南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的作用

目的探讨南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,以期为进一步开发南蛇藤多萜成为抗肿瘤药物奠定更加坚实的理论和实验基础。方法实验分为空白组,南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 10、20、40、80、160μmol·L;)。细胞计数试剂盒(cell count kit, CCK-8)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞增殖能力的影响,并确定南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的用药浓度,高内涵成像进一步观察南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的对BGC-823细胞分裂增殖能力的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞线粒体膜电位水平的影响,磷脂酰丝氨酸蛋白抗体-异硫氰基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluoresceine isothiocyanate/Propidium Iodide, Annexin V-FITC/PI)法检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞凋亡的影响,免疫印迹法(Western Blot)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞相关凋亡蛋白的表达水平。结果与空白组比较,随着南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物用药浓度的升高,BGC-823细胞增殖分裂能力逐渐降低(P<0.01),根据CCK-8实验结果计算出半抑制浓度(IC_(50)),筛选出新的南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 40、80、160μmol·L^(-1))。该三萜化合物还能够使线粒体膜电位水平下降,诱导细胞凋亡(P<0.05),同时抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P<0.01),促进Bcl-2相关X蛋白(BCL2-Associated X, Bax)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达(P<0.01)。结论南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物能够抑制胃癌BGC-823细胞分裂和增殖,诱导细胞凋亡,该过程可能与降低线粒体膜电位水平,同时下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

南蛇藤茎提取物对人胶质母细胞瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P<0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P<0.05)。结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关。

南蛇藤影响胃癌细胞丝氨酸/甘氨酸代谢和增殖的作用机制研究

目的探讨南蛇藤茎醋酸乙酯提取物(COE)通过提高丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)琥珀酰化水平影响胃癌细胞增殖、凋亡和丝氨酸/甘氨酸代谢的作用。方法采用MTT法、TUNEL试剂盒检测COE对MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。通过免疫沉淀富集MGC-803细胞中SHMT2蛋白,利用琥珀酰化泛抗体检测SHMT2琥珀酰化修饰水平。将细胞裂解液进行~1H-NMR检测,结合多元统计分析比较阴性对照组和320μg/ml COE组丝氨酸/甘氨酸含量差异。结果 MTT法结果显示,20、40、80、160、320μg/ml COE分别处理MGC-803细胞24、48、72 h后,细胞的增殖活性受到明显抑制,并呈浓度和时间依赖性。经COE作用后,细胞核固缩,胞浆浓缩,胞膜破裂,出现凋亡小体,随着COE作用浓度升高,细胞凋亡明显。320μg/ml COE组细胞琥珀酰化SHMT2蛋白表达量高于阴性对照组(0. 92±0. 10 vs. 0. 18±0. 05,P<0. 05)。阴性对照组和320μg/ml COE组细胞丝氨酸(7. 861±0. 367 vs. 2. 594±0. 037)和甘氨酸(12. 915±0. 581 vs. 4. 620±0. 382)含量差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论 COE可通过影响胃癌细胞MGC-803丝氨酸/甘氨酸代谢,抑制其增殖,并诱导其凋亡,其可能的作用机制与上调丝氨酸代谢关键酶SHMT2的琥珀酰化水平有关。