一例从国内鹦鹉鉴定到鹦鹉博尔纳病毒2型的诊断研究

为探究一例非洲灰鹦鹉死亡原因。本研究通过临床症状、病理变化以及分子检测等方法对一例非洲灰鹦鹉的死因进行了分析诊断。该鹦鹉生前即出现食欲下降、精神萎靡和呕吐等症状,死后剖检观察到腺胃扩张且胃内有未消化食物并伴酸臭味,胃壁变薄,脑部充血等现象,通过病理切片及分子诊断显示,该鹦鹉感染了博尔纳病毒。通过测序及进化树分析表明,该鹦鹉感染的博尔纳病毒为鹦鹉博尔纳病毒2型,为国内首次发现。本研究为该病毒的诊断提供了依据,并为该病的防控提供了参考。

博尔纳病毒核蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的构建、表达、并纯化重组博尔纳病毒核蛋白(Borna disease virus,BDV),并鉴定该蛋白。方法通过PCR反应从博尔纳病毒cDNA中扩增博尔纳病毒核蛋白P40基因,构建博尔纳病毒核蛋白P40基因重组质粒pET-14b-BD-VP40,转化大肠杆菌,IPTG诱导融合蛋白的表达,His-tag亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;Western-blot法鉴定该蛋白。结果成功构建重组质粒pET-14b-BDVP40,酶切鉴定、核酸序列分析正确,亲和层析纯化后纯度可达90%,Western-blot表明重组蛋白能与博尔纳病毒核蛋白单克隆抗体特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的pET-14b-BDVP40融合蛋白,为进一步研究博尔纳病毒核蛋白作用机制及开发相应血清学检测试剂盒提供基础。

博尔纳病毒在宁夏的人和动物感染的检测

目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单核细胞的p24和p40基因片段。对检测阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果同国外的标准株HE80、H1766、strainV等进行核酸和氨基酸序列对比分析,并构建病毒基因的系统发生树。结果在60例VE患者及其接触的710绵羊中,PCR检测发现有3例阳性,阳性检出率5%;9头绵羊阳性,阳性检出率为1.27%。基因聚合分析显示人和动物BDV的核酸序列和编码氨基酸序列与德国马源性的HE80株同源性高达100%,重构基因系统发生树可见宁夏VE患者和牛羊BDV核苷酸序列与国外的标准株形成宁夏-德国-日本的混合支系,同时宁夏绵羊BDV序列也形成了一个独立的支系。结论宁夏地区人和牛羊存在BDV的自然感染,并且人的感染存在动物源性,其传染途径很可能是呼吸道的传播可能引起脑炎的非特异性的临床症状,病毒在种系发生中与德国马源性HE80株有极高的同源性,病毒可能由国外引入本土,不排除病毒株变异的可能,人和绵羊之间存在相互传染的可能。

江西及周边地区神经系统疾病患者博尔纳病毒感染的分子流行病学研究

目的探索博尔纳病毒(BDV)在江西及周边地区感染,导致神经系统疾病的分子流行病学状况。方法采用聚合酶链反应检测30例病毒性脑炎(VE)的患者、10例多发性硬化(MS)的患者、10例急性吉兰-巴雷综合征(GBS)的患者、10例帕金森病(PD)患者、60例健康受试者外周血液中的单个核细胞(PBMC)、60只山羊的PBMC中BDV p24基因片段比较,对其阳性产物进行相关的基因序列测定,氨基酸排列顺序及同源性的相关分析,并探讨其BDV分子流行病学特点。结果 PBMC BDV p24基因片段检出率比较,VE和MS患者高于健康受试者,差异有统计学意义(P<0.05),而山羊检测BDV p24的基因片段阳性率为1.67%。VE和MS患者的BDV p24基因片段测序结果相一致,且与strain V毒株同源性比较为95.73%;而与BDV/MDCK毒株同源性比较为97.89%。山羊中测序BDV p24基因片段结果与Gen Bank提供的strain V毒株同源性比较为95.72%,与BDV/MDCK毒株同源性比较为96.38%;且与C6BV毒株同源性比较为96.49%,但其所编码的氨基酸没有实质性改变。结论 BDV可能是新发感染性疾病中的一种病原体,与人类某些神经系统疾病(如VE、MS)的发生可能存在密切关系,江西及周边地区某些神经系统疾病患者中BDV感染可能存在动物源性,尚待进一步深入研究及分析,从而提高对该类疾病的认识,以便更有效地对其进行防治。

贵州遵义地区82只健康蝙蝠脑组织博尔纳病毒核蛋白检测

目的观察贵州遵义地区蝙蝠脑组织博尔纳病毒(BDV)感染情况。方法采用Western blotting法检测贵州遵义地区82只健康蝙蝠脑组织中BDV核蛋白。结果蝙蝠脑组织BDV核蛋白阳性率为12.2%(10/82)。结论贵州遵义地区健康蝙蝠存在BDV感染。

博尔纳病毒的研究进展

目的博尔纳病病毒是一种非细胞溶解性,嗜神经性核糖核酸病毒。该病毒具有广泛的感染宿主,感染范围从鸟类、马、灵长类等到人类,博尔纳病是一种致死性中枢神经系统疾病,临床上以精神、行为异常为主要表现。其流行病学调查、检测和治疗显得尤为重要。

博尔纳病毒的研究现状

博尔纳病毒是一种嗜神经性病毒.研究表明博尔纳病毒能引起从马、羊等家畜,啮啮类动物到灵长目几乎所有温血动物的自然和实验性感染,并可能参与了人类某些精神神经性疾病的发生.本文就目前博尔纳病毒对人及动物致病性及免疫性的研究近况作一综述.

