卡波西肉瘤相关疱疹病毒诱导代谢重编程的致瘤机制研究进展

卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是一种与多种类型人类恶性肿瘤密切相关的致癌γ疱疹病毒。KSHV相关肿瘤的抗病毒药物局限,患者对常用的抗病毒药物存在明显的异质性,且并不总是对KSHV诱发的疾病有效,因此亟需寻找不同分子机制的合适靶点来治疗KSHV相关疾病。KSHV通过基因及编码的致癌蛋白、信号通路直接或间接调控糖酵解代谢与氨基酸代谢,通过促进脂肪酸合成和过氧化物酶体对脂质代谢进行调控,进而促进KSHV潜伏裂解期病毒粒子复制、存活、转化和诱导血管生成等影响肿瘤的发生和治疗效果。此外,靶向KSHV诱导代谢过程中的基因、信号通路、代谢调节因子和代谢物在有关体内体外实验的研究中,有显著的抗病毒和抑瘤效果,表现出具有成为治疗靶点的潜力。对KSHV诱导代谢重编程的致瘤作用及机制的认识可以为其相关疾病的治疗提供理论依据。本文对KSHV诱导糖酵解代谢、氨基酸代谢和脂质代谢发生的异常改变和分子机制,以及基于KSHV诱导代谢重编程的相关潜在治疗靶点进行了综述。

藤茶提取物对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制及相关淋巴肿瘤细胞生长活性的影响

目的:观察藤茶水提取物(AGE)对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解复制的影响,检测AGE抗KSHV相关淋巴瘤的安全性和细胞特异性,探索其可能的细胞通路机制。方法:采用组织型纤溶酶原激活剂(TPA)诱导人卡波式肉瘤相关疱疹病毒感染细胞系(BCBL-1)中的KSHV裂解复制,用AGE制备的低、中、高浓度溶液处理48~72 h,随后收集细胞样品,逆转录PCR(RT-PCR)检测KSHV潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45以及晚期基因K8.1的转录水平;实时荧光定量PCR检测KSHV子代病毒含量;蛋白质免疫印迹法(WB)检测KSHV潜伏蛋白LANA、裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达及KSHV裂解复制中相关信号通路蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 MAPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活化水平;噻唑蓝比色法(MTT)检测AGE对BCBL-1和正常外周血单个核细胞(PBMC)的细胞毒性。结果:与对照组比较,低浓度AGE对潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45的转录无明显抑制作用,对晚期基因K8.1的转录具有轻微的抑制作用(P<0.05);中浓度AGE对LANA、RTA和ORF45的转录具有轻微的抑制作用,并显著抑制K8.1的转录(P<0.05,P<0.01);高浓度AGE对LANA、RTA的转录无明显抑制作用,但显著抑制即时早期基因ORF45和晚期基因K8.1的转录(P<0.01)。20μg/mL浓度AGE能抑制73%子代KSHV颗粒的产生。与对照组比较,低、中、高浓度AGE对潜伏蛋白LANA的表达抑制均不明显,但对裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达均有不同程度的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001),且呈剂量依赖性抑制。低、中、高浓度的AGE对Akt的磷酸化均没有明显的抑制作用,但对mTOR(2448)、ERK1/2和p38 MAPK(180/182)的磷酸化均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.001)。100μg/mL的AGE显著抑制BCBL-1细胞的生长,最大细胞抑制率为67.7%,AGE对PBMC最大细胞抑制率为37.0%。BCBL-1细胞在潜伏期和裂解期的半数毒性浓度(CC50)分别为(25.7±0.5)μg/mL和(31.8±8.6)μg/mL,AGE对KSHV子代产生的半数抑制浓度(IC50)抑制作用小于10μg/mL,PBMC的CC50为49.54μg/mL。结论:高效低毒的天然植物药藤茶是潜在的治疗KSHV感染和相关淋巴瘤的有效药物来源,其抗KSHV作用可能与抑制ERK/MAPK/mTOR通路活化有关。

