江西省卫氏并殖吸虫病流行病学调查

目的 探讨江西省卫氏并殖吸虫病流行状况及其变化的原因。 方法 选择江西省靖安县、万载县 2个林场和玉山县 1个镇进行流行病学调查和回顾性分析 ,调查卫氏并殖吸虫病中间宿主放逸短沟蜷 (Semisulcospiralibertina)与华溪蟹 (Sinopotamonspp .)、保虫宿主 (猫、犬、果子狸、野猫等 )感染率 ,以及流行区生态环境变化和人群个体行为变化。 结果 卫氏并殖吸虫病流行区中间宿主放逸短沟蜷与华溪蟹平均感染率分别为 0 2 1%和5 4 3 % ,保虫宿主平均感染率为 5 6%。与 2 0年前比较 ,华溪蟹感染率明显下降。 结论 江西省原流行区仍有卫氏并殖吸虫病流行 ,生态环境改变可能导致华溪蟹的感染率下降。

三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫体壁及卵黄细胞超微结构的影响

目的： 观察三氯苯达唑在体内外杀灭卫氏并殖吸虫后， 虫体体壁及卵黄细胞超微结构的变化。方法：将被药物在体内、外杀死的虫体及对照组正常虫体， 按常规方法制成电镜样品， 用扫描和透射电镜观察。结果： 在药物作用下， 体壁的外质膜及基质层裂解消失， 肌肉层有不同程度的坏死， 皮层细胞膜及卵黄细胞膜破坏消失，核膜部份破坏， 核内异染色质凝固、聚边、直至溶解。胞质内的高尔基体消失， 内质网扩张， 线粒体肿胀变性、直至溶解，但对糖原颗粒无明显影响。对体内虫体的破坏比体外严重。结论： 三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫的体壁及卵黄细胞均有明显的破坏作用， 主要破坏细胞核、细胞的膜质结构以及微管系统， 并可使虫体皮层裂解消失。

三氯苯达唑治疗家犬卫氏并殖吸虫感染的实验观察

目的 :观察三氯苯达唑治疗家犬卫氏并殖吸虫病的疗效。方法 :腹腔内注射感染囊蚴10 0个 /犬 ,共 6只。感染后 170 d,治疗组 3犬口服三氯苯达唑 10 0 mg/ kg· d× 2 d。治后逐日粪检以 Stoll法计数虫卵。治后 38d解剖观察犬肺部虫囊和虫体情况 ,并作病理切片检查。结果 :感染后60 d6只犬粪便中均发现卫氏并殖吸虫虫卵。治疗后 7— 14d,治疗组犬粪便中并殖吸虫卵阴转。对照组犬双肺虫囊数分别为 18、2 4和 2 4个 ,检获并殖吸虫成虫分别为 38、51和 4 2个 ;治疗组犬双肺虫囊数分别为 10、7和 4个 ,仅在 1犬中发现 2条较小的成虫 ,其余 2犬未检获并殖吸虫 ,减虫率平均为 98.5%。结论 :三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫有良好杀虫作用。

二倍体型与三倍体型卫氏并殖吸虫同工酶谱的发育变异及其分类学意义

采用垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｖｅｒｔｉｃａｌＰＡＧＥ）法分析比较了二倍体（２ｎ）型与三倍体（３ｎ）型卫氏并殖吸虫童虫、成虫的醛缩酶（ＡＬＤ）、已糖激酶（ＨＫ）和葡萄糖６磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）的同工酶谱，结果显示２ｎ型与３ｎ型卫氏并殖吸虫在不同发育期之间及两型吸虫相应各发育期之间ＡＬＤ、ＨＫ及Ｇ６ＰＤ同工酶谱均显示变异，变异表现为两种方式，一种是在同一个基因座位区的同工酶的酶带数目、迁移位置及活性发生变异；另一种是两型吸虫在有的发育期整个基因座位区无酶带显示。两型吸虫发育同工酶谱的差异反映了两型吸虫在发育进程中编码同工酶的基因遗传背景的差异。这一结果支持了两型卫氏并殖吸虫可为两个独立虫种的观点。

卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

目的 从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。结果 所筛选的阳性克隆插入片段约800bp。DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列。Pw-2重组子特异性表达产物约为32kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别。结论 从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L。

卫氏并殖吸虫染色体制备方法的改进

目的 改进卫氏并殖吸虫染色体的制备方法 ,以利于并殖吸虫染色体核型的分析。 方法 将浙江永嘉地区卫氏并殖吸虫成虫通过秋水仙胺作用后分离睾丸 ,所用试剂均进行预温 ,通过低渗、固定、制片和染色等处理。 结果 浙江永嘉地区卫氏并殖吸虫染色体采用改进后的制备方法 ,效果好。该虫染色体数 2n =2 2 ,核型公式 :2m +6sm +1 4t。 结论 改进后的染色体制备方法操作简便 ,染色体清晰 ,可读性好 ,便于进行核型分析。

卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构的胆碱酯酶组织化学定位

乙酰胆碱酯酶(AChE)的组织化学定位,被广泛用于显示动物神经组织中胆碱能神经细胞的存在。现已证明,多种蠕虫神经组织存在 AChE 活性。关于卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)神经系统结构的较完整资料尚未见报道。为此,我们用 AChE 整体组织化学定位的方法,对卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构进行了研究,报告如下。

二倍体型与三倍体型卫氏并殖吸虫虫体抗原与宿主抗原的观察

用间接免疫荧光抗体法,对鼠体内两种类型卫氏并殖吸虫虫体抗原与宿主抗原做了检测。结果显示两类型童虫与感染同源卫氏并殖吸虫小鼠血清反应后,虫体抗原存在于体表皮层、肠管上皮细胞上;两类型童虫与兔抗鼠红细胞抗体血清反应后,主要在表皮层看到宿主抗原,荧光强度比虫体抗原所示为弱;三倍体型童虫的宿主抗原荧光反应有52.6～60％呈(++),而二倍体型大部只是(+)反应;这种荧光强度的差别在非免疫状态所获的童虫切片上也被看到。

卫氏并殖吸虫感染循环抗原检测方法的建立与应用

用CAg-dot-ELISA法和CAb-ELISA法分别对并殖吸虫病临床诊断患者、并殖吸虫病流行区人群、卫氏并殖吸虫早期感染者及其他寄生虫感染者进行循环抗原和抗体检测。用CAg-dot-ELISA检测70份卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清,阳性29份,敏感性为41.5%(29/70),与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%(5/20)和20%(4/20)的交叉反应,与其他寄生虫感染者血清和健康人血清(60份)均为阴性,特异性为93.6%。CAb-ELISA检测70例卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清阳性67份,敏感性为95.7%(67/70),与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%(5/20)和20%(4/20)的交叉反应,对其他寄生虫感染者血清和健康人血清的特异性为92.1%。CAg-dot-ELISA和CAb-ELISA分别检测并殖吸虫病流行区人群220份血清,阳性率分别为0和3.2%(7/220)。CAg-dot-ELISA法对辅助诊断并殖吸虫早期感染有一定价值。

卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的筛选和免疫反应性分析

目的 初步探讨卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的免疫反应性。方法 应用卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Pw-Ig)筛选噬菌体随机12肽库,对筛选到的抗原模拟表位用ELISA检测其免疫反应性,并与卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwA)进行比较。结果 获得的6个卫氏并殖吸虫抗原模拟表位(即P5、P6、P7、P8、P13、P16)特异性和敏感性与PwA相比差异均无显著性(P>0.05),其中P5、P6和P7交叉反应性明显较PwA低(x2=4.630,P<0.05),其余则与PwA无明显差异(P>0.05)。结论 卫氏并殖吸虫抗原模拟表位对卫氏并殖吸虫病的诊断具有潜在的应用价值,有望代替天然抗原用于卫氏并殖吸虫病的诊断。

卫氏并殖吸虫基因片段的亚克隆及其表达的研究

目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。结果:成功地将文库中2个大小不同的卫氏并殖吸虫基因片段连接到载体中。其中Pw-2重组子特异性表达产物是分子质量约为32ku的蛋白带,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异性识别。结论:成功构建了编码卫氏并殖吸虫特异性抗原的重组克隆Pw-2。

嵌合体型卫氏并殖吸虫在浙江的发现

浙江省宁海县小汀村原为肺吸虫病重流行区，病人多有咯血、咳嗽等症状，痰液中易找到卫氏并殖吸虫卵。从当地溪蟹中收集该虫囊蚴，感染猫或犬获取成虫。将２４个卫氏并殖吸虫成虫的卵巢和睾丸作染色体核型观察，６个虫体（６／２４）的生殖细胞中期图象显示为二倍体型（ｎ＝１１，２ｎ＝２２）；１８个虫体（１８／２４）为嵌合体型，其中９个虫体的生殖细胞染色体数为二倍体／三倍体的嵌合体型（ｎ＝１１２ｎ＝２２／３ｎ＝３３）；另９个的染色体数为二倍体／三倍体／四倍体的嵌合体型（ｎ＝１１，２ｎ＝２２／３ｎ＝３３／４ｎ＝４４）。测量囊蚴１００个，其平均大小为３６０．９±２２．０６３×３５３．７±２１．８６６（ｕｍ）；测量２ｎ／３ｎ／４ｎ嵌合体型成虫的虫卵６０个，其平均大小为８３．６５±３．１５６×４９．０±２．３０９（ｕｍ）。这一结果提示卫氏并殖吸虫嵌合体型可能引起典型的肺吸虫病临床症状。而二倍体／三倍体／四倍体的嵌合体型为我国首次报道。

