一测多评法(QAMS),为南五味子药材质量标准提高提供参考。采用UPLC法建立南五味子药材指纹图谱,运用聚类分析(HCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱进行分析;以五味子酯甲为内参物,建立五味子酯丙、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素和五味子酯丁的一测多评法,并与外标法(ESM)测定结果对比,判断方法的准确性。14批南五味子药材指纹图谱确定了15个共有峰,通过对照品比对指认了其中7个成分,分别为原儿茶酸、五味子酯丙、五味子酯甲、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素、五味子酯丁,其指纹图谱相似度均在0.95以上;通过聚类分析(HCA)和正交偏最小二乘法-判别式分析(OPLS-DA)可以将南五味子药材分为4类,峰1(原儿茶酸)、峰2、峰4、峰6、峰7(五味子酯乙)、峰8、峰9、峰12、峰15共9个成分是导致产地差异性的主要标志物。一测多评法与外标法测定的五味子酯丙、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素和五味子酯丁含量结果无显著差异。所建立的方法简便、可靠,为南五味子药材质量评价提供参考。

南五味子果酒工艺优化及品质分析

以酒精度为指标,采用单因素试验和正交试验确定南五味子果酒最佳发酵工艺,并进行品质分析。结果表明,南五味子果酒最佳发酵工艺为发酵温度32℃,发酵时间8 d,初始糖度26%,菌种接种量1.2%。在此条件下发酵出来的南五味子果酒酒精度为8°,还原糖质量浓度为23 mg/mL,感官评价良好。

南北五味子及其制剂肝复康丸主要指标成分差异研究

目的建立五味子的质量控制方法,评价南北五味子及其制剂肝复康丸的质量。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Poroshell 120 EC-C_(18)柱,以流动相A(21%四氢呋喃)与流动相B(乙腈)实施梯度洗脱(0~15 min时90%A→81%A,15~40 min时81%A→68%A,40~60 min时68%A→30%A,60~61 min时30%A→90%A,61~70 min时90%A),流速为0.6 mL/min,柱温为30℃,检测波长为238 nm和288 nm。结果五味子醇甲、五味子乙素、五味子甲素、五味子酯甲、安五脂素的质量浓度分别在0.2018~201.8μg/mL、0.03201~32.01μg/mL、1.139~113.9μg/mL、1.244~124.4μg/mL、1.326~132.6μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。其中,北五味子中的五味子醇甲、五味子甲素含量较高,而南五味子中的五味子酯甲、五味脂甲素、安五子素含量较高,不同厂家的肝复康丸中五味子来源不一致。结论该方法准确、可靠,可用于南北五味子及其制剂肝复康丸的质量评价。

二色五味子与南、北五味子抗炎活性比较研究

目的:比较二色五味子与南、北五味子的抗炎活性,探讨二色五味子作为中药五味子候补资源的可行性。方法:通过角叉菜胶致小鼠足肿胀实验、二甲苯致小鼠耳肿胀实验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验探究三种五味子的抗炎活性。结果:在三种急性小鼠炎症模型中,三种五味子均可减轻小鼠的足肿胀及耳肿胀度,降低腹腔毛细血管通透性增加及炎症部位肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平。超高效液相色谱(UPLC)分析显示,南、北及二色五味子醇提物均含有五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素。结论:二色五味子与南、北五味子均具有抗炎作用,且二色五味子与南五味子抗炎活性相似。

野生果树南五味子特征特性及驯化栽培技术

南五味子(Schisandrachinensis)是一种具有显著医疗和经济价值的野生果树。随着其药用价值的日益被认可,南五味子的人工驯化和栽培技术也受到了广泛关注。本文详细介绍了南五味子的植物学和生物学特性,分析了其物候期特征,并详尽探讨了其驯化栽培的关键技术,包括选址建园、栽种方法、搭建、土地管理、整形修剪、授粉技术、疏果、病虫害管理以及采收技巧。本研究的目的在于为南五味子的商业栽培提供技术指导和理论支持,推动其产业的可持续发展。

