重庆市山羊博尔纳病病毒P24基因的检测

为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8．3％(5／60),脑组织检测阳性率为10％(6／60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96．51％,与标准株Strain V和 He／80同源性为95．35％,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。

博尔纳病病毒荧光定量套式RT-PCR检测方法的建立

目的 :建立博尔纳病病毒 (BDV)荧光定量套式RT -PCR检测方法 ,为快速、准确地定量检测BDV奠定基础。方法 :根据BDVP2 4基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的BDVP2 4基因片段克隆入载体 ,重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定和样品检测。结果 :应用量组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .998,建立了检测BDV的荧光定量套式RT -PCR方法。检测 5 8例神经精神病患者及 5 0例健康人外周血单核细胞 (PBMC)中BDVP2 4基因片段 ,3例精神分裂症及l例帕金森病患者呈阳性 ,其余均为阴性。结论 :荧光定量套式RT -PCR方法能够避免PCR后处理导致的假阳性污染 ,并实现准确定量 ,对于研究BDV感染与人类神经精神疾病的关系有很好的应用价值。

博尔纳病病毒自然感染状况及其核苷酸序列

目的 探讨中国黑龙江地区正常人和马博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus ,BDV)自然感染状况 ,进而比较分析中国自然感染的BDV与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株及标准株He/80在种系发生中的关系。方法 用巢式RT -PCR方法检测中国黑龙江地区正常人和马匹单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBM Cs)中BDV - p2 4基因片段 ,分别随机选取每种样本部分阳性扩增产物进行克隆测序 ,测序结果与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株以及标准株He/80进行序列比较。结果 76例正常人、34匹马的标本中BDV - p2 4基因的阳性检出率分别为 9 2 % (7/76 )和 2 3 5 % (8/34)。序列分析结果表明 ,中国黑龙江地区正常人和马感染的BDV的核苷酸序列除与一个新亚型株No/98差别较大 (大于 15 % )外 ,与其他国外精神分裂症患者和马源BDV分离株同源性均大于 94 % ,与标准株He/80同源性达到 98%以上。结论 证实黑龙江地区正常人和马中存在BDV的自然感染。该地区感染的BDV与标准株He/80存在高度的同源性。

用巢式RT-PCR检测精神分裂症患者血液标本中博尔纳病病毒p24基因

目的 :检测精神分裂症患者外周血单个核细胞 ( peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)标本中博尔纳病病毒 ( Borna Disease Virus,BDV) p2 4基因 ,探讨 BDV感染与精神分裂症的关系。方法 :用巢式 RT- PCR方法检测黑龙江省精神分裂症患者及正常人 PBMCs中 BDV- p2 4基因片段 ,同时扩增 β-肌动蛋白 ( β- actin)作为内参照。结果 :6 6例精神分裂症患者中 ,BDV- p2 4基因的阳性检出率为 2 8.8% ( 19/6 6 ) ;4 7例正常人中 ,BDV- p2 4基因的阳性检出率为 6 .3% ( 3/47) ,经比较两者间阳性率差异有显著性 ( P<0 .0 5 )结论 :证实中国存在 BDV感染 ,黑龙江省精神分裂症的发生可能与

牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒检测结果的比较

目的检测同一牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒(BDV)p24片段,比较两者阳性率的差异。方法采用改进的荧光定量套式RT-PCR,对新疆伊犁地区圈养的100只牧羊犬外周血单核细胞(PBMC)和脑组织(BT)同时进行BDV p24基因片段的检测,并对阳性标本采用GFP-p24、pMD-19扩增后电泳验证,排除质粒污染,并克隆测序,用Fisher精确检验和χ2检验分析两者阳性率的差异。结果牧羊犬外周血单核细胞和脑组织BDV p24检测的阳性率分别为5%和9%;PBMC组和BT组BDV p24检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论BDV在脑内持续感染,但以RT-PCR对外周血单核细胞BDV p24片段的检测有可能替代脑组织BDV检测,作为大规模流行病学调查的手段。