卡波西肉瘤免疫相关机制及免疫治疗研究进展

卡波西肉瘤是一种与免疫抑制、卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)感染及遗传易感性等因素有关的多中心性肿瘤。KSHV可作用于宿主免疫系统,通过调节模式识别受体、补体系统及免疫细胞功能活性等方式来促进卡波西肉瘤的发生发展。基于对卡波西肉瘤免疫相关机制的研究,抗血管生成免疫调节剂、细胞因子及免疫检查点抑制剂等免疫疗法有望成为预防及治疗卡波西肉瘤的新方法。该文将重点阐述KSHV作用于宿主免疫系统的致病机制以及卡波西肉瘤免疫治疗临床策略。

卡波西肉瘤相关疱疹病毒潜伏抗原的细胞内抗体在淋巴细胞内抑制病毒持续感染

据中国药网12月27日报道（原载Blood，1 December2005，Vol．106，No．12，PP．3797-3802．），卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）潜伏相关核抗原1（LANA1）在KSHV感染B细胞后病毒游离基因的维持和分离过程中是必不可少的。

湖北地区普通人群卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学分析

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)可导致人类产生卡波氏肉瘤(KS),即AIDS病人最为常见的肿瘤。广泛的流行病学研究显示,KSHV的流行与KS相似并呈现明显的地域分布型。为调查KSHV在汉族普通人群中的感染情况,我们以KSHVORF65编码的小衣壳蛋白(smallcapsidprotein)为抗原,采用酶联免疫(ELISA)分析方法,对湖北地区560例汉族普通人群血清样品进行了KSHV抗体检测。在检测的560份血样中,KSHV抗体总阳性率为5.2%,其中,男性阳性率为5.7%,女性为4.5%。统计学分析显示,KSHV感染率在男女性别上无差异(P=0.542),但与年龄有一定的相关性:10岁以下儿童群体较之10岁以上人群KSHV感染率具有显著的统计学差异(P=0.006,OR=6.692,95%CI=1.710-26.198);60岁以上的老年人群KSHV感染率有上升趋势,但无统计学明显差异(P=0.052)。上述结果表明,KSHV在这一地区的流行与西方成年人群的感染率相似,但在儿童群体中的相对较高的感染率与一些非洲地区的接近。由此提示在该群体可能存在特殊的传播模式。

KSHVmiRNA在卡波西肉瘤中的研究进展

miRNA是一类长约23个核苷酸非编码的小分子RNA。它广泛存在于多细胞生物中。miRNA通过基因转录后与靶mRNA3＇UTR互补结合,使靶mRNA降解或抑制蛋白质翻译。它们参与信号转导、增殖、凋亡、侵袭或肿瘤血管形成,在肿瘤学、病毒学、神经生物学、胚胎发育等领域有许多成熟研究。研究表明,miRNA参与了肿瘤相关的许多重要基因的表达。

kshv-mir-k12-1-5p靶向调控CDKN1A影响卡波西肉瘤的细胞周期

目的研究kshv-mirT12VTp通过靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1 A(CDKN1A)影响卡波西肉瘤(KS)的细胞周期&方法生物信息学软件预测kshwmu-kl2NVp是否有CDKNlA的结合位点;双荧光素酶实验检测kshv-mir-k12-1-5p是否靶向结合CDKNlA;将kshv-mir-k12-1 Vp模拟物(mimic//抑制物(inhibitor)分别转染到卡波西肉瘤细胞株(SLK)中,Western blot和qRTTCR方法检测kshv-mir-k12-1-5p对CDKNlA的调控作用;PI法检测kshe-mU-k12-1-5p对KS细胞周期的影响&结果MiOee靶基因预测软件分析显示:kshwmiRkl2VTp与CDKNlA的3,非翻译区(3PTR)有结合位点;荧光素酶活性结果分析证实kshe-mi e-k12-1-5p的作用合位点(P<0.01);Western blot和qRTTCR结果显示:在蛋白水平和mRNA水平上,kshwmiRkl2NTp可显著降低CDKNlA的表达水平(P<0.01);PI实验结果显示:与其余各组比较,k/wmio kl2NTp mimics组PI值(51.43土0.75%)最高(P<0.01),能加速KS细胞周期进程;与其余各组比较,kshwmiRkl2N-5p inhibitor组PI值(3274±1.28)%最低#P<0.01),能减慢KS细胞周期进程&结论CDKNlA是kWiwmiRkl2NTp的靶基因,kshe-mi e-k12-1-5p通过靶CDKN1A的表达影响卡波西肉瘤的细胞周期.

