南瓜蛋白对B16细胞的诱导分化作用

目的测定南瓜蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。方法以MTT法测定南瓜蛋白对B16细胞的增殖抑制作用,并以形态学、黑色素含量及细胞周期变化为指标,观察南瓜蛋白诱导B16细胞分化的作用。结果南瓜蛋白对B16细胞具有明显的增殖抑制作用,并阻止B16细胞由G1期向S期过渡从而停滞于G1期;细胞形态向正常上皮样细胞分化,生长缓慢,平铺不重叠,甚至形成网状结构,胞质内细胞器丰富,黑色素小体明显增多;黑色素含量增加。结论南瓜蛋白对B16细胞具有明显的诱导分化作用。

南瓜蛋白联合吉非替尼对人胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用

目的研究南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)联合表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib,GEF)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的生长抑制作用。方法采用SRB法测定CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞的增殖抑制作用;应用集落形成实验测定CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞集落形成的影响;以Western blot技术检测CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞EGFR的影响。结果 CUS联用GEF对BxPC-3细胞的增殖抑制率大于单用药物,q>0.85;CUS联用GEF对BxPC-3细胞的集落形成抑制率大于单用药物,q>1.15;CUS联合GEF干预BxPC-3细胞可明显下调其EGFR蛋白表达,q>2.0。结论 CUS联合GEF对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长抑制具有协同作用。

南瓜蛋白抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226 Notch信号表达

本研究探讨南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)在体外对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的分子机制。用Western blot法检测不同浓度CUS作用骨髓瘤细胞后Notch信号通路Notch1、Jagged-2、P-Akt和NF-kB的表达水平,结果显示,CUS可以下调骨髓瘤细胞中Notch1、Jagged-2和NF-kB蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和P-Akt的表达。结论:CUS对体外培养的RPMI8226细胞具有明显的增殖抑制作用,并且能明显下调Notch信号及其下游靶基因的表达水平,因此Notch信号通路可能作为多发性骨髓瘤治疗的新靶点,而CUS也可能成为潜在的调控Notch信号通路的新药之一。

南瓜蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的观察南瓜蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法观察南瓜蛋白对PANC-1细胞生长抑制情况;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)小鼠体内观察南瓜蛋白对胰腺原位移植瘤的抑瘤率;电镜观察南瓜蛋白作用后PANC-1细胞超微结构的改变;流式细胞仪定量检测其细胞周期和凋亡发生率的影响;ELISA法定量检测南瓜蛋白作用后PANC-1细胞Caspase-3活性变化。结果 0.125、0.25、0.5mg/kg的南瓜蛋白对小鼠移植瘤抑瘤率(%)分别为45.2、50.0、59.7(P<0.05)。南瓜蛋白10μg/mL作用PANC-1细胞24h,部分细胞开始凋亡,表现为核内染色质浓集,出现核碎裂,作用72h,凋亡细胞增多,表现为染色质聚集,部分核膜消失,凋亡小体出现;南瓜蛋白(0、2.5、10、40μg/mL)作用PANC-1细胞72h,流式细胞周期分析显示G0/G1期的比例(%)分别为46.56±5.08、53.33±5.05、67.50±6.50和77.00±6.73(P<0.05),annexin V/PI分析显示PANC-1细胞凋亡率(%)分别为2.50±0.13、8.30±1.23、23.40±2.45和48.50±3.65(P<0.05);Caspase-3活性分别为0.009±0.002、0.011±0.003、0.035±0.009和0.065±0.009酶活力单位(P<0.05),提示南瓜蛋白以浓度依赖性诱导PANC-1细胞凋亡;40μg/mL南瓜蛋白作用PANC-1细胞24、48、72h,G0/G1期的比例(%)分别为56.60±6.65、67.83±6.76和77.00±6.73(P<0.05),annexin V/PI分析显示PANC-1细胞凋亡率(%)分别为16.51±2.97、38.51±2.38和48.50±3.65(P<0.05),提示南瓜蛋白以时间依赖性诱导PANC-1细胞凋亡。结论南瓜蛋白对PANC-1细胞具有明显的抑制作用,诱导G0/G1周期阻滞和细胞凋亡可能是其主要机制。

南瓜蛋白抗人慢性髓系白血病细胞系K562的作用研究

本研究观察南瓜蛋白(Cucurmosin,CUS)在人慢性髓系白血病(CML)K562细胞-NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤和白血病模型体内抗肿瘤活性。采用建立K562-NOD/SCID小鼠皮下移植瘤和白血病模型,分别使用二种模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性。结果表明,给药剂量为0.5 mg/kg和1 mg/kg的CUS对人CML皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45%和59.43%;而剂量为0.25 mg/kg和0.5 mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别为39.8±5.5 d和43.4±6.6 d,抑瘤率分别为24.9%和36%。结论:CUS对小鼠体内人CML细胞系K562具有显著的抑制作用。