博尔纳病毒与精神性疾病

1885年,在德国萨克森州博尔纳镇一大群战马中,突然爆发一种以精神、行为异常为特征的脑炎,造成大量马匹死亡,并将该病命名为博尔纳病（Borna Disease,BD）。随后研究者们从病马脑组织中分离出致病病原体,即博尔纳病毒（Borna Disease Virus,BDV）。该病毒是一种具有包膜的非节段性嗜神经病毒,属于单分子负链RNA病毒目,博尔纳病毒科,博尔纳病毒属。但由于受到地域的限制以及典型病例的长期缺失，博尔纳病毒很长一段时间未受到科学界的关注。

遵义市及周边地区博尔纳病毒感染分子流行病学研究

目的探讨博尔纳病毒（BDV）在遵义市及周边地区流行状况。方法采用荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应（FQ-nRT-PCR）检测43例病毒性脑炎（VE）患者、9例多发性硬化（MS）患者、7例急性吉兰-巴雷综合征（GBS）患者、5例帕金森病（PD）患者、98名健康人外周血液单个核细胞（PBMC）、300只山羊PBMC中BDVp24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定，氨基酸顺序及同源性分析，并分析BDV分子流行病学特点。结果BDVp24基因片段阳性率VE患者为13．95％，MS患者为22．22％，而GBS和PD患者及健康人中未检出。VE和MS患者检出率明显高于健康人（0％，P〈0．05），山羊BDVp24基因片段阳性率为0．67％，与健康人对比差异无统计学意义（P〉0．05）；VE和MS患者测序结果相同与GenBank提供的strainV毒株比较同源性为96．51％，有3个位点出现一致性沉寂突变，BDV／MDCK毒株比较同源性为97．67％，有2个位点出现一致性沉寂突变，与C6BV毒株比较有2个位点出现一致性沉寂突变，其山羊中BDVp24基因片段测序结果与GenBank提供的strainV毒株比较同源性为96．51％，有3个位点出现一致性沉寂突变，与BDV／MDCK毒株比较同源性为96．51％，有3个位点出现一致性沉寂突变，与C6BV毒株比较同源性为96．51％，有3个位点出现一致性沉寂突变，但所编码的氨基酸没有改变。结论遵义市及周边部分地区VE、MS可能与BDV感染有关，人类感染BDV可能存在动物源性。

博尔纳病病毒p24重组蛋白的表达与初步鉴定

博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus,BDV)是一种嗜神经病毒。研究表明 ,BDV不仅可以引起马、羊等家畜的自然感染 ,从啮齿类动物到人以外的灵长类动物均易受到BDV的实验性感染 ,而且BDV感染还可能与人类的某些精神神经疾病的发生相关。本研究对含有BDV p2 4重组质粒PGEX 3X的大肠杆菌表达系统进行了优化表达BDV p2 4蛋白 ,在IPTG 2mmol/L、3h表达量最大 ,同时用BDV p2 4单克隆抗体证实了其特异性。从而为建立检测待检血清中BDV p2

博尔纳病毒感染的研究进展

博尔纳病（Bornadisease，BD）最早见于19世纪的德国，是一种在战马中流行的伴有神经精神症状的脑膜脑炎，致死率较高，这种疾病首次在德国萨克森州博尔纳镇暴发，后以该镇名字来命名。20世纪初确定BD的病原体为一种新型病毒，即博尔纳病毒（BDV），是一种新分类的非分节段的单股负链有包膜RNA病毒，其具有高度的嗜神经性，在细胞内呈低拷贝、非溶性复制，一般认为不引起明显的细胞病变。

鹦鹉源禽博尔纳病毒的鉴定及全基因序列分析

为了对疑似禽博尔纳病毒感染病例进行确诊,并了解鹦鹉源禽博尔纳病毒毒株的流行特点,本试验设计合成1对特异性引物,对疑似感染禽博尔纳病毒而死亡的鹦鹉进行检测,并设计7对首尾重叠的引物对其中1株确诊的博尔纳病毒全基因进行RT-PCR扩增、测序,应用DNAStar和MEGA6.06软件将本次获得的PaBV-4与GenBank上公布的PaBV序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,死亡的10只鹦鹉中,有5只感染PaBV-4,1只感染PaBV-5。选取其中1份PaBV-4组织样品做全基因测序和序列分析,结果显示PaBV-4基因组全长8915 nt,编码6种蛋白,与NM20分离株核苷酸相似性最高(99.6%),与6758分离株氨基酸相似性最高(99.8%);遗传进化分析显示,与PaBV-4各分离株M14、AG5、6758亲缘关系最近,同属一个小的分支,其次是NM01,与PaBV-5各分离株亲缘关系最远。

