5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞及印迹基因H19效应的初步研究

目的:研究甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,ADC)对人绒毛膜上皮癌细胞株JEG-3细胞的生物学作用,观察JEG-3细胞H19表达变化与滋养细胞增殖、分化和侵袭等行为的相关性,从表观遗传学角度探讨滋养细胞侵袭行为的调控。方法:应用MTT法检测不同浓度5-杂氮脱氧胞苷在不同时相下对JEG-3细胞增殖的影响。体外小室迁移实验观察5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞迁移的影响。荧光定量RT-PCR检测5-杂氮脱氧胞苷作用下JEG-3细胞H19mRNA表达的变化。结果:5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞增殖起抑制作用,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。经100μmol/L5-杂氮脱氧胞苷作用24h后的JEG-3细胞迁移能力明显受限,迁移细胞数较对照组差异显著(P<0.01)。经5-杂氮脱氧胞苷作用后JEG-3细胞中H19mRNA表达增高,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。结论:甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷可致H19mRNA过量表达,并进一步抑制滋养细胞的增殖和迁移能力。H19印迹基因表达上调与滋养细胞增殖抑制和迁移能力降低有关。

两例Silver-Russell综合征的临床特征和H19印迹基因甲基化分析

目的探讨Silver-Russell综合征的遗传学异常，提高对该病的认识并指导临床诊断。方法以2例疑似Silver-Russell综合征患者为研究对象，详细采集病史并进行归纳，同时取其外周血用基因组DNA试剂盒提取DNA并用亚硫酸氢盐转化处理，然后用PCR扩增目标序列，采用焦磷酸测序法检测11P15区的H19印迹基因上游的DMR区的甲基化状态。另收集10例健康儿童外周血标本作为对照组。结果2例患儿的临床特征及辅助检查均符合Silver-Russell综合征临床诊断，所测的H19印迹基因上游的DMR区6个甲基化位点的甲基化水平分别为16％～21％和15％-23％，该区域均表现出低甲基化状态；而正常对照组的6个甲基化位点的甲基化水平为48％～55％，明显高于病例组。结论Silver-Russell综合征临床表现多样，运用焦磷酸测序技术联合甲基化分析操作方便、定量准确，可考虑对临床诊断或疑似Silver-Russell综合征病例运用该技术进行检测。

ES小鼠和ES细胞中H19基因甲基化状态

为探讨印迹基因H19的甲基化状态与ES小鼠胚胎发育之间的关系,以遗传背景相同的正常成年对照小鼠、22只成年ES小鼠和8只新生死亡的ES小鼠以及不同传代次数的ES细胞为实验材料,利用甲基化敏感性限制性内切酶-PCR技术分别检测了其印迹基因H19的5′非翻译区两个位点的甲基化状态。结果表明,发育至成年的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与正常成年对照小鼠之间没有差异,而新生死亡的ES小鼠印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠相比则存在明显差异。推测ES细胞中印迹基因H19所检测位点的甲基化状态与成年ES小鼠以及正常成年对照小鼠之间可能存在差异。

贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表达的影响

目的探讨贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表达的影响。方法选择非小细胞肺癌患者150例,根据患者的治疗方案分为观察组和对照组各75例。对照组基于培美曲塞联合顺铂治疗,观察组给予贝伐单抗联合培美曲塞与顺铂治疗,两组均治疗4个疗程后观察治疗效果、免疫功能、细胞因子及lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平。结果治疗后观察组治疗效果显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C水平均显著下降,且观察组下降更显著(P<0.05);治疗后两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平明显提高,Treg、CD8^(+)细胞水平明显下降,且观察组改善更显著(P<0.05);治疗后两组干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著升高,转化生长因子(TGF)-β水平均显著下降,且观察组改善更显著(P<0.05);治疗后两组印迹基因H19长链非编码RNA(lncRNA H19)、同源盒基因转录长链非编码RNA(lncRNA HOTAIR)水平均显著下降,且观察组下降更显著(P<0.05);两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);结论贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗非小细胞肺癌患者的治疗效果较好,并且可改善机体免疫功能,改善细胞因子水平,降低lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平,在临床上可广泛使用。

密闭培养条件下小鼠早期胚胎Igf2/H19印迹调控区甲基化状态分析

胚胎密闭培养是空间胚胎发育研究的基本条件.本文主要研究密闭培养条件对小鼠早期胚胎发育过程中印迹基因Igf2/H19的印迹调控区(ICR)甲基化水平的影响.应用亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析小鼠2-细胞胚胎在密闭条件下分别培养24h、48h和72h后,相对应的发育阶段胚胎Igf2/H19的ICR甲基化水平,以常规体外培养和体内发育的各阶段胚胎为对照.结果显示,密闭培养条件下,小鼠8-细胞胚胎、桑葚胚和囊胚的Igf2/H19的ICR甲基化水平都低于常规体外培养的结果,且更明显低于体内发育的结果;同时发现,小鼠8-细胞胚胎密闭培养时,Igf2/H19的ICR甲基化水平最低.由此可见,密闭培养会引起小鼠植入前各发育阶段胚胎Igf2/H19的ICR甲基化水平降低,并证明Igf2/H19的ICR甲基化水平可以作为监测哺乳动物早期胚胎发育状况的分子指标.

试探IGF2和H19基因与韦伯综合征的关系

笔者就韦伯综合征(Beckwith Wiedemannsyndrome,BWS)的特征,及IGF2与H19印迹基因各自生物学生性、印迹状况以及与BWS疾病的关系展开了详尽阐述。