南瓜蛋白联合常用化疗药对NB4细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨南瓜蛋白(CUS)与全反式维甲酸(ATRA)或亚砷酸(ATO)联用对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响。以MTT比色法检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞凋亡的影响,用金氏公式判断两药联用的协同效果。结果表明,CUS与ATRA或ATO联合应用的抑制率均大于各药相应浓度单用的抑制率,其协同指数q值均>0.85,并且两药均在低浓度范围内联用的协同效果明显。CUS与ATRA或ATO联合应用时NB4细胞的凋亡率均大于各药相应浓度单用时的凋亡率,其协同指数q值均>1.15。结论:CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞增殖和诱导凋亡均有较好的协同作用。

南瓜蛋白对人胰腺癌细胞系PANC-1的细胞毒性及化疗增敏作用

目的观察南瓜蛋白(CUS)对人胰腺癌细胞系PANC-1的细胞毒性和化疗增敏作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察不同浓度(量效)的CUS及作用不同时间(时效)对胰腺癌细胞PANC-1的细胞毒性;采用Chou Talalay联合指数法判断CUS增加胰腺癌细胞对吉西他滨(GEM)的化疗敏感性。结果CUS对胰腺癌PANC-1细胞具有显著的增殖抑制作用,0.3125,0.625,1.25,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0μg/mL的CUS作用于胰腺癌细胞24 h,其抑制率分别为9.16%,11.9%,14.4%,20.2%,32.0%,36.4%,44.1%,50.3%和58.6%,呈现明显的剂量依赖性;随着作用时间的延长,其抑制率明显增加,24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为40.24,8.24,1.17μg/mL,呈现明显的时间依赖性。两药在不同效应时各自所需浓度之间相互作用均为协同作用(CI<1),单吉西他滨用于胰腺癌细胞的IC50为36.76 nmol/L,CUS与其合用时的IC50为12.14 nmol/L,合用比单用时吉西他滨的剂量减少67.0%。结论CUS对胰腺癌的细胞毒性作用呈明显的剂量依赖性和时间依赖性,与吉西他滨联合使用可增加其细胞毒作用,起到化疗增敏效应。

南瓜蛋白诱导人胰腺癌细胞凋亡的线粒体机制

目的 探讨南瓜蛋白（CUS）诱导人胰腺癌细胞（PANC）-1凋亡的线粒体机制.方法 0、2.5、10.0、40.0 mg/L的CUS处理胰腺癌PANC-1 72 h,荧光显微镜和流式细胞仪观察线粒体膜电位（△Ψm）的变化,Western blot检测胞质细胞色素C（Cyt-C）的含量变化和细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9（Caspase-9）和Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）蛋白的表达水平.结果 0、2.5、10.0、40.0 mg/L CUS处理PANC-1 72 h后,△Ψm逐渐下降,分别为167.23±8.27、123.56±7.26、83.25±5.36和40.45±5.87,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果显示线粒体Cyt-C释放到细胞质的量逐渐增加,灰度值分别为0.29±0.05、1.69±0.35、1.87±0.40、2.47±0.32（P＜0.05）;Caspase-9、Caspase-3和bax蛋白的表达逐渐增强,且其作用呈剂量依赖性（Caspase-9灰度值分别为0.15±0.03、0.19±0.05、0.49±0.09、0.89±0.08,P＜0.05;Caspase-3灰度值分别为0.88±0.08、1.81±0.19、2.36±0.38、2.92±0.24,P ＜0.05;bax灰度值分别为0.79±0.18、1.66±0.31、2.61±0.41、3.67±0.24,P＜0.05）;而bcl-2蛋白表达无明显变化（bcl-2灰度值分别为0.88±0.08、0.82±0.18、0.84±0.04、0.82±0.13,P＞0.05）.结论 线粒体途径在CUS诱导胰腺癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能是CUS通过激活促凋亡蛋白bax表达增加,降低△Ψm,促进线粒体Cyt-C的释放,从而激活Caspase系列酶,诱导胰腺癌细胞凋亡.