南五味子属叶绿体基因组密码子偏好性分析

为探究南五味子属植物叶绿体基因组密码子的使用偏好性及影响因素,利用Codon W 1.4.2、CUSP及EMBOSS等程序,进行中性绘图、ENC-plot及PR2-plot绘图分析。结果表明,南五味子属4个物种的叶绿体基因组密码子总体偏性较弱,只有rps14的ENC值小于40;物种间的密码子参数高度保守,GC_(2)对ENC影响较大;有31个密码子RSCU大于1,均以A/U结尾;自然选择在4个物种叶绿体基因组同义密码子使用偏性中发挥主导作用;南五味子属4个物种中分别确定了18、17、16和18个最优密码子,共有的最优密码子有14个;在ΔR_(SCU)>0.5的高频密码子中,仅有编码半胱氨酸(Cys)的UGU为共有最优密码子。表明南五味子属4个物种间密码子偏好性较保守,自然选择是影响密码子偏好性的主要因素。研究结果为南五味子属物种鉴定、保护和遗传改良提供了基础。

南五味子多糖对体外培养巨噬细胞吞噬功能与IL-12表达的影响

目的研究南五味子多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响及对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制。方法依照中药多糖的提取方法从南五味子中提取粗多糖,从小鼠腹腔分离提取巨噬细胞并培养。采用CCK-8法考察50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、600μg/mL南五味子多糖对巨噬细胞增殖影响;设置空白组、南五味子多糖50μg/mL组、南五味子多糖150μg/mL组、南五味子多糖250μg/mL组,每组巨噬细胞给予相应干预48 h后,显微镜下观察活细胞的形态、墨汁和金黄色葡萄球菌吞噬情况,细胞酶化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的阳性表达情况;设置空白组、南五味子多糖50μg/mL组、南五味子多糖100μg/mL组、南五味子多糖150μg/mL组,每组巨噬细胞给予相应干预48 h后,免疫组化法检测巨噬细胞中白细胞介素-12(IL-12)阳性表达情况。结果南五味子多糖浓度在50~200μg/mL时,巨噬细胞增殖活性递增性高于空白组(P均<0.05),但南五味子多糖浓度超过200μg/mL时,巨噬细胞的增殖活性逐渐减弱,浓度为600μg/mL时,巨噬细胞活性被抑制。与空白组比较,南五味子多糖50μg/mL组和南五味子多糖150μg/mL组巨噬细胞的体积明显增大,巨噬细胞吞噬墨汁阳性面积百分率、酸性磷酸酶阳性面积占比均显著增高(P均<0.05),吞噬金黄色葡萄球菌吸光度值均明显降低(P均<0.05);而南五味子多糖250μg/mL组巨噬细胞的体积形态无显著变化,巨噬细胞吞噬墨汁阳性面积百分率和吞噬金黄色葡萄球菌吸光度值、酸性磷酸酶阳性面积占比与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);南五味子多糖各组IL-12表达半定量面积均明显高于空白组(P均<0.05)。结论南五味子多糖在50~150μg/mL浓度范围内可激活巨噬细胞,增强巨噬细胞的吞噬功能和分泌IL-12的功能,发挥免疫促进作用,但浓度在250μg/mL时出现免疫抑制作用。

体外探针法评价五味子和南五味子提取物对人肝微粒体CYP3A4酶活性的影响

目的 通过体外药物探针实验探讨五味子和南五味子提取物和主要木脂素成分对细胞色素P450 3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)酶活性的影响。方法 选取睾酮为药物探针,以对乙酰氨基酚为内标,建立高效液相色谱-串联质谱法检测人肝微粒体中代谢物6β-羟基睾酮含量方法。结果 6β-羟基睾酮的线性范围为15.0~960μg/L,相关系数为0.999 9;相对回收率为102.1%~105.7%,其相对标准偏差均小于11%。五味子和南五味子醇提物和水提物对CYP3A4酶活性均有抑制作用,五味子醇提物和水提物的抑制能力强于南五味子,此外二者的醇提物的抑制程度强于其水提物。木脂素类成分对CYP3A4酶活性的抑制作用强弱程度依次为:五味子酯甲、五味子乙素、五味子甲素、五味子醇甲。结论 五味子和南五味子提取物对CYP3A4酶活性的抑制作用差异较显著(P<0.05)。临床上二者混用现象偶见发生,如果与CYP3A4酶代谢特异性高的药物联合使用时,可能会因为代谢性的相互作用引起一些不良后果。

