重组大肠杆菌产卤代烷脱卤酶的发酵条件优化

对产卤代烷脱卤酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-DhaA进行发酵优化以提高其表达量。该研究从TB培养基出发,通过单因素实验与响应面实验在摇瓶水平上对培养基各成分进行优化;其次,在最优培养基的基础上对发酵的工艺条件进行优化;最后,在5 L发酵罐中进行了初步放大验证。结果表明,最优的培养基组成为:甘油10 g/L,酵母粉23 g/L,蛋白胨14 g/L,MgSO_( 4)·7H_(2)O 1.3 g/L,ZnSO_( 4)·7H_(2)O 0.1 g/L,酶活力可达到(1182.94±10.86)U/L,较初始培养基提高了94%;最优的发酵工艺条件为:接种量5%,装液量40 mL/250 mL,37℃培养至OD_(600)为1.8时加入终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于20℃诱导22 h,酶活力可达到(3585.83±15.02)U/L,提高至未进行优化前的5.87倍;5 L发酵罐初步放大验证实验中,酶活力最高达到(9682.62±191.16)U/L,提高至摇瓶水平的2.7倍。通过在摇瓶水平对发酵培养基与工艺进行优化,以及在5 L发酵罐中进行放大验证,极大地提高了卤代烷脱卤酶的酶活力,为放大生产奠定了基础。