5-HT对马氏珠母贝卵体外促熟的影响及5-HT受体的细胞学定位

研究了5-羟色胺(5-HT)对马氏珠母贝解剖获得卵母细胞的促熟作用及5-HT受体(5-HTpf)在其性腺中的分布情况。通过体外浸泡的方法处理马氏珠母贝卵母细胞使其成熟,结果表明一定浓度的5-HT可显著促使马氏珠母贝卵母细胞生发泡破裂,并使已经发生生发泡破裂的卵母细胞进一步成熟,同时可诱导5-HT受体基因的表达。用原位杂交的方法对5-HT受体在马氏珠母贝性腺中的分布的研究结果揭示,卵巢中次级卵母细胞和卵细胞均存在5-HT受体,有阳性信号出现;精巢中仅滤泡壁及精母细胞中有少量表达。以上结果表明马氏珠母贝的卵母细胞不仅能产生5-HT并且可表达5-HT受体。

体外受精周期中不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响

目的:探讨常规体外受精周期中,不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2009年12月,在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规体外受精(in vitrofertilization,IVF)过程中为预防出现卵巢过度刺激综合征或因卵泡发育迟缓,改行未成熟卵体外培养(in vitro maturation,IVM)的91例患者,按促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用天数不同分为两组,A组使用Gn 5～7 d,共51例,B组使用Gn 8～13 d,共40例。比较两组的一般指标、Gn用量、体外成熟与胚胎发育及妊娠结局。结果:两组年龄、不孕年限、基础激素水平均差异无统计学意义(P>0.05)。Gn使用量A组明显低于B组,但获卵数A组明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。取卵日的雌激素以及黄体生成素水平A组明显高于B组,而孕激素水平则B组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组的卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率差异均无统计学意义(P>0.05)。两组的移植周期率、hCG阳性率、周期取消率、临床妊娠率、多胎妊娠率、自然流产率、异位妊娠率等临床结局差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:体外受精咛ヒ浦仓芷谥校煌被男蠭VM均能获得较好的临床结局,但Gn使用后5～7 d比8～13 d可以显著减少促排卵药物的用量,增加获卵数,降低治疗费用。

颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。

未成熟卵体外培养成熟技术治疗后妊娠情况及结局分析

目的通过比较接受人类未成熟卵体外培养成熟(IVM)技术、常规体外受精技术(IVF)及单精子卵胞浆内注射技术(ICSI)治疗后妊娠的病例,分析妊娠和产科结局,从而评估IVM技术的安全性。方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心2004年1月～2007年12月接受IVM35例、IVF369例和ICSI298例治疗后妊娠的702例患者的临床资料。结果3组的多胎妊娠发生率、流产率、异位妊娠率比较,差异无显著性(P>0.05)。除外流产和继续妊娠外,IVM、IVF和ICSI治疗后出生婴儿数分别为34、321和243例,比较3组单胎妊娠和双胎妊娠的妊娠结局,差异无显著性(P>0.05)。结论与常规IVF、ICSI比较,IVM并不增加妊娠风险、产科并发症和新生儿异常的比例。

未成熟卵体外成熟培养成功妊娠1例

1病例资料患者,女,29岁,结婚3年,婚后3年不孕就诊。14岁初潮,月经稀发3～6个月,BMI 27.63 kg/m2。生殖激素测定：LH 18.54 mIU/ml,FSH 5.80 mIU/ml,E254.2 pg/ml。B超见子宫内膜5 mm/线性,双侧卵巢均有12个以上直径〈5 mm的小卵泡。OGTT（-）,IRT（＋）,我院行HSG提示双侧输卵管通畅,左侧输卵管上举。男方精液检查活率99.07%,密度28.47×106/ml。诊断：①原发不孕症;②多囊卵巢综合征;③胰岛素抵抗综合征;④肥胖症。