卡波济肉瘤相关疱疹病毒/人类疱疹病毒8型研究进展

本文综述1996年以来对卡波济肉瘤(KS)相关疱疹病毒(KSHV)/人类疱疹病毒8型(HHV-8)的流行病学、人体内病毒分布、细胞模型及溶细胞型生长培养系统的建立,电镜超微结构,血清学检测及传播途径等方面的研究成果。

TLR4在KSHV感染的卡波西肉瘤中表达的研究进展

TLR4(Toll-like receptor 4)是Toll样受体的一个重要的组成成员,是革兰氏阴性细胞壁成份脂多糖(LPS)的识别受体。活化TLR4将诱导产生一系列炎症介质,包括细胞因子、趋化因子等从而产生强有力的炎症反应,TLR4在抗细菌,抗病毒的炎症反应中,以及在应激状态下均发挥重要作用。TLR4在KSHV(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,卡波西肉瘤相关疱疹病毒)感染的卡波西肉瘤中也有表达,本文就TLR4在KSHV感染的卡波西肉瘤中的信号转导机制及研究进展做一综述。

潜伏期相关核抗原在卡波西肉瘤发生及靶向治疗中的研究进展

潜伏期相关核抗原(LANA)是卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)关键致癌蛋白,在卡波西肉瘤(KS)的多种致病途径中发挥重要作用,包括参与KSHV与宿主基因共复制、协助建立KSHV基因组表观遗传修饰、调节KSHV潜伏和裂解生命周期、协助宿主细胞逃避免疫监视、促进肿瘤血管生成、调节宿主细胞代谢等,通过影响KSHV和宿主细胞重编程促进KS的发生发展。LANA不仅可作为临床检测KSHV感染的免疫组织化学标志物,更有作为治疗靶点的潜在价值,目前已开展多项靶向LANA的研究,其中利用CRISPR/Cas9技术靶向编码LANA的ORF73基因、以结构为基础筛选及合成的LANA结合位点小分子抑制剂和LANA调节因子抑制剂在相关细胞和动物实验中显示出对KSHV相关恶性肿瘤的治疗潜力,针对LANA的靶点干预可能为及KSHV相关恶性肿瘤抗病毒治疗的新策略。

艾滋病相关性卡波西肉瘤新进展

卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)又称多发性特发性出血性肉瘤,是一种多中心起源的由血管和梭形细胞混合组成的恶性肿瘤。目前,人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染导致的严重免疫功能缺陷而引起各种机会性感染和(或)恶性肿瘤中,KS是最常见的艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)相关肿瘤。KS可分为四种形:古典型KS,由匈牙利医生Moritz Kaposi于1872年报道,

卡波西肉瘤与HHV-8

1卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS) 卡波西肉瘤是一种血管源性肿瘤,又称多发性、特发性出血性肉瘤.自卡波西于1872年报告本病至今已有100余年的历史,有关卡波西肉瘤的病因学一直未能确定.按照Kaposi所描述本病多中心发生,全身皮肤及内脏血管广泛受累,紫色的结节性皮肤皮损.被称为经典的卡波西肉瘤,本病发病极少,主要发生于地中海老年人及出生于东欧的犹太人.经大量的流行病学研究,在经典型的基础上提出了另外三个KS变种:1)地方型KS,主要发生于接近赤道的非洲地区年轻黑人及儿童;2)医源性或移植后KS,主要见于接受免疫抑制治疗或器官移植后的受体;3)流行型或AIDS相关性KS,该变种最初多见于纽约及加州的有免疫抑制的同性恋男性.在这些所有的变种当中,男性发病显著高于女性.医源性KS男女之比是2.3:1,AIDS相关性KS为106:1.自1989年美国CDC报告了90990例艾滋病患者中有13616例KS病例,使人们对KS的重新认识产生了极大的兴趣[1].

