饵料对卤虫幼体生长、存活和营养组成的影响

卤虫是水产动物重要的生物饵料,本研究分别采用酵母、小球藻藻粉和发酵虾片等3种饵料投喂卤虫无节幼体,探讨饵料对卤虫幼体生长、存活和营养组成的影响。结果表明:经过6 d的养殖,发酵虾片组卤虫幼体生长最快,其平均体长显著大于小球藻藻粉组和酵母组(P<0.05);酵母组卤虫幼体存活率最低,小球藻藻粉组与发酵虾片组存活率差异不显著(P>0.05)。相比卤虫无节幼体,养殖6日龄的各饵料组卤虫幼体的粗蛋白质含量显著提高(P<0.05),但粗脂肪的含量则显著降低(P<0.05),其中小球藻藻粉组和发酵虾片组卤虫幼体的蛋白质含量显著高于酵母组(P<0.05);发酵虾片组卤虫幼体的粗脂肪含量显著高于小球藻藻粉组和酵母组(P<0.05);相比小球藻藻粉组和酵母组,发酵虾片组卤虫幼体的氨基酸总量和必需氨基酸总量均最高;各试验组检测到较高含量的EPA,但均未检测到DHA;发酵虾片组卤虫幼体的总脂肪酸含量和多不饱和脂肪酸含量显著高于小球藻藻粉组和酵母组(P<0.05),而小球藻藻粉组卤虫幼体的HUFA、EPA含量明显高于酵母组和发酵虾片组(P<0.05)。综上所述,发酵虾片和小球藻藻粉相较于酵母具有卤虫营养强化的优势,可用于卤虫的养殖生产。

无效基因fruitless参与卤虫Artemia franciscana的生殖调控研究

fruitless(fru)是在昆虫与甲壳动物求偶、交配行为以及生殖发育过程中发挥关键作用的基因。卤虫不仅是水产育苗的重要开口饲料,而且是生物学研究的重要实验生物。本实验通过对卤虫Artemia franciscana转录组的筛选,获得了fru基因的开放阅读框(ORF)并进行生物信息学分析,利用qPCR技术研究了它在卤虫生殖腺发育的不同阶段的表达情况,最后利用RNAi显微注射技术,深入探索了它的功能。经过生物信息学分析,fru基因的ORF长度为1215 bp,其中包含了404个氨基酸,其分子量和等电点分别为45.19 kDa和5.28,属于酸性亲水性蛋白,且不含信号肽和跨膜结构;结构域预测显示fru存在BTB_POZ和HTH两个结构域,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷组成,三级结构与其对应。qPCR结果显示,fru基因的表达量在卵囊的晚期胚胎中表现出明显的增加趋势,其表达量显著高于其他发育阶段(P<0.01);而在精巢的未成熟期,fru基因的表达量也有所增加,其表达量显著高于成熟早期、中期和晚期(P<0.01)。经过RNA干扰,我们发现fru基因的表达量有了显著的下降(P<0.01),并且经过受到干扰的雌虫后代都为休眠卵。这表明fru基因对于A.franciscana的生殖和发育有着重要的影响,甚至可能是影响卤虫繁殖方式的关键因素。通过本次研究,我们获得了关于fru基因在卤虫生殖发育中的作用及其相关分子机制的重要信息,可以帮助我们更好地理解这一重要的生物学过程。

两种不同生境卤虫肠道微生物差异及其对宿主环境适应性的影响

卤虫(Artemia)是生存在高盐水体中的小型甲壳动物,其能够耐受多种极端环境,并可在不同的栖息地展现出不同的生理适应性,然而目前对于不同海拔地区卤虫肠道微生物组成及其与卤虫环境适应机制了解甚少。采用16S rRNA高通量测序和代谢组学技术,首次对来自高海拔地区的拉果错卤虫(A.tibetiana)和低海拔地区的渤海湾卤虫(A.franscicana和A.parthenongenetica的混种)的肠道菌群进行分析。结果显示,变形菌门(Proteobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)和弧菌属(Vibrio)的丰度在拉果错卤虫肠道内显著升高,而嗜盐乳杆菌属(Halolactibacillus)、玫瑰变色菌属(Roseovarius)等的丰度在渤海湾卤虫肠道内更有优势。代谢组学分析表明,与低海拔的渤海湾卤虫相比,拉果错卤虫参与的“抗生素生物合成”和“不饱和脂肪酸的生物合成”代谢途径明显富集,戊丙酯菌素、玫瑰黄素以及脂肪酸合成所必需的二十碳五烯酸(EPA)、α-亚麻酸、脂肪酰辅酶A等代谢物显著积累(P<0.05)。这些代谢物的积累可能有利于增强拉果错卤虫适应高海拔恶劣环境的能力。研究结果揭示了在高低海拔两种不同生境中的卤虫在肠道微生物群落组成和肠道代谢产物方面均存在显著差异,从而为不同生境卤虫的环境适应机制提供重要见解。