烟草新型体细胞胚结构类蛙卵体的诱导发生

通过对烟草外植体、植物生长调节剂类别与浓度的筛选,构建其类蛙卵体(FELB)的诱导发生体系,以期为烟草干细胞生物反应器的搭建奠定基础。选取烟草根、茎、叶为外植体,分别置于不同质量浓度的NAA和2,4-D的MS培养基上,进行特殊胚性愈伤与FELB结构的诱导。再将FELB置于不同质量浓度BAP的MS培养基中进行胚体萌发再生诱导。结果表明:黑暗条件下,不同烟草外植体的FELB诱导效率为叶>茎>根。其中,10 mg/L 2,4-D对烟草FELB的诱导效果最佳,5 mg/L与15 mg/L 2,4-D效果次之;而黑暗条件下的各种质量浓度NAA以及光照条件下的所有NAA和2,4-D的处理组均未能诱导出FELB结构。2.0 mg/L BAP对FELB的催萌效果最佳。通过对FELB不同发育时期的形态学和组织细胞学分析发现,其发生方式属于内起源。

水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3d,共采卵120头次。共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个。第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P>0.05)。收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456)。2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异。这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的。

未刺激的未成熟卵体外培养在多囊卵巢综合征患者中的应用

目的探讨未刺激的未成熟卵体外培养成熟(IVM)治疗难治性多囊卵巢综合征(PCOS)患者的疗效。方法2005年10月至2006年10月本中心对50例难治性PCOS患者65个周期的IVM治疗。结果9个周期取消,取消率为13.85%;65个周期共获卵1338枚,平均每周期20.6枚,培养48h后总成熟率为68.5%。正常受精率为70.2%,卵裂率为91.1%,每穿刺周期和移植周期的临床妊娠率分别为37.5%和40.6%,28例临床妊娠中,6例多胎,多胎妊娠率为21.4%。结论未经刺激的IVM技术用于难治性PCOS是一种有效的方法,可获得与常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)相似的临床妊娠率。

延边州畜牧局开展“牛活体采卵体外生产胚胎技术(OPU-IVP)”专题培训

为了加快延边黄牛产业化发展，推进黄牛产业现代化进程，推广畜牧养殖先进技术，日前，延边州畜牧业局特别邀请韩国忠南大学金敏奎教授就牛活体采卵体外生产胚胎技术（0PU—IVP）开展专题培训。此次培训主要针对全州县（市）站、专业技术人员，养殖场等，共计30余人参加培训。培训会上，州畜牧总站张魁站长介绍了延边州目前延边黄牛产业发展的现状，随后韩国忠南大学金敏奎教授作了题为《牛活体采卵体外生产胚胎技术（OPU—IVP）》的授课。

羊活体采卵及体外胚胎生产技术研究进展

近年来,集约化养羊业发展迅速,对具有优良性状的羊需求量逐年增加。高效的繁殖技术为羊群体的扩大提供了重要技术基础,特别是超数排卵-胚胎移植技术已经在羊的繁育中得到了高效应用,同时以羊的活体采卵技术、体外胚胎生产技术、幼畜超数排卵胚胎和移植技术等为核心的技术体系也取得了重要进展。活体采卵是指从活体家畜体内回收卵母细胞的技术,是羊体外胚胎生产的重要前提环节。文章对近年来羊体外胚胎生产的发展历程、相关技术应用现状及前景进行综述,以期为羊活体采卵、体外受精和胚胎移植技术的进一步完善提供参考。

活体采卵-体外胚胎生产体系在上海水牛保种中的应用

旨在建立上海水牛活体采卵(ovum pick-up,OPU)-体外胚胎生产(in vitro embryo production,IVP)体系,探究年龄对上海水牛超数排卵的影响,评价冷冻精液在该体系中的应用效果。假阴道法采集5头上海水牛新鲜精液10头次,精液经程序冷冻仪冷冻后,转移至液氮中保存1~2年;筛选卵巢和子宫发育良好的11头青年母牛和5头经产母牛为供体,进行超数排卵、OPU、体外成熟、体外受精、体外胚胎培养。结果表明,经冷冻保存1~2年的上海水牛冻精的活率为75.43%±15.24%,活力为0.61±0.16;经产供体在发育卵泡总数、两侧卵巢发育卵泡比例、卵泡大小、OPU回收量等指标上均优于青年供体;利用冻精体外受精,胚胎卵裂率59.29%,桑葚胚率26.54%;胚胎玻璃化冷冻保存,实现IVP。上海水牛OPU-IVP体系为提升上海珍稀濒危种质资源保护效率与良种开发利用提供重要技术保障。