KSHV RTA通过上调宿主细胞survivin表达促进病毒子代产生

目的:研究卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)复制及转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)上调宿主细胞存活蛋白(survivin)表达的生物学意义。方法:构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的JSC细胞,用Western blot证实survivin抑制的KSHV阳性细胞成功构建。Survivin抑制的JSC细胞经TPA诱导48 h后,用PCR检测病毒子DNA;在TPA诱导24、48和72 h后分别用realtime PCR和PI染色流式细胞术检测病毒裂解基因ORF57和TK表达及细胞凋亡率。结果:TPA诱导的JSC-shSur细胞与对照组细胞相比,病毒子代产生减少,病毒裂解基因表达下调,细胞凋亡率增加(P <0. 05)。结论:KSHV RTA能够利用survivin信号通路延缓裂解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子代产生。

γ疱疹病毒亚科肿瘤形成相关蛋白的研究进展

疱疹病毒普遍存在于动物中,分为α、β、γ 3个亚科.γ亚科的多种病毒都具有诱导宿主形成肿瘤的能力.本文讨论了EB病毒、卡波西肉瘤相关疱疹病毒和鼠猴疱疹病毒等3种病毒中参与细胞转化、信号转导、病毒基因组复制和细胞增殖相关基因的结构和功能.

circRNA_0001400/RELL1调控激活丝裂原激活蛋白激酶信号通路在卡波西肉瘤发生发展中的作用研究

目的探讨人环状RNA 0001400(hsa_circ_0001400)及其线性转录物RELL1在卡波西肉瘤(KS)发生发展中的作用机制。方法采用人KS相关疱疹病毒(KSHV)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并鉴定感染是否成功。取对数生长期HUVEC分为3组:HUVEC组(未感染的HUVEC)、KSHV+HUVEC组(0.5感染复数的KSHV感染HUVEC)、MAPK抑制剂组(0.5感染复数的KSHV感染HUVEC6 h后,再用1μmol/L MAPK抑制剂处理),细胞计数试剂盒(CCK8)和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖能力及凋亡情况。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹法检测HUVEC组与KSHV+HUVEC组细胞中hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1、鼠肉瘤病毒癌基因同源物(RAS)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的转录和蛋白表达水平。收集5对KS组织及瘤旁组织,并在KS组织样本中验证上述基因mRNA表达。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及t检验等。结果与未感染的HUVEC相比,感染KSHV 48 h后HUVEC变圆,生长更密集。感染KSHV的HUVEC可检出KSHV裂解激活基因ORF50与潜伏态基因LANA的mRNA表达,其表达水平均高于未感染的HUVEC(均P<0.001),KSHV成功感染HUVEC。在培养24~72 h内随培养时间延长,KSHV+HUVEC组细胞增殖率逐渐升高,而MAPK抑制剂组细胞增殖活力明显受到抑制;3组48 h时总凋亡率差异有统计学意义(F=673.98,P<0.001),且MAPK抑制剂组细胞总凋亡率明显高于KSHV+HUVEC组和HUVEC组(均P<0.001),而KSHV+HUVEC组与HUVEC组差异无统计学意义(P>0.05)。qRT-PCR结果显示,KSHV+HUVEC组hsa_circ_0001400、RELL1、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)、MAPK11、细胞外信号调节激酶(ERK)-2 mRNA表达量均高于HUVEC组(均P<0.05),而两组间ERK1 mRNA表达量差异无统计学意义(t=0.92,P=0.410)。Western印迹法检测显示,KSHV+HUVEC组RELL1、KRAS、MAPK11、ERK1、ERK2蛋白表达量均明显高于HUVEC组(均P<0.01)。KS组织中RELL1、ERK1、ERK2 mRNA表达量显著高于瘤旁组织(均P<0.05)。结论KSHV感染后,可能通过诱导hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1表达上调,激活MAPK信号通路,从而调控KS的发生发展。