孤雌卤虫雌激素相关受体基因(ERR)的表达特性分析

雌激素通过其相关受体进而影响动物的生殖发育与成熟。为了探究雌激素相关受体基因ERR在孤雌卤虫卵巢发育和成熟过程中发挥的作用,本研究对孤雌卤虫(Artemia parthenogenetica)的ERR基因进行了克隆及相关生物信息学分析,并对该基因在不同组织(卵巢、头部、躯干)和卵巢在不同发育时期〔卵黄发生早期(early oocytes,EO)、卵黄发生晚期(late oocytes,LO)、早期胚胎(early embryos,EE)、晚期胚胎(later embryos,LE)〕的表达特征进行了探究。结果显示,ERR基因的开放阅读框(ORF)长1536 bp,共编码521个氨基酸,编码蛋白质的相对分子质量和等电点分别为5.7114×10^(4)和5.06,该蛋白质具有两个结构域,没有信号肽和跨膜结构。蛋白质的二级结构主要以无规则卷曲(46.97%)和α-螺旋(40.7%)为主,三级结构与二级结构的结果一致。在NJ系统进化树中,孤雌卤虫(A.parthenogenetica)与大型溞(Daphnia magna)和苏拉威西秀体溞(Diaphanosoma celebensis)最为相近,而与湿木白蚁(Zootermopsis nevadensis)、台湾乳白蚁(Coptotermes formosanus)的亲缘关系较远。表达特征结果显示,ERR基因在孤雌卤虫头部组织中的表达量显著高于卵巢组织和躯干组织中的表达量,且随着卤虫卵巢的发育,表达量逐渐上升,在EE达到最高,随后在LE显著下降(P<0.01)。

光照强度与pH对卤虫卵(Artemia cysts)孵化率影响的响应面法分析

为进一步优化卤虫孵化条件、提高卤虫卵的潜在经济价值,试验采用中心组合旋转设计与响应面法分析光照强度与pH对卤虫卵孵化率的联合效应,利用Design-Expert 12.0分析得到最优试验组合并对预测结果进行验证。结果表明:光照强度与pH的一次效应对孵化率影响达到极显著水平(P<0.01),两者交互效应对孵化率影响显著(P<0.05),二次效应对孵化率影响极显著(P<0.01);随着pH与光照强度的升高,孵化率先升高后降低,越接近中心点孵化率变化量越小;光照强度为2 179 lx、pH为7.9为最适组合,最优孵化率为67.28%。对该试验组合进行验证,预测值与验证结果相符。综上,试验得到最适组合光照强度(2 179 lx)与p H(7.9),经试验验证在该条件下卤虫卵孵化率表现最优,经济效益最高。

盐度、温度突变对渤海湾卤虫无节幼体存活、生长以及机体免疫的影响

本研究以卤虫无节幼体为试验对象,探究了盐度和温度突变对其生长的影响,采用静水试验的方法,研究其存活率、体长以及机体免疫变化。盐度突变试验中,除盐度突变至45外,其余盐度突变组均与对照组存活率、平均生长率存在显著性差异,其中盐度5突变组存活率最低为0,盐度100突变组平均增长率最低为46.12μm/d,卤虫对向高盐度突变比向低盐度突变生存适应能力更强。卤虫无节幼体机体中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)随着盐度突变幅度增大,酶活力先升高后降低,盐度5突变组AKP、SOD酶活力较对照组下降最多,分别下降4.78金氏单位/gprot、0.70 U/mgprot,盐度100突变组ACP酶活力下降最多,下降了7.40金氏单位/gprot,可见向低盐度突变对其酶活力影响较大。温度突变试验中,30℃突变组平均生长率102.28μm/d,存活率为77.78%,仅次于对照组且无显著性差异,其余温度突变均与对照组存在显著性差异,卤虫对向低温突变比向高温突变生存适应能力更强,但生长较慢。卤虫无节幼体机体中AKP、ACP、SOD随着温度突变幅度增大,酶活力先升高后降低,40℃突变组AKP、ACP、SOD较对照组下降最多,分别为9.22金氏单位/gprot、8.76金氏单位/gprot、1.50 U/mgprot,可见向高温突变对其酶活力影响较大。结果表明:盐度、温度突变对渤海湾卤虫无节幼体的存活率、体长增长以及机体免疫具有显著影响。本研究意在找出卤虫无节幼体存活、生长能够适应的盐度、温度突变范围,为卤虫无节幼体人工培育时更好把控盐度、温度范围提供理论依据与有利支持。