两种培养液用于未成熟卵体外培养成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症效果比较

目的:比较两种培养液用于卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果。方法:取出未成熟卵母细胞置于Ⅰ、Ⅱ两种成熟培养液中进行体外培养成熟后行单精子胞浆注射,受精后取优质胚胎移植宫腔,同时比较其对助孕结局的影响。结果:两组共23例患者进行了24个IVM治疗周期。Ⅰ组的获卵率,成熟率,受精率,卵裂率,种植率和妊娠率分别为:47.42%,70.30%,95.52%,84.38%,3.13%,5.88%;Ⅱ组分别为47.47%,70.21%,84.85%,71.43%,30.77%,50.00%。Ⅱ组的妊娠率,种植率显著高于Ⅰ组(P<0.05),两组获卵率,成熟率,受精率,卵裂率差别无统计学意义(P>0.05)。结论:IVM对卵泡发育和成熟障碍的多囊卵巢综合征患者助孕有效,用含0.1 IU/ml的hCG,0.5μg/ml E2的卵子成熟培养液助孕效果较好。

多囊卵巢综合征患者采用未成熟卵体外成熟培养技术取卵的手术配合

目的：探讨未刺激周期未成熟卵体外成熟培养/体外受精胚胎移植术（ IVM/IVF-ET ）在治疗不孕症中的手术配合。方法回顾分析2010年6月-2012年8月行体外受精胚胎移植的300例患者资料，其中多囊卵巢综合征患者行自然周期IVM治疗91例。充分掌握和了解IVM的治疗方案，给予手术前、手术中和手术后的护理配合以及良好的心理干预。结果91例患者情绪均相对稳定，顺利度过IVM治疗周期。结论规范掌握未成熟卵体外培养手术过程和配合，有助于患者顺利度过IVM治疗周期。

体外受精-胚胎移植周期卵细胞MetaphaseⅠ期停滞的形态学特征

目的:观察体外受精-胚胎移植周期中全部卵细胞M etaphase I期停滞的形态学特征与体外成熟培养促熟率。方法:2例体外受精-胚胎移植周期患者,获得卵细胞均处于M etaphase I期,行体外成熟培养,同期评价其形态学特征。结果:M etaphase I期停滞卵细胞的胞质质地均一,透明带致密透亮,无卵周隙。卵周颗粒细胞与透明带、颗粒细胞之间结构松散,无放射样形态。经体外成熟培养,24、48、72 h形态学特征观察无明显改变,无极体放出,均停滞于M etaphase I期。结论:体外受精-胚胎移植周期出现全部卵细胞M etaphaseⅠ期停滞的卵细胞存在特有形态学特征,现有体外成熟培养方法尚无法促熟。

未刺激的未成熟卵体外培养治疗多囊卵巢综合征不孕的研究

目的 探讨未刺激的未成熟卵体外培养成熟（IVN）治疗难治性多囊卵巢综合征（PCOS）不孕的疗效。方法 2004-08—2005-08温州医学院附属第一医院生殖中心对56例难治性PCOS不孕患者进行78个周期的IVN治疗。结果 9个周期取消，取消率为11．5％；69个移植周期共获卵1338个，平均每周期19．4个，培养48h后总成熟率为68．5％。正常受精率为70．2％，卵裂率为91．1％。移植日的子宫内膜厚度平均8．7ram，平均移植3．7个胚胎。1例异位妊娠，2例生化妊娠，28例获临床妊娠。每穿刺周期和移植周期的临床妊娠率分别为37．3％（28／75）和40．6％（28／69）。28例临床妊娠中，3例孕8～12周流产，1例孕22周因胎膜早破流产，15例已分娩，2例双胎和7例单胎在妊娠中。多胎妊娠率为39．3％（11／28）。结论 未经刺激的IVN技术用于治疗难治性PCOS不孕是一种有效的方法，具有简单、经济、最低损伤且可获得与常规体外受精-胚胎移植（IVF—ET）相近的临床妊娠率，但多胎妊娠的发生率仍较高。

