子痫前期患者胎盘组织和人脐静脉内皮细胞中即刻早期反应基因X-1蛋白的表达

目的:探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中即刻早期反应基因X-1(IEX-1)蛋白的表达。方法:应用免疫组化SP法检测10例轻度PE、20例重度PE患者和20例正常足月孕妇(正常妊娠组)胎盘组织中IEX-1蛋白的表达。将HUVEC分别用胎牛血清(阴性对照组)、正常晚孕妇静脉血清(正常妊娠组)和重度PE患者血清(重度PE组)孵育24h,然后应用细胞免疫化学法检测细胞中IEX-1蛋白的表达,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果:IEX-1蛋白主要表达于胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的胞质,3组胎盘绒毛滋养细胞及底蜕膜细胞中的表达差异有统计学意义(H=26.620、16.932,P<0.001),重度PE组的表达强于轻度PE组(P<0.05),轻度PE组强于正常妊娠组(P<0.05)。正常妊娠组及重度PE组HUVEC胞质中有IEX-1蛋白的表达,且较阴性对照组明显增强(H=11.495,P=0.003)。阴性对照组、正常妊娠组和重度PE组HUVEC细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=113.438,P<0.001),重度PE组高于其他2组(P<0.05)。结论:IEX-1可能通过调节滋养细胞及蜕膜细胞凋亡,参与内皮细胞损伤过程,在PE发病中起着重要作用。

即刻早期反应基因对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞HCC1937凋亡的影响

目的观察即刻早期反应基因（IER3）在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导乳腺癌细胞HCC1937凋亡中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测TRAIL和IER3干预48h前后TRAIL和IER3基因表达改变，分别于24、48、72、96、120h后采用噻唑蓝（MTT）法检测HCC1937细胞的增殖，10～14d后采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，24h后采用Hoechst33258染色检测细胞凋亡。结果与阴性对照组比较，TRAIL组和IER3＋TRAIL组的TRAIL相对表达量分别是42．69±3．88和46．36±3．55；IER3组和IER3＋TRAIL组的IER相对表达量分别是5．08±1．40和9．66±2．25。TRAIL、IER3及TRAIL＋IER3组在120h时的抑制率（％）分别为（50．95±7．45）、（25．39±4．49）及（72．01±2．95）。IER3＋TRAIL组的细胞克隆形成能力明显降低，而细胞凋亡率明显增高。结论IER3能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞HCC1937的凋亡，两者联合具有协同诱导细胞凋亡的作用。

即刻早期反应基因-1在乳腺癌新辅助化疗后表达的变化及对预后的意义

目的探讨即刻早期反应基因-1(IEX-1)在乳腺癌新辅助化疗(NCT)后表达的变化及在预后判断中的意义。方法选取2012年1月至2017年1月首诊首治并接受NCT的110例乳腺癌女性患者作为研究对象进行回顾性研究,采用二步法免疫组化方法检测NCT前后乳腺癌组织中IEX-1表达的变化,采用Kaplan-Meier和Log-rank法分析其对无病生存期(DFS)及总生存期(OS)的影响。结果 NCT前乳腺癌组织中IEX-1蛋白均阴性;NCT后,IEX-1蛋白阳性表达45例(40. 9%),阴性65例。生存分析显示,IEX-1蛋白阳性表达组患者的DFS、OS均低于IEX-1蛋白阴性表达组(P均<0. 01)。多因素Cox比例风险回归模型分析发现,IEX-1蛋白阳性表达为乳腺癌预后的独立风险因素[HR=4. 921,95%CI=(1. 273~19. 018),P=0. 021]。结论乳腺癌NCT前后检测IEX-1有助于预后判断,IEX-1可能成为乳腺癌NCT疗效的预后指标。

