印楝素A和印楝素B对棉铃虫生长发育的影响

为了明确印楝素A和印楝素B生物活性的差异,选用印楝素A和印楝素B对棉铃虫生长发育的影响进行了比较研究。结果表明:印楝素A和印楝素B对棉铃虫3龄幼虫具有良好的拒食活性,5μg/mL处理48 h对棉铃虫3龄幼虫的拒食率分别为85.17%和69.02%。分别用含有药剂(1μg/mL)的饲料饲喂棉铃虫5龄幼虫,结果表明:印楝素A和印楝素B能够明显抑制棉铃虫5龄幼虫的体重增长,处理14 d后幼虫的体重分别下降50.28%和43.08%,仅有少量个体化蛹,化蛹率分别为26.67%和13.33%。进一步的羽化结果表明:经印楝素A和印楝素B处理的虫蛹均未能完成羽化。综合各阶段试验结果来看,印楝素A和印楝素B的生物活性存在差异,印楝素B对棉铃虫生长发育的抑制作用高于印楝素A。

印楝素A和印楝素B的稳定性比较

印楝种子甲醇抽提物在甲醇+水(体积比为55:5)中于(54±1) ℃下贮存7和14 d,印楝素A的降解率分别为33.59%和54.45%,印楝素B的为11.96%和21.11%;印楝种子甲醇抽提物在(54±1) ℃下贮存7和14 d,印楝素A的降解率为82.35%和94.79%,印楝素B的为20.32%和54.75%;印楝素干粉于(54±1) ℃下贮存14 d,印楝素A和印楝素B的降解率分别为90.15%和81.85%.在(54±1) ℃下热贮7 d,在甲醇、甲醇+水(9:1)和甲醇+印楝油(9:1)中印楝素A的降解率分别为29.65%、44.99%和12.76%,印楝素B的分别为19.68%、25.65%和9.67%.印楝油对印楝素A和印楝素B均有保护作用.

印楝素A和印楝素B的生物活性及增效作用

印楝素A、印楝素B和印楝素A+B(1∶1,m/m)对斜纹夜蛾2龄幼虫具有较好的拒食活性,处理后24 h,拒食中浓度(antifeedant medial concentration, AFC50)分别为0.97 mg/L、2.42 mg/L和1.01 mg/L;印楝素A与印楝素B按质量比1∶1混合后具有增效作用.印楝素A、印楝素B和印楝素A+B对大菜粉蝶3龄幼虫具有一定的拒食活性,处理后24 h,AFC50分别为176.67 mg/L、224.48 mg/L和149.99 mg/L;印楝素A与印楝素B按质量比1.6∶1混合后具有一定的增效作用.3 mg/L印楝素A和印楝素B能延缓斜纹夜蛾的化蛹,降低蛹重,且印楝素B对蛹的影响高于印楝素A.1 mg/L印楝素A与印楝素B能明显降低斜纹夜蛾幼虫的体重,处理后3～5 d,印楝素B对斜纹夜蛾幼虫的体重的影响明显高于印楝素A.

印楝素A和印楝素B生物活性比较

对印楝素A和印楝素B的生物活性进行了研究。在3μg／mL的剂量下处理后24h，印楝素A和印楝素B对小菜蛾3龄幼虫的拒食率分别为85.3％和80.4％；在5μg／mL。的剂量下处理后24h，对棉铃虫3龄幼虫的拒食率分别为94.9％和80.2％。处理后72h，印楝素A和印楝素B对斜纹夜蛾3龄幼虫的LC50分别为1.0μg／mL和3.3μg／mL。印楝素A和印楝素B在3μg／mL的剂量下处理后72h，小菜蛾3龄幼虫的死亡率分别为90.42％和84.11％；在5μg／mL的剂量下处理后72h，棉铃虫3龄幼虫的死亡率分别为99.1‰和100.0％；在0.5μg/mL的剂量下处理后72h，斜纹夜蛾4龄幼虫体重降低率分别为57.5％和72.73％；在0．8μg／mL的剂量下处理后72h,棉铃虫3龄幼虫体重降低率分别为84.1％和80.9％。