牛活体采集卵母细胞技术的研究

本研究利用自制采卵器对 2 4头健康牛和 2 0头有生殖障碍牛进行活体采集卵巢卵母细胞试验。卵母细胞回收率 4 2 .9% ,共采集卵母细胞 397枚 ,其中可用卵 2 6 6枚 ,占 6 6 .7% ,平均每头母牛获卵母细胞和可用卵母细胞数分别为 9.0 2枚和 6 .0 4枚。采集的卵母细胞经体外受精和体外培养 ,移植受体母牛 。

水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育的研究

本研究比较了不同来源的水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育。对10头摩拉母水牛连续6周进行活体采卵,共采集292枚卵母细胞,头均回收卵母细胞4.87枚,头均A级卵数为3.07枚,从屠宰场收集74头水牛卵巢共采集559枚卵母细胞,头均回收卵母细胞和A级卵母细胞分别为7.55枚和5.20枚,均显著高于活体采集的水牛卵母细胞(P<0.01)。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、体外受精和体外培养至囊胚。结果表明,活体采卵组和屠宰水牛卵母细胞组受精分裂率差异不显著,分别为54.81%和57.73%。屠宰水牛卵母细胞组的囊胚率则高于活体采卵组(28.78%vs21.34%,P<0.05)。利用两组的胚胎进行常规法冷冻保存,冻胚解冻后的存活率差异不显著(P>0.05)。

奶牛活体采卵的影响因素分析

针对活体生物材料缺乏,活体采卵技术(Ovum pick-up)应运而生,因其具有系谱清楚适于科学研究而成为获取卵母细胞的主要途径之一。因此,研究活体采卵影响因素具有重要意义。就活体采卵在采卵间隔周期、超排处理、高产牛所处年龄段、患繁殖疾病与否及连续采卵进行试验,研究其采卵效率及对卵巢生理机能的影响。结果显示,①采卵间隔时间不同,以每周2次采卵所获卵母细胞数要多于每周1次的,差异不显著,但每周2次的优质卵母细胞率高于每周1次,且差异显著;②经超排处理后获卵母细胞数显著高于对照组,优质卵母细胞率有所提高,差异不显著;③青年牛和成年牛的平均获卵数和优质卵母细胞率差异均不显著;④健康牛平均获卵数显著高于患有繁殖疾病的牛只,优质卵母细胞率也显著高于患牛;⑤奶牛连续采卵和1次采卵的平均获卵率和优质卵母细胞率差异均不显著。综上,奶牛活体采卵受很多因素的影响,上述5方面的因素为主要影响因素。

年龄和FSH在肉牛活体取卵过程中对卵泡和卵母细胞发育的影响

用B超活体取卵技术 (TVFA)对莫累灰和婆罗门杂交肉牛取卵 ,探讨年龄和FSH诱导对青年牛、经产牛及老年牛卵泡和卵母细胞发育的影响。结果显示 :青年牛 (12月龄 )和经产牛 (7～ 8岁 )平均卵泡数(≥ 2mm)及 >10mm卵泡数明显高于老年牛 (≥ 14岁 ) (P <0 0 1)。青年牛和经产牛平均卵母细胞数及平均COC数高于老年牛 (P <0 0 5 )。 1和 2级卵母细胞比例青年牛高于或等于经产牛高于老年牛 ,3和 4级卵母细胞比例老年牛高于经产牛高于或等于青年牛 (P <0 0 5 )。青年牛和经产牛 2级卵母细胞占优势 ,而老年牛 3级卵母细胞居多。不同剂量外源性FSH诱导后 ,经产牛和老年牛平均卵泡数在各剂量组之间没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;但≥ 6mm卵泡数及 2级卵母细胞比例明显增加 ,而 2～ 5mm卵泡数相应减少及裸卵和老化卵比例降低(P <0 0 5 )。在 10次取卵过程中 ,青年牛和经产牛发情当天平均卵母细胞数均较以后各次的数量低 (P <0 0 5 )。研究表明 :利用TVFA可从肉牛获取卵母细胞 ;卵泡及卵母细胞发育受年龄的影响 ,这可能与生理状况有关 ;而适量FSH诱导可以促进牛卵泡发育 。