重庆地区抑郁症患者博尔纳病病毒感染的分子生物学研究(英文)

背景博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是一种高度嗜神经的RNA病毒,是人畜共患病博尔纳病(Borna disease,BD)的病原体,可引起从鸟到灵长类的多种动物的中枢神经系统感染[1],表现为以中枢神经系统功能障碍为特征的BD。近年研究发现BDV感染与一些神经精神疾病的发病有关,尤其是精神疾病。但有关BDV感染与抑郁症(depressive disorder,DD)发病之间的关系,目前国内外研究尚有争议。本研究从分子生物学角度进一步探讨BDV与DD发病之间的关系。方法采用巢式逆转录酶聚合酶链反应(nRT-PCR)结合荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测了60例DD患者和120名健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中BDV p24基因片段,对FQ-PCR阳性产物进行克隆和基因序列测定,测序结果与人和动物来源的BDV分离株以及标准株Strain V和He/80进行序列比较。对两组阳性率进行Fisher精确概率检验。结果DD组BDV p24基因片段阳性率为5%(3/60);健康组阳性率为0%(0/120)。DD组阳性率高于健康组,差异有显著性意义(P<0·05)。测序结果为5′-CCCTCCAAGTGGAAACCATCCAGACAGCTCAGCGGTGCGACCACTCCGACAGCATCAGGATTCTTGGCGAGAACATCAA-GATACTG-3′。登陆美国国家生物技术信息中心,证实所获得目的基因片段确系BDV p24基因片断,与人类基因组片段和其他病毒基因组片段无同源性。其与马源的BDV病毒株H1766序列比较亲缘关系最近,同源性为97.68%,在2个位点出现突变(nt1675T→C,nt1678C→T)。与其他国际公认的标准病毒株Strain V和He/80比较,同源性分别为96·51%和95·.35%,碱基互换中局限于T-C、和A→G两种。结论中国的DD患者中存在BDV感染,重庆地区DD的发病可能与BDV感染有关。

抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。

博尔纳病病毒对人少突胶质细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量。结果与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达。随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P<0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3 d后,细胞出现凋亡增多。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P<0.05),细胞增殖指数降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P<0.05)。结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生。

重庆三峡库区部分地域猪博尔纳病病毒自然感染状况调查

博尔纳病病毒（Borna disease virus,BDV）是一种非细胞溶解的单股负链嗜神经RNA病毒,可引起人畜共患病博尔纳病。目前研究表明,BDV几乎可感染所有的温血动物,但其流行现况尚不完全清楚。本研究采用改进的巢式逆转录酶聚合酶链反应（nRT-PCR）检测重庆三峡库区部分地域健康猪外周血单核细胞（PBMCs）BDVP24基因片段，对阳性产物进行测序分析，了解该地域BDV自然感染状况。

中国精神病人外周血博尔纳病病毒RNA的检测

博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是一种非分段的、负链、单股的RNA病毒.具有很强的嗜神经性,能感染从鸟到灵长类的广泛动物种类并引起以中枢神经系统功能障碍为特征的博尔纳病(Boma disease,BD).目前我国大陆尚无国人BDV感染的研究报道.我们采用套式(nested)RT-PCR结合荧光定量(FQ)PCR检测精神病人外周血单个核细胞(PBMC)中BDV P24基因片段.