南瓜蛋白对人胰腺癌细胞CFPAC-1增殖抑制及诱导凋亡作用

目的探讨南瓜蛋白(CUS)体外对人胰腺癌细胞CFPAC-1的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法甲基噻唑基四唑法检测南瓜蛋白对CFPAC-1细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,蛋白质印迹法检测caspase-3及bcl-2蛋白表达水平。结果不同浓度(0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1及2μmol.L-1)南瓜蛋白作用不同时间(24、48及72 h)后,南瓜蛋白对胰腺癌细胞有增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。1μmol.L-1南瓜蛋白作用72 h后,电镜下可见明显凋亡改变,并可见凋亡小体。流式细胞仪结果示,与对照组相比,S期细胞减少,G0/G1期细胞增多,细胞由G0/G1期进入S期延缓;不同浓度(0、0.062 5、0.25及1μmol.L-1)南瓜蛋白作用72 h后细胞凋亡率分别为(0.33±0.37)%、(19.26±1.49)%、(37.13±2.07)%及(55.64±2.91)%。随着药物浓度的增高,caspase-3蛋白表达逐渐增强,bcl-2蛋白表达逐渐减弱。结论南瓜蛋白对人胰腺癌细胞CFPAC-1具有明显抑制作用;南瓜蛋白可能通过上调caspase-3及下调bcl-2蛋白表达诱导胰腺癌细胞凋亡。

南瓜蛋白诱导胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗增敏作用

核糖体失活蛋白（RIP）广泛存在于高等植物中，具有抗肿瘤、抗病毒和抗生育等多种生物学活性。南瓜蛋白（CUS）是本课题组从南瓜瓜瓤中提取的新的I型核糖体失活蛋白，相对分子质量约2．7×104，为碱性单肽链糖蛋白。本研究旨在探讨南瓜蛋白诱导胰腺癌细胞对吉西他滨化疗增敏作用的分子机制。

南瓜蛋白对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用

目的探讨南瓜蛋白体外对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用。方法 MTT法检测南瓜蛋白对SW1990细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡表现,流式细胞仪检测其凋亡率,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达。结果不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00及80.00μg/ml)南瓜蛋白作用不同时间(24、48及72 h)后,南瓜蛋白对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。40.00μg/ml南瓜蛋白作用72 h后,透射电镜下可见细胞出现明显的凋亡改变,并可见凋亡小体;不同浓度(0、2.50、10.00、40.00μg/ml)南瓜蛋白作用72 h后,细胞的凋亡率分别为(0.30±0.11)%、(18.93±1.06)%、(28.00±2.07)%及(49.93±3.25)%,随着药物浓度的升高,细胞的凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性(P<0.05);caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增强,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论南瓜蛋白可能通过上调caspase-3蛋白的表达诱导胰腺癌细胞凋亡。

冷榨南瓜子油饼蛋白质提取工艺及功能性质研究

以冷榨南瓜子饼粕为原料,采用碱溶酸沉法提取其中的蛋白质,分析pH值、料液比、提取温度、提取时间等单因素对提取率的影响,用响应曲面法优化工艺条件,得到冷榨南瓜子油饼蛋白质提取最佳工艺:料液比1:12(g/mL)、提取温度50℃、提取时间22.5min。在此工艺条件下,饼中蛋白质粉的平均提取率为23.92%,蛋白质质量分数86.48%(湿基,蛋白粉水分质量分数为9.31%)。对提取出的蛋白粉进行各种理化及功能性分析,结果表明:提取的冷榨南瓜子蛋白粉具有良好的加工性能,特别是持水能力和持油能力,均高于大豆分离蛋白。且随着蛋白溶液浓度和加热时间的变化,其持水及持油力的变化极显著;乳化性随着蛋白质溶液浓度的升高而升高,而乳化稳定性在蛋白质质量分数5%时出现明显下降,两者数值均随蛋白质溶液质量分数的变化有极显著差异,但整体也随蛋白质质量分数的升高而升高;起泡性随蛋白质质量分数升高而增大,泡沫稳定性几乎不随蛋白质质量分数变化。

南瓜蛋白联合常用化疗药物对人胰腺癌BxPC-3细胞的体外抑制作用

目的研究南瓜蛋白（CUS）联合胰腺癌常用化疗药物吉西他滨（GEM）、氟尿嘧啶（5-FU）、紫杉醇（erx）、顺铂（DDP）对人胰腺癌细胞株BxPC-3的增殖抑制作用。方法采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法测定CUS分别与GEM、5-FU、PTX、DDP联用对体外培养的BxPC-3细胞的增殖抑制作用；应用集落形成实验测定CUS分别与GEM、5-FU、PTX、DDP联用对体外培养的BxPC-3细胞集落形成的影响；用金氏公式判断药物联用的协同效果。结果CUS联用GEM、5-FU、HIX、DDP对BxPC．3细胞的增殖抑制率均大于各药单用的抑制率，q〉0．85；CUS与胰腺癌常用化疗药物均在低浓度范围内联用的相加效果明显。CUS联用GEM、5-FU、PTX、DDP对BxPC-3细胞的集落形成抑制率均大于各药单用的抑制率，q〉1．15。结论CUS联合GEM、5-FU、PTX、DDP常用化疗药物对体外培养的BxPC-3细胞的生长抑制具有较好的协同作用。