印楝素A与印楝素B对粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1-4的细胞毒性

为了明确印楝素A和B活性差异的机理,本研究比较了印楝素A和印楝素B对粉纹夜蛾Trichoplusia ni离体培养胚胎细胞系BTI-Tn-5B1-4的毒性。结果表明：印楝素A与印楝素B对BTI-Tn-5B1-4细胞具有良好的增殖抑制活性,处理后3d,其IC50值分别为2.09μg/mL和9.85μg/mL,印楝素A的细胞毒力显著高于印楝素B。倒置显微镜观察发现,印楝素A和印楝素B处理可导致细胞变形,贴壁能力下降,并出现明显空泡,印楝素A的影响明显高于印楝素B。流式细胞仪检测结果表明,印楝素可导致BTI-Tn-5B1-4细胞体积显著膨大,印楝素A处理细胞体积增大程度显著高于印楝素B;印楝素可以明显影响BTI-Tn-5B1-4细胞膜电位,1.25μg/mL印楝素A和印楝素B处理后3d,细胞DiBAC4（3）荧光强度分别增加88.12%和55.37%,印楝素A的影响显著高于印楝素B。荧光显微镜观察发现,印楝素对BTI-Tn-5B1-4细胞核具有明显影响,印楝素B的影响明显高于印楝素A,印楝素B处理后,细胞核受损细胞数更多,受损程度更严重。结果显示印楝素A和印楝素B的细胞作用机理存在差异,本研究从细胞学水平解释了印楝素的生长发育抑制作用机理。

超高效液相色谱-串联质谱法测定茶叶中印楝素A和B的残留量

茶叶样品（10g）加水20mL浸泡10min后,加乙腈50mL,超声提取5min,加氯化钠5g,振荡,静置分层;取有机相,吹氮至近干,加入丙酮-正己烷（3＋7）混合液2mL溶解残渣。所得溶液经Florisil固相萃取柱净化后进行色谱分离。用BEH C18色谱柱作固定相,以不同体积比的甲醇和0.1%（φ）甲酸溶液的混合液作流动相进行梯度洗脱。质谱分析中采用电喷雾正离子和多反应监测模式。外标法定量,基体匹配制作标准曲线。结果表明：印楝素A和B的质量分数均在2.50-50.0μg·kg-1范围内与相应的峰面积呈线性关系,检出限（3S/N）分别为2.5,5.0μg·kg-1。在3个浓度水平上用标准加入法做回收试验,测得回收率为81.6%-95.1%,相对标准偏差（n=6）为1.1%-3.9%。应用此法分析了3种茶叶样品,其中单枞茶中印楝素的残留量最高。

印楝素类成分对照品的制备与鉴定

[目的]报道一种快速、高效制备印楝素类成分对照品的方法。[方法]采用反相制备高效液相色谱(RP-PHPLC),从印楝粗提物中分离得到10种化合物,并采用NMR和HPLC Q-TOF MS对分离产物进行结构鉴定,通过HPLC检测,外标法或面积归一化法定量。[结果]10种化合物分别是印楝素A(azadirachtin A,AZ-A)、印楝素B(azadirachtin B,AZ-B)、印楝素D(azadirachtin D,AZ-D)、印楝素H(azadirachtin H,AZ-H)、印楝素I(azadirachtin I,AZ-I)以及nimbin、salannin等,10种印楝素类成分对照品的纯度均>98%。[结论]该方法操作简便,可重复进样,适用于制备高纯度印楝素类成分对照品;该对照品可用作印楝素相关产品、制剂质量控制及农产品农药残留检测等实践中的定性、定量依据。

快速溶剂萃取高效液相色谱法测定蔬菜中印楝素残留

[目的]建立了快速溶剂萃取-高效液相色谱法测定蔬菜中印楝素残留量的方法。[方法]样品用甲醇作为提取剂,快速萃取蔬菜中的印楝素,采用高效液相色谱法进行印楝素残留量测定。使用Dionex C18色谱柱,甲醇-水(体积比60∶40)为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长为218 nm。[结果]印楝素A和印楝素B保留时间分别为8.69、11.98 min,在质量浓度为0.1~10.0 mg/L范围内,线性关系良好,线性相关系数分别为0.9997、0.9991。在3个质量分数添加水平范围内,回收率分别为85.7%~94.6%和83.6%~93.9%,相对标准偏差(RSD)分别为2.95%~7.01%和3.62%~7.73%。[结论]该方法操作步骤简单快速、准确度好,适用于蔬菜中印楝素残留的快速检测。