驱虫斑鸠菊丸联合卤米松乳膏治疗白癜风临床研究

目的:观察驱虫斑鸠菊丸联合卤米松乳膏治疗白癜风的效果。方法:124例随机分为两组各62例。两组均予卤米松乳膏涂抹,观察组加用驱虫斑鸠菊丸治疗。结果:总有效率观察组高于对照组(P<0.05),治疗3个月后观察组Cu2+、Zn2+高于对照组(P<0.05),两组不良反应发生率比较无统计学意义(P>0.05),观察组复发率低于对照组(P<0.05)。结论:驱虫斑鸠菊丸联合卤米松乳膏治疗白癜风疗效较好,且复发率低、安全性高。

pH对卤虫(Artemia saline)幼体急性毒性初步研究

采用半静水毒性试验法研究pH对卤虫(Artemia saline)幼体急性毒性及半致死毒性时间。通过概率单位法分析pH对卤虫的半致浓度及半致死毒性时间,并估算回归方程与95%置信区间。结果表明:pH对卤虫死亡数量有极显著影响(P<0.01),24、48 h的半致死pH及95%置信区间分别为:5.031(4.791~5.261)、5.345(5.227~5.467),安全pH为6.50;对应H+摩尔浓度分别为:9.311×10^(-6)、4.519×10^(-6)、3.192×10^(-7)mol/L。pH4.8、5.2、5.6、6.0的半致死时间及置信区间分别为22.275(14.286~28.928)、44.986(33.079~55.288)、89.813(79.244~100.231)、131.971(119.987~145.860)h。该研究为水质酸化对卤虫养殖、卤虫的低pH的耐受性研究及海水养殖中的水质管理提供相关参考依据。

用RAPD和AFLP的方法对中国卤虫 (Artemia)种及亲缘关系的研究

利用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）和ＡＦＬＰ（扩增片段长度多态性）技术对不同种及种群卤虫的关系进行分析。 １０１个随机引物对４种卤虫Ａｆｒａｎｃｉｓｃａｎａ、Ａ ｕｒｍｉａｎａ、Ａ ｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｌｉｃａ基因组ＤＮＡ进行扩增，平均每个种获得７５１条带，其中４５８条带为多态性标记，每个引物提供平均７４个标记信息，聚类结果表明Ａ．ｓｉｎｉｃａ是不同于其他旧大陆两性生殖卤虫的一个独立的种。对来自 １５个种及品系的卤虫的 ＡＦＬＰ分析显示了非常好的遗传多态性，采用 １２对引物检测到 ５９４条带，其中 ４８０个为多态性标记。聚类结果表明来自西藏的两性生殖卤虫为不同于中国内陆两性生殖卤虫的新种。而孤雌生殖卤虫在进化过程中可能是多源的，中国内陆和沿海的孤雌生殖卤虫是沿着不同的途径进化的，内陆和沿海的孤雌生殖卤虫可能为不同的种。

山东盐田及新疆盐湖卤虫(Artemia parthenogenetica)生物学测定值的比较

从山东的盐场和新疆的盐湖采集了卤虫卵,进行了干燥、吸水和去壳的卵径、壳厚、无节幼体体长、染色体数目的生物学测定。按照文献[12]的分类,上述研究的卤虫,均属于第二类的孤雌生殖品系。盐湖的卤虫卵吸水和去壳后比盐场的卤虫卵大。而达板城东盐湖的无节幼体是最短的。各盐场的卤虫有2倍体、4倍体及5倍体,艾比湖的卤虫有2倍体和4倍体,达板城东盐湖只有4倍体。