中国精神病人外周血博尔纳病病毒P24基因片段检测

目的 探讨博尔纳病病毒与人类精神疾病的关系。方法 采用套式逆转录酶聚合酶链反应(nested RT-PCR)结合荧光定量(FQ)PCR检测了31例精神分裂症病人,16例情感障碍病人以及50例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中BDV P24基因片段。结果精神分裂症组BDV P24基因片段阳性率为9.7％(3/31);情感障碍组(0/16)和健康组(0/50)均为阴性。精神分裂症组阳性率高于健康组,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论 中国的精神病人中存在BDV感染,但BDV感染是否与精神分裂症发病相关有待进一步研究。

博尔纳病毒P24转染后不同时期核酸和蛋白的表达及细胞定位

目的通过观察博尔纳病毒(borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24)及其编码核酸不同时期的表达和细胞定位,探索BDV潜伏感染的机制。方法构建包含BDV GFP-P24质粒的OL细胞模型,检测并比较不同时期P24核酸和蛋白的表达;对构建的OL细胞模型和各种阴性对照进行逆转录原位PCR的检测,观察P24蛋白编码核酸的细胞定位;使用倒置荧光显微镜观察OL细胞中P24蛋白的细胞定位。结果成功构建了含BDV GFP-P24质粒的OL细胞,发现转染后20代以内细胞P24核酸和蛋白的表达差异不显著(P>0.05);BDV的P24重组蛋白基因始终定位于细胞核,其蛋白早期在细胞核出现,反复传代约15次后可同时在细胞核和细胞质内出现。结论BDV的重组蛋白P24在病毒感染过程中起关键作用,其编码基因始终存在于宿主细胞核内,但表达的蛋白可以在一定时期通过核膜进入细胞质。

博尔纳病病毒感染对神经元可塑性影响的研究进展

博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)是一种具有高度嗜神经性的病毒。近年,有大量研究证实该病毒感染与人神经精神疾病的发生有关。但其确切机制仍未明了。一些研究认为BDV感染对中枢神经系统神经元可塑性的影响可能是其致病的重要基础。近年许多学者通过对沙鼠、小鼠、大鼠及转基因鼠等各种BDV感染模型的研究,进一步揭示了BDV感染对神经元可塑性影响的分子机制。结果发现BDV感染主要通过对星形胶质细胞功能的影响、干预HMGB 1蛋白以及神经营养因子信号转导等途径干预神经元的可塑性,影响脑内神经元的功能及其存活和发育,从而引起脑功能损害,导致宿主精神、行为异常。今后随着新的BDV转基因模型的成功建立将进一步揭示BDV感染对神经元可塑性影响的分子机制,给临床预防和治疗博尔纳病提供理论基础。

博尔纳病病毒磷蛋白在PC-12细胞内的稳定表达及对其增殖的影响

【目的】建立博尔纳病病毒磷蛋白在神经源性PC-12细胞内的稳定表达体系,初步探讨博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长是否有影响。【方法】培养PC-12细胞,用阳离子脂质体的方法将带有博尔纳病病毒磷蛋白基因的表达质粒转染到细胞内进行稳定表达,用荧光显微镜和RT-PCR的方法检测细胞内磷蛋白的表达,用MTT方法检测磷蛋白对细胞生长的影响。【结果】转染细胞经培养10代后仍然表达目的蛋白,成功建立稳定表达体系。MTT检测显示博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,其生长明显滞后,但粘附能力增加。【结论】通过本文建立的体系能在PC-12细胞内稳定表达博尔纳病病毒磷蛋白,该体系可用于进一步深入研究博尔纳病病毒磷蛋白的作用机制,进而为研究博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的机制提供基础。此外本文通过检测细胞的增殖活性发现博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,可能是博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的重要机制之一。