基于生物信息学数据库分析IER2在肿瘤中高表达及其作用机制

人即刻早期反应基因2(immediate early response 2,IER2)可能参与肿瘤的发生发展,但它在此过程中的作用及表达调控的机制仍不清楚。本研究通过在线数据库GEPIA2与Kaplan-Meier Plotter分析发现:TNF和IER2基因在食管癌组织和宫颈癌组织中高表达。而且IER2基因高表达的食管癌病人的预后显著较差。通过UCSC基因组数据库分析发现,在宫颈癌细胞和淋巴细胞内,TNFα(由TNF基因编码)诱导激活NF-κB结合IER2基因区。qRT-PCR检测证明,在食管癌和宫颈癌等细胞内,TNFα诱导NF-κB在转录水平上调IER2基因的表达。本文据此提出,TNFα诱导NF-κB上调IER2基因的表达可能是其在食管癌和宫颈癌等肿瘤中高表达的调控机制。本研究还通过在线数据库GeneMANIA和String分析发现11个与IER2具有关联性的基因。通过在线数据库Oncomine分析发现了88个基因在食管癌细胞内与IER2基因共表达。其中,包含7个与IER2具有关联性的基因ATF3、DUSP1、EGR1、EGR2、FOSB、JUN、NR4A1。本研究通过Oncomine数据库分析证明,在前列腺癌组织细胞内,这7个基因也与IER2共表达。并通过qRT-PCR检测验证这7个基因在食管癌细胞内与IER2基因共表达。GO注释表明,IER2可能通过与ATF3、EGR1、JUN相互作用,协同参与细胞增殖等生物学过程。CCK8检测证明,IER2基因过表达促进食管癌细胞生长增殖。总之,本研究初步揭示了IER2在食管癌和宫颈癌中高表达的调控机制及其作用,为深入研究该基因功能提供了线索。

IEX-1基因转染对人卵巢癌细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响

目的:探讨即刻早期反应基因-1(immediate early response gene X-1,IEX-1)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对顺铂药物敏感性的影响。方法:提取并鉴定重组质粒pEGFP-N1-IEX-1,采用脂质体介导将重组质粒转染到人卵巢癌细胞SKOV3,RT-PCR检测转染前后IEX-1mRNA和蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后卵巢癌细胞SKOV3增殖情况以及对顺铂敏感性的变化。结果:成功转染IEX-1基因后可检测到IEX-1mRNA的高表达;转染组细胞的增殖速度增快(P<0.05),但对顺铂的敏感性明显增强(P<0.05)。结论:IEX-1可增强卵巢癌细胞的体外增殖能力,并增强卵巢癌细胞体外对顺铂化疗的敏感性,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。

