皮肤组织印迹杂交法诊断犬利什曼病研究初报

用利什曼病原虫KDNA印迹杂交法对采自甘肃省文县黑热病流行区的30只家犬耳缘皮肤组织印迹样品进行杂交试验。结果30份犬样品中有8份呈现阳性反应,阳性率为26.7％。同时进行骨髓涂片检查,有5只犬查见原虫,阳性率为16.7％。以上两种方法的符合率达76.7％(23/30)。印迹杂交法具有特异性高,取材方便,快速和结果易于观察等优点,在诊断犬利什曼病中有一定应用前途。

Southern印迹杂交技术在畜禽疫病诊断中的应用

Southern印迹杂交技术是一种用于检测特定DNA片段的方法。它是将凝胶上分离的DNA片段转到硝酸纤维素膜上后,再通过同位素标记的单链DNA或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段。此法目前已经广泛的应用于动物疾病的诊断以及DNA指纹分析和PCR产物判断等研究。它通常与其他的检测方法结合应用,为特定DNA片段的检测提供了快速、准确、灵敏的方法。而且在Southern印迹杂交技术的基础上又发展了斑点印迹杂交和狭缝印迹杂交两种杂交方法。目前,在畜禽疾病研究方面,Southern印迹杂交技术主要用于病毒及细菌病的检测和分析,但在寄生虫病方面的应用较少。

miRNAs在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中特征性的miRNA表达谱以及临床病理意义。方法对52例PTC及7例良性甲状腺肿瘤手术切除标本采用基因芯片技术及RNA印迹杂交法检测miRNA的表达,对过表达的miRNA表达水平与PTC临床病理特征之间的关系进行分析。结果 (1)用基因芯片技术筛检发现PTC组织中5例过表达的miRNAs(miR-375、miR-34a、miR-146b、miR-222、miR-31)。(2)RNA印迹杂交法验证芯片结果及检测其他miRNAs结果显示:miR-34a、miR-146b、miR-31、miR-21和miR-221在PTC组织中的表达水平较癌旁正常甲状腺组织显著升高(P<0.05)。MiR-146b和miR-221在PTC组织中的过表达率较良性甲状腺肿瘤组织显著升高(P<0.01)。PTC患者中包膜侵犯组、淋巴结转移组、TNM分期Ⅲ-Ⅵ期组及AGES系统评分≥5分组miR-221的表达水平均明显高于相应对照组(P<0.05或0.01);而男性PTC患者的miR-146b表达水平明显高于女性PTC患者(P<0.05)。结论 miR-146b、miR-221、miR-21和miR-31的过表达与PTC的发生、发展有关;过表达的miR-221和miR-146b与PTC的预后不良有关。

退变腰椎间盘组织中p-JNK的表达变化及意义

目的观察退变腰椎间盘组织中p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达变化,并探讨其意义。方法选择手术切除的腰椎间盘突出症退变腰椎间盘组织(观察组,50例份)及腰椎爆裂骨折、椎间盘突出症正常腰椎间盘组织(对照组,20例),光学显微镜下观察两组腰椎间盘组织病理变化,免疫荧光法检测p-JNK的定位,Western blot法检测p-JNK蛋白。结果光镜下,观察组细胞增殖明显,细胞核呈圆形或卵圆形,髓核细胞细胞质成空泡状,基质增多,纤维网错乱,纤维排列紊乱;对照组可见纤维环和髓核结构,腰椎间盘髓核的软骨细胞表现为不规则的软骨陷窝,细胞核呈卵圆形,蓝染,细胞质粉染,基质较均匀,可见排列整齐的纤维网。免疫荧光示,观察组细胞质和细胞核内均有p-JNK表达,对照组细胞质及细胞核内仅少量表达。Western blot法示,与对照组比较,观察组p-JNK蛋白水平升高(P<0.05)。结论 p-JNK在退变椎间盘组织中的表达明显高于正常椎间盘,提示p-JNK可能与椎间盘退变有关。

红色毛癣菌的基因分型研究

目的探讨探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌的基因分型并分析其基因型与来源地区的相关性。方法用溴化十六烷基三甲铵(CTAB)法提取DNA,以皮肤癣菌的特异性引物NS5犤5'-AACTTAAAGGAATTGACGGAAG-3'犦与ITS4犤5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'犦为引物,以红色毛癣菌的标准菌株为模板,用PCR法扩增出其rDNA部分18S区、ITSⅠ区、5.8S区和ITSⅡ区为探针,用随机引物法将探针标记32P,用EcoRⅠ酶切基因组DNA,采用DNA印迹的标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交;显示的不同带型,以此作为红色毛癣菌基因分型的依据。结果所试49株红色毛癣菌(南京21株、大连26株、北京2株)分为20型(A-T型),其中A-C型占48.98%。南京株绝大多数为3条带,大连株大部分为4条带。结论用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌基因组分型敏感性强、分辨力高;南京与大连两地区红色毛癣菌DNA分型具有明显差异。DNA分型对红色毛癣菌病的流行病学、临床疗效的判定以及指导用药均具有重要价值。

淋巴瘤样丘疹病继发蕈样肉芽肿:共同T细胞克隆增生一例报告

目的报道一例淋巴瘤样丘疹病(LyP)继发蕈样肉芽肿(MF),随访27年,并检测其克隆性是否与疾病相关。方法比较不同时期的皮肤组织病理和免疫表型特点,同时应用聚合酶链反应(PCR)和Southern印迹杂交法,检测皮损组织和外周血标本的T细胞受体基因重排。结果此例在不同时期各具临床病理学特征,增生的淋巴细胞为成熟的Th细胞,且示共同T细胞克隆。结论LyP继发MF示相同T细胞克隆,克隆性T细胞与疾病的生物行为无关。

建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子的转基因小鼠

目的为了研究异种移植,建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子(DAF)的转基因小鼠。方法采用受精卵显微注射技术,将含有人内皮细胞粘附分子-2(ICAM-2)基因启动子、人DAFcDNA(插有人DAF基因第一个内含子)、SV40splice/polyA的外源基因导入小鼠受精卵的原核中;选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。聚合酶链(PCR)技术及Southern印迹杂交法确定外源基因整合阳性转基因小鼠。RT-PCR方法和流式细胞术分别用于外源基因mRNA及蛋白质水平表达的检测。免疫组织化学方法观察人DAF在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官的表达分布。采用Langendorff心脏灌流装置,用200g/L的稀释人血清灌注转基因小鼠离体心脏,检测其抗超急性排斥反应能力。结果共产仔鼠133只,21只整合有外源基因,整合率16%(21/133)。8只实现mRNA及蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人DAF基因在人白细胞表达强度的70%至95%,转基因效率6%(8/133)。免疫组织化学法显示人DAF在转基因小鼠器官组织切片上有较强表达,且表达限于血管内皮细胞。与普通鼠对比,转基因小鼠离体心脏存活时间明显延长,且60min灌注期间内做功仍维持在最大值20%以上。结论成功地建立了血管内皮细胞组织特异性表达人DAF的转基因小鼠。这种小鼠有一定的抗超急性排斥反应能力。