基于HPLC-DAD法对护肝片中五味子掺伪情况研究

目的建立安五脂素的高效液相色谱-二极管阵列(HPLC-DAD)含量测定方法,以对护肝片中南五味子掺伪五味子的情况进行研究。方法采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70∶30),柱温30℃,流速1.0 mL/min,检测波长为280 nm,参比波长为360 nm,进样量为10μL。结果安五脂素在浓度在12.064~120.640μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.80%,RSD为1.07%。结论建立的安五脂素含量测定方法灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于护肝片中南五味子掺伪五味子的快速鉴别。

南北五味子多糖含量及成分比较

目的:比较南、北五味子果实多糖含量及组成成分的差异。方法:采用热水回流提取法提取南、北五味子多糖,减压浓缩,运用大孔树脂分离纯化得南北五味子总多糖。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,采用硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量。采用红外光谱、高效阴离子交换色谱法联用脉冲安培检测器HPAEC-PAD法初步表征南、北五味子多糖化学结构。结果:南五味子多糖出膏率为5.56%,北五味子多糖出膏率为10.6%。南五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质的含量分别为57.82%、29.1%和1.7%;北五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为67.07%、22.05%和0.7%。红外光谱表明南、北五味子多糖中均具有糖醛酸结构。结论:北五味子多糖提取率及总多糖、蛋白质含量高于南五味子,南五味子中糖醛酸含量高于北五味子;可根据化学成分的差异指导南、北五味子的临床使用。

南北五味子及醋制品UPLC特征图谱建立及区分研究

目的:建立南、北五味子UPLC特征图谱及薄层色谱(TLC)方法,为南、北五味子的区分鉴别及醋南五味子炮制评价提供参考。方法:根据南北五味子所含成分差异,采用薄层色谱(TLC)及超高效液相色谱(UPLC)等手段,对南、北五味子进行鉴别;同时对醋南五味子与南五味子炮制前后进行区分。结果:经TLC分析表明,北五味子中含五味子醇甲,南五味子中则不含;研究所建立UPLC特征图谱表明,五味子中含有五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素,南五味子中则不含;南五味子含有安五脂素,北五味子中则不含。南五味子醋制后5-羟甲基糠醛和原儿茶酸出现明显提升,可作为控制醋南五味子炮制程度及炮制前后的区分评价指标。结论:建立薄层色谱(TLC)及超高效液相(UPLC)特征图谱方法准确、简便、重现性良好,既可以作为南、北五味子区分鉴别,又可用于南五味子与醋南五味子的质量控制。

华中五味子高效栽培技术

华中五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.etWils.)为木兰科五味子属植物,以干燥成熟果实入药,称为南五味子,具收敛固涩,益气生津,补肾宁心功效,其作为一种集药用、食用、观赏为一体的木质藤本植物,具有良好的市场开发潜力。为推动华中五味子产业的健康生态发展,从播种育苗、栽培技术、田间作业及田间管理、病虫害防治等方面总结华中五味子的有性繁殖栽培技术。