神经系统疾病患者脑脊液博尔纳病病毒CIC及抗体的检测

目的探讨贵州省部分地区神经系统疾病中博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染情况以及病毒性脑炎阳性患者的临床特征。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测84例神经系统疾病患者[包括病毒性脑炎(VE)患者69例,吉兰-巴雷综合征(GBS)患者9例,多发性硬化(MS)患者6例,以及45例对照组(非炎症性神经系统疾病患者)]脑脊液(CSF)中BDV循环免疫复合物(CIC)及抗体,对13例脑脊液BDV CIC阳性患者同期行血液BDV CIC检测。结果 84例神经系统疾病患者CSF中BDV CIC总阳性率为15.4%(13/84),其中VE阳性率14.4%(10/69),GBS阳性率11.1%(1/9),MS阳性率33.3%(2/6),对照组阳性率2.22%(1/45),实验组总体阳性率明显高于对照组(P<0.05),两组比较具有统计学意义。CSF抗体阳性率1.2%(1/84),对照组抗体阳性率为0。两组比较无统计学意义(P>0.05)。血液BDV CIC阳性标本10例。7例BDV CIC阳性病毒性脑炎患者主要以精神行为异常为特征,患者有密切动物接触史。结论贵州省部分地区等地神经系统疾病中存在BDV感染,7例VE患者主要以精神行为异常为临床特征。

贵州部分地区精神分裂症患者血清PBMC博尔纳病病毒CIC及抗体的检测

目的对贵州省部分地区精神分裂症患者血清外周血单个核细胞(PBMC)进行检测,探讨博尔纳病病毒(BDV)感染与精神分裂症的相关性;方法运用新型的三联ELISA测循环免疫复合物(CIC)的方法,检测97例精神分裂症患者组及48例健康对照组PBMC中BDV特异性CIC;结果 97例精神分裂症组中有24例CIC为阳性,阳性率为24.7%(24/97);抗体检出率为14.4%(14/97),48例对照组中CIC及抗体阳性1例,阳性率为2.1%(1/48);精神分裂症组检出率高于健康对照对照组,具有统计学意义(P<0.05);结论贵州省部分地区存在着BDV的感染,BDV感染与精神分裂症可能相关。

重庆地区部分牛和猪外周血博尔纳病病毒自然感染的调查

采用荧光定量巢式实时逆转录聚合酶链反应检测了重庆地区牛和猪各50例外周血单核细胞中博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)p24基因片段,并对其进行BDV p40基因片段的检测以确保结果的可靠性。检出的阳性序列与GenBank中5个国家4个动物种属25例BDV p24基因序列进行比对,分析其核苷酸和氨基酸序列的同源性,重建基因系统发生树。结果显示,3例牛和2例猪血标本BDV p24检测呈阳性,阳性率分别为6.00%和4.00%;5例标本BDV p40片段检测均为阳性,其余标本均为阴性;BDVp24扩增产物序列与BDV标准病毒株He/80的同源性为100%,与H1766和Strain V相比,变异程度小,所编码的氨基酸序列亦无变化;从发生树可以看出,5例BDV p24片段序列汇聚德国-瑞士-奥地利-日本-重庆混合支系。提示,重庆地区牛和猪中可能存在BDV的自然感染,其流行株可能源于外来疫病病原的传入。

神经疾病患者外周血博尔纳病病毒磷蛋白抗体的检测

目的探讨贵州省部分地区博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)在神经系统疾病患者中的感染情况。方法建立检测血清中BDV的免疫印迹(Western blot,WB)方法,采用WB方法检测贵州省120例神经系统疾病患者,包括病毒性脑炎(VE)患者62例,帕金森病(PD)患者32例,吉兰-巴雷综合征(GBS)患者19例,多发性硬化(MS)患者7例,以及贵州省120名健康体检者(对照组)外周血中BDV磷蛋白P24抗体(BDV-P24抗体)水平并进行分析。结果 120例神经系统疾病患者外周血中,BDV-P24抗体阳性7例(5.83%),其中VE患者4例(6.45%),PD患者2例(6.25%),GBS患者1例(5.26%),MS患者及对照组中均为阴性。神经系统疾病患者阳性率明显高于对照组(P=0.007),VE、PD患者阳性率均高于对照组(分别P=0.013,P=0.043);GBS及MS患者阳性率与对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论贵州省有少部分神经疾病(VE、PD、GBS等)患者曾经感染过博尔纳病病毒。