鹦鹉博尔纳病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立鹦鹉博尔纳病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,通过扩增病毒M基因并与pMD19-T载体连接,构建重组质粒作为标准品,根据M基因序列设计特异性定量引物,进行了荧光定量PCR的敏感性、特异性、重复性试验。结果显示,荧光定量PCR比普通PCR检测灵敏度高100倍,可检出最低拷贝数为6.7×10^2 copies,μL的标准品,而普通PCR只能检测到最低拷贝数为6.7×10^4 copiesμL的标准品;用荧光定量PCR方法检测H5N6、H7N9、H9N2 AIV,NDV,IBV时均未见扩增;批内及批间重复变异系数均小于1%;对8只鹦鹉脑组织样品进行检测,荧光定量PCR检出阳性样品6份,普通PCR检出阳性样品4份,检出率两者相差25%。采用本方法对64份临床采集的鹦鹉粪便样本进行检测,结果筛选出阳性样品1份。以上结果表明,本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于鹦鹉博尔纳病毒4型的检测。

重庆市山羊博尔纳病病毒P24基因的检测

为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8．3％(5／60),脑组织检测阳性率为10％(6／60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96．51％,与标准株Strain V和 He／80同源性为95．35％,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。

博尔纳病病毒荧光定量套式RT-PCR检测方法的建立

目的 :建立博尔纳病病毒 (BDV)荧光定量套式RT -PCR检测方法 ,为快速、准确地定量检测BDV奠定基础。方法 :根据BDVP2 4基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的BDVP2 4基因片段克隆入载体 ,重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定和样品检测。结果 :应用量组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .998,建立了检测BDV的荧光定量套式RT -PCR方法。检测 5 8例神经精神病患者及 5 0例健康人外周血单核细胞 (PBMC)中BDVP2 4基因片段 ,3例精神分裂症及l例帕金森病患者呈阳性 ,其余均为阴性。结论 :荧光定量套式RT -PCR方法能够避免PCR后处理导致的假阳性污染 ,并实现准确定量 ,对于研究BDV感染与人类神经精神疾病的关系有很好的应用价值。

博尔纳病病毒自然感染状况及其核苷酸序列

目的 探讨中国黑龙江地区正常人和马博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus ,BDV)自然感染状况 ,进而比较分析中国自然感染的BDV与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株及标准株He/80在种系发生中的关系。方法 用巢式RT -PCR方法检测中国黑龙江地区正常人和马匹单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBM Cs)中BDV - p2 4基因片段 ,分别随机选取每种样本部分阳性扩增产物进行克隆测序 ,测序结果与国外精神分裂症患者和患病马的BDV分离株以及标准株He/80进行序列比较。结果 76例正常人、34匹马的标本中BDV - p2 4基因的阳性检出率分别为 9 2 % (7/76 )和 2 3 5 % (8/34)。序列分析结果表明 ,中国黑龙江地区正常人和马感染的BDV的核苷酸序列除与一个新亚型株No/98差别较大 (大于 15 % )外 ,与其他国外精神分裂症患者和马源BDV分离株同源性均大于 94 % ,与标准株He/80同源性达到 98%以上。结论 证实黑龙江地区正常人和马中存在BDV的自然感染。该地区感染的BDV与标准株He/80存在高度的同源性。

用巢式RT-PCR检测精神分裂症患者血液标本中博尔纳病病毒p24基因

目的 :检测精神分裂症患者外周血单个核细胞 ( peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)标本中博尔纳病病毒 ( Borna Disease Virus,BDV) p2 4基因 ,探讨 BDV感染与精神分裂症的关系。方法 :用巢式 RT- PCR方法检测黑龙江省精神分裂症患者及正常人 PBMCs中 BDV- p2 4基因片段 ,同时扩增 β-肌动蛋白 ( β- actin)作为内参照。结果 :6 6例精神分裂症患者中 ,BDV- p2 4基因的阳性检出率为 2 8.8% ( 19/6 6 ) ;4 7例正常人中 ,BDV- p2 4基因的阳性检出率为 6 .3% ( 3/47) ,经比较两者间阳性率差异有显著性 ( P<0 .0 5 )结论 :证实中国存在 BDV感染 ,黑龙江省精神分裂症的发生可能与

牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒检测结果的比较

目的检测同一牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒(BDV)p24片段,比较两者阳性率的差异。方法采用改进的荧光定量套式RT-PCR,对新疆伊犁地区圈养的100只牧羊犬外周血单核细胞(PBMC)和脑组织(BT)同时进行BDV p24基因片段的检测,并对阳性标本采用GFP-p24、pMD-19扩增后电泳验证,排除质粒污染,并克隆测序,用Fisher精确检验和χ2检验分析两者阳性率的差异。结果牧羊犬外周血单核细胞和脑组织BDV p24检测的阳性率分别为5%和9%;PBMC组和BT组BDV p24检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论BDV在脑内持续感染,但以RT-PCR对外周血单核细胞BDV p24片段的检测有可能替代脑组织BDV检测,作为大规模流行病学调查的手段。