基于UPLC特征图谱和多指标含量测定南五味子质量控制

目的:建立南五味子UPLC特征图谱方法,并同时测定不同产地药材中五味子甲素、安五脂素和五味子酯甲含量,为其质量控制及评价提供参考。方法:采用ACQUITY BEH C_(18)(150 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为280 nm,12 min切换至220 nm,柱温为35℃,流速为0.3 mL/min,测定不同产地的15批南五味子特征图谱及含量,运用聚类分析法比较不同产地、不同批次间南五味子质量差异。结果:确定15批南五味子UPLC特征图谱中10个共有特征峰,并指认了5‐羟甲基糠醛、原儿茶酸、五味子酯丙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酯丁、安五脂素和五味子甲素8个成分。五味子酯甲、安五脂素、五味子甲素的进样量分别在0.0085~1.5388μg、0.0246~3.1944μg、0.0216~2.7705μg范围内线性关系良好,加样回收率分别为99.42%、99.36%、98.37%;五味子甲素、安五脂素和五味子酯甲精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%。结论:所建立的方法准确、简便、重现性良好,可用于南五味子的质量控制,分析结果显示五味子酯甲含量在陕西省西安市周至县、山西省运城市平陆县产区含量较高,相较其他产区具备显著差异;安五脂素含量在陕西省安康市旬阳县,四川省绵阳市平武县产区含量较高,相较陕西西安周至县具备显著差异;五味子甲素含量在不同产区、相同产地不同批次间存在一定波动,各产区之间无显著差异。

南五味子药材的指纹图谱研究

目的:建立南五味子指纹图谱方法,为南五味子质量评价提供依据。方法:以五味子酯甲、五味子甲素、安五脂素作为南五味子测定的指标性成分,建立11批南五味子药材指纹图谱。结果:建立了高分离度与高色谱峰纯度的南五味子指纹图谱方法,11批南五味子样品指纹图谱的相似度均>0.970。结合试验前期的含量测定,确定样品为符合药典规定的正品南五味子(华中五味子)。结论:该研究建立的南五味子指纹图谱方法,在南五味子的品种鉴定及质量评价中具有相当高的品种识别率与质量判断力,可以快速判断出南五味子质量与品种真伪,进一步完善了南五味子质量评价方法。

南五味子根、茎、叶挥发油的GC-MS分析及抗氧化能力测定

目的:分析南五味子属南五味子根、茎、叶3个部位挥发油成分的差异,并测定其抗氧化能力。方法:用水蒸气蒸馏法提取南五味子根、茎、叶的挥发油,通过GC-MS对各部位挥发油的成分进行分析鉴定,以峰面积归一化法对各成分的相对质量分数进行计算。并以不同浓度的L-抗坏血酸为阳性对照,采用羟基自由基与DPPH法对根、茎、叶3个部位不同浓度的挥发油成分进行抗氧化能力分析。结果:(1)从南五味子3个部位中共鉴定出72种挥发油成分,根、茎、叶分别鉴定出49、46、40种,占挥发油总量的77.38%、78.57%、81.36%,其挥发性成分类型主要包括芳香族类、醛类、酯类、萜烯类、酮类、醇类和酚类等7类。(2)3个部位的挥发油均具有一定的抗氧化能力,在同一条件下,L-抗坏血酸对羟基自由基与DPPH的清除能力均强于南五味子根、茎、叶3个部位挥发油对羟基自由基与DPPH的清除能力。结论:南五味子根、茎、叶挥发油成分具有类型差异小、相对含量差异大的特点,同时具有一定的抗氧化能力。

南五味子多糖复合涂膜剂在火龙果保鲜中的应用研究

以商洛中药材南五味子为研究对象,提取南五味子多糖并进行抑菌效果研究,研制复合防腐保鲜涂膜剂并用于火龙果贮藏保鲜。采用超声波辅助酶法提取南五味子多糖得率为7.65%。以火龙果可溶性固形物含量、质量损失率为主要新鲜度指标,考察不同浓度南五味子多糖、壳聚糖、氯化钙及番茄红素对火龙果新鲜度的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对复合涂膜剂进行配方优化。结果表明,所提取的南五味子多糖对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌均有显著的抑制作用,且抑制效率最显著的是金黄色葡萄球菌。复合涂膜剂的最佳配比为:1.94%南五味子多糖、1.5%壳聚糖、1.37%氯化钙、0.002%番茄红素。该复合涂膜剂对火龙果有较好的保鲜效果,可有效延长保藏期。经验证优化结果可靠,以期为商洛南五味子多糖在果蔬保鲜与贮藏中的应用提供技术参考。

南、北五味子的红外光谱鉴别

对南五味子和北五味子药材的石油醚、乙醚和水的提取物进行红外光谱测定,结果南五味子和北五味子分别具有很好的光谱特征,根据其红外光谱可以准确地鉴别南、北五味子。