基于重组酶介导扩增-侧流层析试纸条的褐飞虱快速鉴定方法

【目的】针对测报灯下褐飞虱鉴定费时费力这一问题,建立褐飞虱快速定性鉴定技术。【方法】以褐飞虱、伪褐飞虱及拟褐飞虱为材料,筛选褐飞虱特异性引物对,优化基于重组酶介导扩增和侧流层析试纸条检测方法的快速鉴定体系(RAA-LFD),并分析其温度及模板鲁棒性。【结果】本研究建立的RAA-LFD方法操作简单、速度快、不依赖于任何精密仪器、体温可触发扩增反应,且对粗组织液模板具有很好的鲁棒性。盲样检测结果表明,56个样本从样本获取到结果输出的整个过程可在45 min内完成,准确率可达100%。【结论】本研究建立的褐飞虱RAA-LFD鉴定技术可以用于褐飞虱及其近似种的快速区分,适用于基层植保站或田间地头对样本的现场即时检测。

一种快速诊断真菌感染的全自动检测仪

血液肿瘤病患者、骨髓及器官移植受者等,尤其是免疫功能低下的老年人,深部真菌感染已经成为危及生命的重要原因之一。为了提高侵袭性真菌病(IFD)病原菌的检测能力,需要一种快速且高效的辅助检测工具。提出了一款基于朗伯-比尔定律的全自动真菌葡聚糖检测仪,实现了现场即时检测(POCT),可用于医院临床诊断和实验室检验,60 min即可完成24通量检测,且检测时间和精度不受人工因素干预。以不同浓度的对硝基苯胺(PNA)溶液为样本进行仪器性能测试,重复性(CV值)最大为0.72%,小于1.5%,线性相关系数r=0.9995。仪器性能测试结果表明该检测仪系统稳定、检测快捷,且操作简单,检测结果真实可靠,能够实现IFD早期预警和精准诊疗。

登革热抗原抗体联合检测与双抗体检测效能比较

目的比较抗原抗体联合检测与双抗体快速检测2种方法检测登革热的效能,为登革热快速诊断提供依据。方法收集登革热临床诊断病例血清样本449份(病例组)、流行病学和(或)临床上判断与登革热无关血清样本689份(阴性对照组),分别进行抗原抗体联合检测(IgM、IgG和NS1抗原)及双抗体检测(IgG和IgM),以临床诊断为金标准,对2种方法检测结果进行描述分析和一致性分析。结果纳入研究的449例病例组和689例阴性对照组中,联合检测阳性率(34.1%)高于双抗检测(29.7%),且均低于临床诊断阳性率(39.4%),差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为20.61、7.03和51.33,P值均<0.01)。联合检测结果与实际临床诊断一致性(kappa=0.863)高于双抗检测(kappa=0.745),联合与双抗检测法结果一致性较好(kappa=0.729)。阴性对照组有9份样本经联合和(或)双抗检测法检测为登革热阳性,其中4例(3例发热待排查病例,1例体检人员)2种方法均为阳性,增补为登革热临床诊断病例。结论抗原抗体联合胶体金检测登革热不仅方便、快捷、经济,与临床诊断一致性较高;还可降低漏诊率,可应用于登革热即时现场检测(POCT)、快速临床筛查、大规模流行病学调查等防控工作。

一种新型冠状病毒荧光定量PCR快速检测方法的应用评价

目的建立并评价一种基于COYOTE■Flash20实时荧光定量PCR仪用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸快速检测的方法。方法通过使用靶向SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因的特异性引物探针组构建快速反应体系,并验证体系的灵敏度和特异性。同时,使用108例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)临床样本对该方法进行应用评估。结果该检测方法无需核酸提取、手动操作时间仅用1 min,样本进、结果出,可以在30 min完成检测。该方法最低检测限为4×10^(2)拷贝/ml;与其他人类冠状病毒(包括HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)以及其他引起呼吸系统疾病的病毒无交叉反应。临床样本应用评估显示,与常规需要核酸提取的RT-qPCR的总符合率为98.15%。结论通过对SARS-CoV-2快速荧光定量PCR方法的应用评价发现,该方法操作简便、快速、特异、灵敏,适用于多种场景即时快速检测需求。

侧流免疫层析技术在新型冠状病毒抗原检测中应用的研究

本文简要归纳总结了侧流免疫层析技术在新型冠状病毒抗原检测中的应用研究。侧流免疫层析技术因其快捷、低成本、操作便携而广泛应用于临床和公共卫生领域。自新型冠状病毒肺炎疫情暴发以来,该技术已被用于新型冠状病毒抗原的快速检测,其中包括普遍采用的胶体金免疫层析法以及基于荧光微球或其他复合纳米材料的各类荧光免疫层析法。随着新型标志物的开发,该技术平台正由低灵敏度向高灵敏度、由定性检测向定量检测等方向发展。

基于SERS免疫层析技术的人腺病毒抗原检测方法建立

目的基于Au@Ag NPs的SERS侧流免疫层析(LFIA)建立一种快速、高灵敏定量检测人腺病毒(HAdV)的方法。方法首先合成出双层拉曼分子5, 5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (DTNB)修饰的Au@Ag NPs, 再结合HAdV特异性抗体得到SERS探针, 基于抗原-抗体的特异性反应在免疫层析条检测线处形成"三明治"免疫复合结构, 通过收集并分析检测线上的SERS信号, 可以实现对HAdV抗原的快速检测。其次, 分别对该检测方法的灵敏度、重复性和特异性进行评价。结果基于双层DTNB修饰的Au@Ag NPs SERS-LFIA可在15 min内对HAdV实现定性/定量检测, 其可视化检测结果为10 ng/ml, 最低检出限达0.1 ng/ml, 定量范围为0.1 ng/ml~1 000 ng/ml。此SERS免疫层析方法对HAdV的检测具有良好的重复性和特异性, 与登革热病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、寨卡病毒和埃博拉病毒五种新突发传染性病毒均无交叉反应。结论该研究提出的基于Au/DTNB@Ag/DTNB NPs的SERS-LFIA可以实现对HAdV的快速和高灵敏检测, 在HAdV的现场即时检测领域具有巨大潜力。

基于微流控芯片的等温扩增技术

基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的核酸扩增技术是分子诊断领域的金标准,然而PCR往往包含多个反应温度,涉及长时间的循环升降温过程,且需要在复杂热循环仪中完成,这些都限制了其在现场即时检测(point-of-care testing,POCT)中的应用。与传统PCR相比,等温扩增依靠恒定反应温度,反应时间短,检测装置简单,能够提供更加方便、快捷的核酸检测。基于微流控技术的等温扩增检测,通过兼顾微流控与等温扩增两者的优势,能够为POCT分子诊断提供更具竞争力的平台。例如,在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情防控中,多种形式的POCT等温扩增检测展示了其独特优势。文中首先归纳总结了典型的等温扩增技术及其检测方法,然后对不同类型的等温扩增微流控系统进行了分类总结与分析(如功能定位、结构组成、流体控制、系统特点等),最后总结了等温扩增微流控系统在新冠病毒(SARS-CoV-2)等不同病原体检测领域中的应用,并对等温扩增与CRISPR基因编辑等其他新型技术的相互结合进行了介绍与展望。