南极放线菌NJ-F2萃取物的抗菌活性初步研究

从南极第24次科学考察采集的海泥样品中分离获得放线菌NJ-F2,对NJ-F2发酵液的乙酸乙酯萃取物进行体外抗菌实验,并采用16S rDNA方法对NJ-F2进行系统发育分析。结果表明萃取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)分别为0.25 mg/mL,5.0 mg/mL;而对大肠杆菌和产气杆菌的MIC、MBC分别为0.5 mg/mL,5.0 mg/mL,但对真菌没有抗菌作用;16SrDNA分析结果表明NJ-F2为链霉菌属(Streptomyces sp.)。

南极放线菌N-1产抑菌成分的响应面优化

目的本研究旨在对南极放线菌N-1的发酵工艺进行优化,以提高发酵液中抑菌成分的活性。方法本实验以抑菌活性(琼脂扩散法)为指导,对该菌的碳源、氮源、无机盐等培养基组成进行单因素考察,以期得到显著性影响因素,然后利用Plackett-Burman试验设计,最陡爬坡设计以及Box-Behnken组合设计对显著性影响因素进一步进行优化。结果通过这些条件的优化,最终得到南极放线菌N-1的最佳发酵条件为小米12.68g/L、NaNO36.67g/L、MgSO4.7H2O 0.31g/L、FeSO4.7H2O 0.03g/L、黄豆粉7.50g/L,CaCO30.60g/L,NaCl 20g/L,pH=6.0,温度28℃,转速200r.min-1。与优化前相比,发酵液的活性提高了5.94倍;菌体湿重提高了1.55倍。结论利用响应面法(RSM)对南极放线菌N-1的发酵条件进行优化之后,提高了该菌的菌体密度的同时,更加提高了发酵液中抑菌活性物质的抑菌能力,为活性天然产物的发现奠定了较好的基础。

南极放线菌菌株N-1抗菌活性物质的初步研究及其菌种鉴定

对一株从南极海泥样品中分离出的放线菌菌株N-1分泌的抗菌活性物质进行初步研究,并对该菌进行菌种鉴定。通过纸片法对其发酵液进行体外抗菌活性研究;将其发酵液调至不同pH用不同极性的有机溶剂萃取,研究该活性物质的酸碱性和极性;将调至不同pH值的发酵液按不同时间温度梯度做加热处理,研究该活性物质的稳定性;并通过形态学观察、培养特征、生理生化特征及16S rDNA分析方法对其进行系统发育分析和菌种鉴定。结果表明该菌株发酵液对耐青霉素G、苯唑西林、四环素、莫西沙星、氯洁霉素、红霉素等抗生素的葡萄球菌、无乳链球菌等有明显抗菌作用,其抗菌活性物质在酸性条件下有良好的热稳定性,碱性条件下易于被氯仿等有机溶剂萃取;菌种鉴定数据表明该菌归属于生金链霉菌(5treptomyces aureofaciens)。研究确定南极放线菌菌株N-1为生金链霉菌,其代谢产生的抗菌活性物质稳定性好,大部分为极性中等的弱碱性化合物,对多重耐药菌有良好的抑制作用,有很好的研发价值。

应用薄层扫描光密度法检测南极放线菌N-1中的α-葡萄糖苷酶抑制剂的含量

以比色法(PNPG法)对10株海洋微生物经摇床的发酵液进行α-葡萄糖苷酶抑制活性检测,发现南极放线菌N-1的代谢产物对α-葡萄糖苷酶抑制活性最强。文章旨在建立稳定的南极放线菌N-1产α-葡萄糖苷酶抑制剂的分析方法,为α-葡萄糖苷酶抑制剂的含量测定和纯化做前期工作。以乙酸乙酯∶乙醇=27∶1为展开剂,将南极放线菌N-1的发酵液在GF254硅胶板上展开后,以紫外灯254 nm波长下显影观察得到两个组份,组份A的抑制率为10.03%,纯度达到81.6%,组份B的抑制率为2.91%,纯度达到71.32%,组份A可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的相对工作标准品。分别用高效液相和薄层扫描光密度法绘制其标准曲线,然后对已经分离纯化的成品进行纯度分析。用高效液相检测成品的含量是88%,薄层扫描光密度法测定成品的含量是91.6%,比较接近。结果表明薄层扫描光密度法可以作为检测α-葡萄糖苷酶抑制剂含量的一种新方法。

产抗生素南极海洋放线菌的筛选及培养条件优化

对32株南极海洋放线菌进行抑菌活性实验,筛选出3株具有一定抑菌活性的放线菌,分别命名为GD-F1、GD-F2和GD-F3,其中GD-F2的抑菌活性较高;探讨了碳源、氮源、pH值等条件对GD-F2产抗生素的影响,确定GD-F2产抗生素的最佳培养条件为:碳源为可溶性淀粉、氮源为大豆粉或酵母膏、用天然海水和蒸馏水各一半配制培养基、无机盐浓度为改良高氏一号培养基的一半、pH值为7.0,为南极海洋放线菌的机理研究和应用奠定了基础。

2株南极来源放线菌所产的二酮哌嗪类化合物研究

目的对从南极潮间带沉积物样品中分离得到的2株具有抗菌活性的放线菌进行分类鉴定并进行次生代谢产物研究。方法通过形态学分析及构建系统发育进化树鉴定菌株并对其发酵产物进行生物活性评价;利用硅胶、凝胶柱层析、semi-HPLC等色谱分离手段对2株菌的发酵产物进行分离纯化;采集所得化合物的质谱、NMR等数据并分析后鉴定其结构。结果 2株菌分别鉴定为Streptomyces sp.SCSIO 40061和Nocardiopsis sp.SCSIO KS107;从相应的发酵产物中分离得到2个二酮哌嗪类化合物,结构分别鉴定为:(3Z,6E)-1-N-甲基-3-苯亚甲基-6-(2-甲基-3-羟基丙烷)-2,5-二酮哌嗪(1)以及(3Z,6Z)-3-(4-对甲氧苯亚甲基)-6-(2-甲基丙烷)-2,5-二酮哌嗪(2)。结论发现了2株能产二酮哌嗪类化合物的南极来源放线菌。