温度对中国卤虫（Artemia sinica）种群的影响

本文采用生命表和数值模型分析等方法，对中国卤虫（Ａｒｔｅｍｉａｓｉｎｉｃａ）的温度特性做了研究。１．孵化发育起始温度９．０７℃，幼虫发育起始温度９．０７℃。有效积温（℃·ｄ）前者为０．９２１±０．９７９，后者为２０５．２６±２４．１，平均世代有效积温４５８．４±３９．６。２．各项生命表参数均与温度呈显著的函数关系，其适温范围基本介于１８─３４℃，最适点介于２６．５─２８．５℃，种群增长倍数＞２的温度范围在１８─３４℃。３．在山西盐池水域，该卤虫的年世代数为６．２±０．６２个世代、第２─５个世代是种群生产力高峰期。在此期间种群的加倍时间＜１５ｄ．内禀增长率＞０．０４ｄ￣（－１）。

卤虫(Artemia salina)卵孵化条件、网箱孵化和幼体收集时机的研究

本文研究了温度、盐度、pH和光刺激对卤虫卵孵化的影响,提出了本品系卤卵大量孵化的最适孵化温度、盐度和pH控制范围,并就孵化时对卤虫卵进 行室内自然光刺激持续的时间和阶段进行了试验,发现光刺激也可在孵化前进行。本试验首次应用23cm×23cm×40cm的网箱进行卤虫卵的孵化,其效果比相同水体的水泥池约提高一倍。本文还从无节幼体的活力、孵化水质的变化和孵化高蜂期等方面,探讨了卤虫卵大量孵化时无节幼体的收集最有利时机。

正交法优化废弃卤虫冻干保护剂

为提高真空冷冻干燥废弃卤虫的品质,通过单因素实验和正交实验设计,研究了不同质量分数海藻糖、甘露醇、蔗糖和精氨酸对废弃卤虫冻干保持原有营养成分的影响,确定适合废弃卤虫的最佳冻干保护剂配方。结果表明,4种物质的保护效果依次为海藻糖>甘露醇>蔗糖>精氨酸;最佳保护剂配方为20%海藻糖+15%蔗糖+8%甘露醇+2%精氨酸。加入冻干保护剂后,二十二碳六烯酸(DHA)含量为4.8 g/kg,二十碳五烯酸(EPA)含量为2.2 g/kg,维生素C含量为38.3 mg/kg,保存率均超过90%。

中国卤虫(Artemia sinica)早期胚胎发育相关基因表达序列标签(ESTs)分析

以mRNA差异显示技术分析了中国两性生殖卤虫早期胚胎发育相关基因的表达序列标签(ESTs),共回收了2000条差异条带并进行了克隆、测序,在GenBank/DDBJ/EMBL数据库中用BLASTX和BLASTN软件分别与NCBI上的非冗余核酸序列数据库进行同源性比对,得到分值较高、长度在100bp—2kb以内的ESTs序列133条。所发现的133条ESTs的生物学功能分类为:能量代谢占24%、细胞生长、分裂相关基因占23%、RNA相关占17%、体节形成占12%、蛋白质合成占3%、转录因子占3%、离子转运占5%、细胞信号转导占4%、未知占9%。对所发现的ESTs进行了RT-PCR测定,排除假阳性能够提供足够数量的信息用于获取其全长cDNA,进而获得其全长基因序列以用于功能研究。另外,研究发现了包括小热休克蛋白基因家族、Hox基因家族的abdA和Dfd基因、A-trh基因(排盐器官及盐调节基因)、HIF(缺氧诱导因子)、CK-M2(肌肉型磷酸激酶基因)和GRP基因(富甘氨酸蛋白基因)等20个具有明显功能的相关基因的ESTs和完整基因序列和开放阅读框(ORF)。经初步推断这些ESTs和基因的功能大多为与卤虫发育的生理、生化相关的基因有关。所研究的133条ESTs基本代表了卤虫早期胚胎发育相关功能基因的表达谱。

肼与苯肼对卤虫Artemia Salina的毒性研究

采用卤虫对肼与苯肼的毒性作用进行了测定,结果表明苯肼的毒性明显大于肼.肼24hLC_(50)值为0.167mg/L(0.153～0.180mg/L),48hLC_(50)值为0.088mg/L(0.068～0.120mg/L),苯肼24hLC_(50)值和48hLC_(50)值分别为0.041mg/L(0.039～0.042mg/L),及0.015mg/L(0.0114～0.0202mg/L),结果表明卤虫生物测试技术在海水监测中是一个敏感、快速和廉价的方法.