应用抗PwMJ-SAg单克隆抗体诊断早期和肺外型卫氏并殖吸虫病人循环抗原的研究

在8个抗PwMJ-SAg单克隆抗体,IB_1和IB_4可检测出35例早期卫氏并殖吸虫病、15例肺外型卫氏并殖吸虫病等患者血清循环抗原,阳性率达100％;与25份正常人血清无交叉反应;与15例华枝睾吸虫病、16例姜片虫病、15例日本血吸虫病、16倒马来丝虫病和10例肺结核病等患者血清均无交叉反应,但与15例斯氏狸殖吸虫病中8例患者血清有交叉反应,交叉反应率为53.3％。因此,单克隆抗体IP_1和IB_4可作为诊断早期和肺外型卫氏并殖吸虫病的适宜试剂,并对斯氏狸殖吸虫病亦有一定的诊断参考价值。

六地卫氏并殖吸虫及斯氏狸殖吸虫种间和种内虫体重复DNA序列的比较

从湖南、广东两省六地采集卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫,分别制备各地虫体基因组DNA,用 BamHI、HaeⅢ及 HindⅢ 3种限制性内切酶消化,琼酯糖凝胶电泳后,比较酶切片段长度。结果显示两种虫种间重复 DNA序列带型有明显的差异,而同种虫种不同地区虫体的重复 DNA序列带型则多数相同或完全相同。

不同发育期卫氏并殖吸虫的苹果酸脱氢酶同工酶的研究

本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)技术对卫氏并殖吸虫生活史3个发育阶段:囊蚴、童虫、成虫的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱进行研究。结果表明:从囊蚴到成虫MDH同工酶组份随着发育趋于复杂;在发育过程中,有些同工酶区带持续存在;随着宿主的转换有些区带消失或出现新的区带。定量分析显示同工酶活性随着生长和发育有所增减。结果提示:对发育过程中MDH酶谱的动态观察可部分地显示在遗传基因和寄生环境的双重影响下寄生虫所作出的适应性改变,是并殖吸虫发育生物学研究的有效手段之一。

McAbDot-ELISA检测卫氏并殖吸虫循环免疫复合物

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法，以抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体ＩＦ８Ａ３检测了卫氏并殖吸虫感染犬血清循环免疫复合物动态。感染后１～２ｗｋ可以检测到免疫复合物，３～４ｗｋ阳性滴度逐渐上升，５～６ｗｋ处于较高水平，第８ｗｋ达高峰，然后较快地下降。研究结果表明，卫氏并殖吸虫囊蚴抗原特异的循环免疫复合物具有明显的期特异性；单克隆抗体Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测特异的循环免疫复合物，可用于卫氏并殖吸虫病的早期诊断和活动性感染的诊断。

与卫氏并殖吸虫感染相关的嗜酸性脂膜炎1例

1病历摘要 患儿女，7岁。因游走性皮下结节1个月，于2007年9月5日就诊于我院皮肤科。患儿于2007年8月颈部出现一黄豆大皮下结节，质地中等，无痛痒，未予处理，2周前自行消退。不久腹部亦出现数个相似皮损，渐增至蚕豆大。既往体健，否认有咳嗽、胸痛、头痛、腹痛病史，有生吃螃蟹史。

小鼠白细胞和免疫血清对卫氏并殖吸虫童虫生物学特性的影响

目的 观察小鼠白细胞及免疫血清协同作用对卫氏并殖吸虫童虫的超微结构以及活力与侵袭力的影响。方法 将小鼠白细胞、免疫血清及卫氏并殖吸虫童虫在体外培养进行抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (ADCC)试验 ;分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察童虫的活性或超微结构 ,并通过再感染实验检测经ADCC试验后的童虫对新宿主的侵袭能力。结果 卫氏并殖吸虫童虫与小鼠白细胞及免疫血清共同培养后 ,虫体表面出现肿胀、水泡、破损 ,体棘消失、感觉乳突变形或消失等改变 ,但活力与侵袭新宿主的能力不变。结论 小鼠白细胞在免疫血清协同作用下对卫氏并殖吸虫童虫有一定程度的损伤 ,损伤的部位主要在皮层 ,但不影响其活力及侵袭力。