宫颈癌组织IEX-1表达及其与HPV感染相关性研究

目的即刻早期反应基因(immediate early response gene X-1,IEX-1)是一种凋亡易感基因,在多种人类恶性肿瘤中表达失调,但在宫颈癌组织中的表达相关研究较少,检测宫颈癌组织IEX-1的表达,了解其在宫颈癌发生发展中的作用,分析其与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法收集2011-01-01-2015-10-31郑州大学第一附属医院病理科存档蜡块标本132份,采用免疫组化法检测IEX-1在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及良性宫颈病变组织中的表达情况,分析IEX-1的表达与宫颈癌临床病理关系。采用RT-qPCR法及蛋白质印迹法检测Siha(HPV16+)、HeLa(HPV18+)和C-33a(HPV-)3种宫颈癌细胞株中IEX-1mRNA及蛋白的表达,siRNA法靶向沉默E6后Siha细胞E6、IEX-1的mRNA及蛋白表达,分析与HPV感染的关系。结果 IEX-1在宫颈良性病变、CIN组织和宫颈癌组织中的表达分别为72.4%、58.7%和21.1%,差异有统计学意义,χ~2=21.345,P=0.001。宫颈癌组织IEX-1的表达与患者年龄、病理类型、HPV感染型别及FIGO分期无关,均P>0.05。IEX-1的表达与宫颈癌分化程度、淋巴结转移情况及宫旁浸润密切相关,均P<0.05。C-33a细胞中IEX-1mRNA表达量为21.652±9.020,明显高于Siha细胞的1(t=7.34,P<0.001)和HeLa细胞的1.742±0.854(t=6.21,P<0.001);IEX-1蛋白表达量为18.017±1.351,明显高于Siha细胞的1.519±0.391(t=8.16,P<0.001)和HeLa细胞的1.957±0.363(t=7.19,P<0.001)。干扰组E6mRNA水平为0.218±0.106,低于阴性对照组的1.031±0.072(t=9.21,P<0.001)和空白对照组(t=8.46,P<0.001);干扰组E6蛋白表达量为0.184±0.274,低于阴性对照组的0.692±0.133(t=8.71,P<0.001)和空白对照组的0.783±0.097(t=8.06,P<0.001)。干扰组IEX-1mRNA水平为20.083±0.672,低于阴性对照组的1.193±0.408(t=9.04,P<0.001)和空白对照组,t=7.56,P<0.001;干扰组IEX-1蛋白表达量为0.672±0.135,低于阴性对照组的0.137±0.071(t=7.92,P<0.001)和空白对照组的0.081±0.009(t=6.47,P<0.001)。结论IEX-1在宫颈癌中表达降低,其表达水平与宫颈癌恶性程度呈负相关,可能参与了宫颈癌的发生与发展。IEX-1在宫颈癌细胞中的表达与HPV感染有关,但与感染的HPV型别无关。

金雀异黄素调控Egr1/PTEN信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的实验研究

目的通过金雀异黄素(genistein)诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞的凋亡,探讨即刻早期反应基因(Egr1)/细胞骨架蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶(PTEN)信号通路在金雀异黄素诱导SKOV3细胞凋亡过程中的作用。方法应用磺酰罗丹明B(SRB)染色法测定经金雀异黄素处理后的SKOV3卵巢癌细胞生长抑制率,组蛋白DNA酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞凋亡,采用游离硝基苯胺(p NA)法检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞内Bcl-2相关X蛋白基因(bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)的基因表达变化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析Egr1、PTEN、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达变化。结果金雀异黄素显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。金雀异黄素处理24 h后,处理浓度高于40μmol/L时,与对照组相比,调亡指数、Caspase-3活性、bax的相对表达及细胞中Egr1蛋白和PTEN蛋白的表达量均显著增加(P<0.05),Bcl-2的相对表达量及AKT蛋白的磷酸化水平p-Akt则显著降低(P<0.05)。当同时给予50 nmol/L PTEN抑制剂Bpv后,p-Akt表达明显增加,细胞凋亡程度受到明显抑制。结论金雀异黄素可能通过上调Egr1/PTEN信号通路的表达抑制PI3K/Akt信号通路的激活诱导SKOV3细胞凋亡,进一步影响了调亡相关基因Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达。

IEX-1和NT在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的:检测卵巢癌组织中即刻早期反应基因X-1(IEX-1)和硝基酪氨酸(Nitro tyrosine,NT)的表达,探讨IEX-1与NT在卵巢癌发生发展中的作用。方法:选取郑州大学附属医院妇产科2007年1月～2008年10月104例卵巢肿瘤蜡块,其中良性卵巢肿瘤20例、交界性瘤24例、恶性组织60例,采用免疫组织化学方法检测卵巢组织中IEX-1与NT的表达,并分析两者的相关性。结果:①IEX-1在卵巢癌组织中的表达率38.3%,明显低于良性及交界性卵巢肿瘤(P<0.01);NT在卵巢癌组织中的表达率76.0%,明显高于良性及交界性卵巢肿瘤(P<0.001);②卵巢癌组织中IEX-1和NT蛋白的表达均与FIGO分期、组织学分级相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤的组织学类型无关(P>0.05);③IEX-1蛋白的阳性表达和NT蛋白的阳性表达在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.271,P<0.05)。结论:IEX-1和NT蛋白的表达变化可能与卵巢癌的发生发展有关。