废弃卤虫冻干工艺研究

本文以废弃卤虫为试验材料,采用电阻法测定废弃卤虫冻干过程的共晶点和共熔点温度,研究物料厚度、预冻温度、真空压力、冻干时间对废弃卤虫冻干品DHA含量和复水比的影响,并进行各工艺优化集成验证试验。结果表明,废弃卤虫冻干过程的共晶点和共熔点温度分别为-38.0、-26.9~-26.0℃,废弃卤虫最佳冻干工艺为物料厚度6 mm、-40℃预冻、真空压力70 Pa、冻干时间10 h,且加热板温度走势设置为0~40 min,由30℃上升至60℃,60~240 min稳定在60℃。在上述最佳工艺条件下,测得废弃卤虫冻干品DHA含量和复水比分别为3.1 g/kg、12.6。

PCR法克隆卤虫（Artemia franciscana） Artemin基因上游调控序列

利用限制性内切酶(Dra I和Hpa I)对卤虫(Artemia franciscana)基因组DNA进行酶切后，连上接头构建基因组“DNA文库”(即未克隆，带接头的DNA片段)，再以TD-PCR(Touch-down PCR)的方法扩增卤虫的Artemin．基因的上游调控序列，得到一段大为750bp的片段，将这一上游序列片段克隆到pMDl8-T载体中，以获得包括启动子、增强子等顺式作用元件在内的Artemin基因的上游调控序列，为进一步研究Artemin基因的表达模式及其功能提供依据。

黄旗海产卤虫(Artemiapathenogenetica)成虫干片蛋白质、脂肪酸、氨基酸和矿物质的分析

对黄旗海产卤虫（Ａｒｔｅｍｉａｐａｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ）成虫干片的蛋白质、脂肪酸、氨基酸和部分矿物质进行了初步分析．结果表明，粗蛋白含量为５４．１４％，脂肪酸中亚麻酸的含量为１５．０７％，蛋白质中的１７种氨基酸和部分矿物质的含量也很丰富，由此说明从盐碱湖中开发利用卤虫资源，使之成为新的食品源和优质饲料有着广泛的前景．

基于卤虫模型的麻醉剂评价方法

卤虫(Artemia spp.)在麻醉剂药效评价中有较大应用前景.从麻醉剂的剂量分析、毒理学分析、行为学分析、生物标志物分析等方面,梳理了以卤虫作为麻醉剂评价模型的具体应用,构建了基于卤虫模型的候选麻醉剂筛选及麻醉效力评价的工作模型,以期为新的麻醉剂筛选及评价提供思路.

饲喂富硒酵母强化卤虫无节幼体对大口黑鲈仔鱼的生长、成活率、脂肪酸组成、肝肠组织结构及抗逆性的影响

为探究饲喂富硒酵母强化卤虫无节幼体对大口黑鲈仔鱼的生长、存活率、脂肪酸组成、肝肠组织结构以及抗逆性的影响,设置了0 (Y-se0)、5 (Y-se5)、10 (Y-se10)、15 (Yse15)、20 mg/L (Y-se20)酵母硒添加浓度对卤虫无节幼体进行硒营养强化,并使用强化后的卤虫饲喂养殖在玻璃缸中的3 000尾大口黑鲈仔鱼(2.1 mg/尾,200尾/缸) 20 d。饲养实验结束后,将每缸10尾仔鱼放入35℃恒温水浴缸中进行急性温度胁迫试验。结果显示:(1) Y-se15组的存活率、终末体重、体长以及特定生长率均显著高于对照组,肥满度(CF)在各组间无显著差异。(2) Y-se5组EPA含量显著低于对照组,Y-se5及Y-se15组DHA/EPA值显著高于对照组。(3) Y-se10、Y-se15和Y-se20组肝脏中过氧化氢酶(CAT)活性显著高于对照组,所有处理组肝脏中,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著高于对照组,丙二醛(MDA)含量显著低于对照组,处理组和对照组间总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性无显著差异。(4) Y-se15组肝脏组织空泡化现象较轻,酵母硒添加组的肠道绒毛长度显著高于对照组。(5) Y-se15组在35℃应激条件下,存活时间显著高于对照组。研究表明,卤虫无节幼体强化液酵母硒添加浓度为15 mg/L时可显著提高大口黑鲈仔鱼生长、存活率及DHA/EPA水平,增强机体抗氧化以及抗应激能力,改善鱼体健康状况。本研究初步探究了饲喂酵母硒强化卤虫无节幼体对大口黑鲈仔鱼的影响,旨在为进一步完善水生动物苗种开口饵料营养强化技术提供参考,促进水产养殖业高质量发展。