玉米醇溶蛋白和南瓜子蛋白对面团特性与面制品品质的影响

为了分析玉米醇溶蛋白和南瓜子蛋白对面团特性及面制品品质的影响,对面团粉质特性、水分分布、糊化特性及面制品的质构、感官评分等进行了分析。结果表明:适量添加南瓜子蛋白能提高面团的形成时间和稳定时间,降低面团的弱化度、衰减值及回生值,提高面团的吸水能力及挂面的吸水率;玉米醇溶蛋白对面制品硬度的影响相对较小且添加量不超过3%时,能降低挂面的蒸煮损失率;2种外源植物蛋白添加量不超过3%时对面制品的感官评分有积极影响,但增加到5%时,对面制品的色泽、食味等指标影响较大,感官评分降低。适量添加南瓜子蛋白对面粉的粉质特性、老化性质及吸水能力有一定的改善作用,适量添加玉米醇溶蛋白能增加馒头的比容、减少挂面的蒸煮损失率。2种外源植物蛋白的适宜添加量为3%。

南瓜糖蛋白的提取分离及降糖作用的研究

本试验采用水提醇沉法和硫酸铵分级沉淀法提取分离南瓜糖蛋白,研究南瓜糖蛋白对糖尿病小鼠的降血糖作用。首先对提取产物进行定性检测;然后用中性蛋白酶酶解提取物;最后建立四氧嘧啶型糖尿病小鼠模型,选取阴性对照组、阳性对照组、低剂量组、高剂量组四组中造模成功的小鼠,分别连续7 d灌胃一定体积生理盐水、格列苯脲(200 mg/kg)、南瓜糖蛋白(200 mg/kg)及南瓜糖蛋白(400 mg/kg),同时监测每天的体重和第2、4、7 d的血糖值。试验结果表明:高剂量组的降糖率为33.75%,低于格列本脲组的39.4%,高于低剂量组的22.4%。因此南瓜糖蛋白对四氧嘧啶型糖尿病小白鼠的体重和血糖有显著影响,高剂量组比低剂量组降糖率高,但低于格列本脲。

南瓜胰蛋白酶抑制剂

南瓜胰蛋白酶抑制剂(CMTI)具有独特的结构特点和抑制机制。此文对丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类和CMTI的分子结构特征、酶学特性以及生理功能等方面的研究进展做一介绍。

南瓜功能特性研究进展

该文综述南瓜降血糖、降血脂及抗癌症等方面生理功能特性研究进展。

凹槽南瓜叶的营养及保健功能研究进展

凹槽南瓜叶营养成分丰富,是一种优质的植物蛋白质,且具有多种生理功能。本文通过查阅相关文献,对凹槽南瓜叶的主要营养物质及抗氧化性物质进行了综述,系统介绍了凹槽南瓜叶中蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质和抗氧化性物质等营养物质的组成分及其相关保健功能,以期为凹槽南瓜在我国的推广种植、凹槽南瓜叶作为新型蛋白质和保健食品资源的开发利用提供科学依据。

南瓜子粕蛋白酶解物的制备及清除DPPH活性的研究

以南瓜子粕蛋白为底物,选取碱性蛋白酶为水解酶进行水解反应,制备酶解产物。方法:以水解度DH为指标,通过单因素试验及正交试验确定最佳酶解工艺条件;以DPPH自由基清除率为指标,测定酶解物的抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶水解工艺条件为:酶解温度55℃,加酶量5%,pH值8.0,料液比4%,反应时间4 h;经6 h酶解后,DPPH.清除率可达到58.89%。

免疫毒素Trastuzumab-Cucurmosin(T-CUS)的制备及鉴定

目的制备由抗人类表皮生长因子受体2(HER-2/NEU)单克隆抗体曲妥珠单抗(Trastuzumab,简称T)与南瓜蛋白(Cucurmosin,简称CUS)偶联而成的免疫毒素,并进行鉴定。方法以N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)为偶联剂,制备T-CUS,经过Ni Sepharose 6 Fast Flow和SP Sepharose 6 Fast Flow纯化后SDS-PAGE分析其纯度及成分,细胞ELISA法检测其对人乳腺癌BT-474细胞的结合能力。结果 SDSPAGE分析显示T-CUS免疫毒素成功构建,免疫毒素基本保留了对BT-474细胞的结合能力。结论利用SPDP可实现曲妥珠单抗与CUS的成功偶联。