高通量测序技术在卡波西肉瘤研究中的应用进展

高通量测序技术,又称二代测序技术,与传统第一代测序技术相比,具有高通量、高分辨率、低成本等优点,已被广泛用于多种疾病和病原微生物学的研究,包括肿瘤及肿瘤相关病毒学领域。高通量测序可通过全面分析复杂的病毒和宿主基因组,探索新的基因亚型及功能,挖掘与病毒发病机制相关的途径,为相关疾病的诊治提供诊疗依据。卡波西肉瘤是一种内皮细胞源性的多灶性肿瘤,卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus, KSHV)为其发病的关键因素,其致病机制目前尚不明确,卡波西肉瘤具有明显地域分布特点,不同地区KSHV具有不同的基因型特征,高通量测序技术目前已被用于KSHV和卡波西肉瘤基因检测以及KSHV分型等研究,该文对其应用及发现进行综述,为卡波西肉瘤发病机制研究及临床诊治提供参考。

新疆维吾尔自治区艾滋病患者胃肠道卡波西肉瘤与人类疱疹病毒8型的相关性

卡波西肉瘤是一种较少见的以梭形细胞增生和血管瘤样结构为特征的恶性肿瘤 .研究发现 ,卡波西肉瘤是艾滋病最常见的并发症和致死原因 ,近年来艾滋病相关卡波西肉瘤发生率明显增多 ,常累及淋巴结、口腔黏膜、胃肠道、肝脏、脾脏、肺脏、心脏和骨骼等.在 HIV感染的卡波西肉瘤患者体内发现了人类疱疹病毒8型（human herpesvirus 8 ,HHV-8） ,该病毒具有的潜伏性和裂解性是感染后引起卡波西肉瘤的重要特性.目前 ,通过DNA、RNA 及蛋白表达等分子生物学检测 ,HHV-8 的检出率〉70％.目前国内外对艾滋病相关卡波西肉瘤与 HHV-8的研究大多集中在口腔、皮肤黏膜等器官 ,胃肠道卡波西肉瘤与 HHV-8的相关性研究鲜见报道.本研究检测了新疆维吾尔自治区艾滋病患者胃肠道卡波西肉瘤组织中HHV-8的表达 ,以探讨HHV-8感染与胃肠道卡波西肉瘤之间的关系.

卡波西肉瘤相关疱疹病毒编码vFLIP基因真核表达载体的构建

目的构建卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)真核表达载体,并转染入293T细胞中进行表达鉴定。方法据GenBank中KSHV编码vFLIP基因核苷酸序列人工化学合成"vFLIP"的碱基序列,在5′端下添加XhoI酶切位点,3′端添加BamHI酶切位点,合成的碱基序列经酶切克隆进真核载体GV144,经双酶切和测序验证,成功构建G-vFLIP真核表达载体,将该质粒转染293T细胞,通过转染后细胞内荧光蛋白的表达和实时荧光定量PCR鉴定转染后KSHV-vFLIP在胞内的表达。结果通过对构建质粒限制性内切酶产物进行基因测序证实成功构建了携带vFLIP基因的真核表达载体G-vFLIP,G-vFLIP真核表达载体转染293T细胞,24h后在荧光显微镜可观察到细胞表达绿色荧光,提取细胞总RNA进行逆转录,293T细胞中G-vFLIP组vFLIP mRNA的表达水平是GV144组的9 355 080.705倍(P<0.05)。结论成功构建了KSHV-vFLIP真核表达载体,转染后在293T细胞中初步获得表达。

杭州地区部分人群卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染状态和传播方式

卡波西肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s sarcoma—associated herpesvirus，KSHV）即人类疱疹病毒．8（HHV-8）感染与临床上卡波西肉瘤（KS）、原发性渗出性淋巴瘤（PEL）、多中心Castleman’s病（MCD）有关。KSHV感染在我国境内的流行病学调查数据还十分有限，其有关传播的确切方式目前还不清楚，为初步了解我国人群KSHV感染状态和主要传播途径，

卡波西肉瘤相关疱疹病毒与宿主免疫在卡波西肉瘤发病中的作用机制及免疫治疗

卡波西肉瘤是一种软组织多发性色素性血管瘤,其病因尚不明确,其发生发展与卡波西肉瘤相关疱疹病毒相关。卡波西肉瘤相关疱疹病毒可通过干扰模式识别受体、补体系统或直接作用于免疫细胞逃避宿主免疫系统,从而在卡波西肉瘤的发生与发展中起重要作用,免疫调节剂、靶向药物及疫苗等免疫治疗有望成为预防及治疗卡波西肉瘤的新方法。