卵化的自然起源

驯化到底是什么?这篇来自《科学美国人》法国版的文章介绍了近三十年来,考古学如何重新勾勒人类与动植物之间关系演变的历史,展现了关于驯化的全新图景。

对氯间甲酚及复方对氯间甲酚对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的抑杀效果

为验证苯酚类消毒剂对鸡球虫卵囊的抑杀作用,采用不同浓度的单体和复方对氯间甲酚消毒剂与未孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊共孵育,检测其对卵囊孢子化率的影响;与孢子囊共同孵育,通过子孢子脱囊率评价其对子孢子释放的干扰。孢子化卵囊经过不同浓度消毒剂直接浸泡、粪便干扰下浸泡或喷雾处理后经口接种雏鸡,通过OPG和盲肠病变记分探究消毒剂处理对卵囊的繁殖力和鸡的致病性的影响。结果显示,2种消毒剂均可使孢子化率和子孢子脱囊率显著下降,且3种浓度的复方对氯间甲酚与3%氨水对照组(PC)的消毒效果无显著差异。直接浸泡处理试验结果显示,2%和3%复方对氯间甲酚(HTS2和HTS3)具有更为显著的抑杀效果,与PC无显著差异;粪便干扰试验结果显示,粪便作用下这两种消毒剂对球虫卵囊仍有理想的抑杀效果;喷雾处理试验结果显示,3%对氯间甲酚(HT3)对球虫卵囊抑杀效果最好,显著优于PC组(P<0.05),而2%对氯间甲酚(HT2)、HTS2和HTS3组的抑杀效果与PC组无显著差异。研究结果表明,不同浓度下这2种消毒剂对孢子化和未孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊都有一定的抑杀作用,综合比较,复方对氯间甲酚消毒剂具有更强的抑杀球虫卵囊效果,具有代替氨水成为鸡球虫消毒剂的潜能。

鹧鸪卵人工孵化条件调控研究

对鹧鸪卵孵化过程中的温度、相对湿度、通风量 3个主要控制条件进行分组试验 ,寻找到其最佳主控条件 ,即全程孵化期划分为 1～ 7,8～ 2 0 ,2 1～ 2 3.5 ,2 3.5～ 2 5 d4个阶段 ,温度分别为 1 0 0 .5 (38.1℃ ) ,1 0 0 (37.8℃ ) ,99.5 (37.5℃ ) ,1 0 0 .5 (38.1℃ ) ;相对湿度分别为 5 5 %～ 6 0 % ,5 0 %～ 5 5 % ,6 0 %～ 70 % ,75 %～85 % ;通风量为 5 .3m3/ h时 ,孵化率最高 ,达 85 .5 % .

柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

用建立表达性文库的方法 ,构建了Eimeriatenella孢子化卵囊噬菌体ZAP表达性cDNA文库。首先用TRIzol试剂盒从E .tenella孢子化卵囊中提取总RNA ,再用Oligo(dT) 1 2 纤维素柱从总RNA中分离mRNA ,以mRNA为模板 ,Oligo(dT) 1 8Linker Primer为引物 ,反转录合成cDNA第一链 ,再在DNA聚合酶Ⅰ作用下置换合成第二链cDNA。cDNA第二链合成后用PfuDNA聚合酶补平XhoⅠ位点 ,再与EcoRⅠAdapters连接 ,经XhoⅠ酶切后 ,凝胶电泳回收 5 0 0bp～ 4 .0kp之间的cDNA片段 ,纯化后的双链cDNA与载体ZAPExpressvector连接。体外包装后得到E .tenella孢子化卵囊的cDNA表达性文库 ,经测定该文库的容量为 6× 10 6 ,扩增后文库的滴度为 1× 10 1 1 Pfu mL ,经PCR测定 ,该文库的重组率为 96%。

毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROMA SPIN-400^TM柱去除小于400bp的片段，与λTriplEx2^TM噬菌体载体连接，用GigapackⅢGold^TM载体蛋白包装，构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定，原始文库容量为4．72×10^6pfu／mL，扩增后的文库容量为2．62×10^10pfu／mL，重组率为97．5％，插入片段为500～1100bp。证实，该文库质量良好，为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。

判断消毒剂对鸡球虫孢子化卵囊抑杀效果的新方法脱囊抑制试验

判断消毒剂抑杀鸡球虫孢子化卵囊的效果，一般要通过鸡体试验，即观察经消毒剂作用过的卵囊对健康鸡的致病力，以病变值、卵囊值、抗球虫指数等判定效果［１］。鸡体试验操作繁琐，试验时间长，且不能确定药物抑杀的百分率。我们参考文献［２，３］介绍的脱囊技术，总结出...

利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库

[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。

球虫消毒剂的筛选及氨水对艾美耳球虫卵囊抑杀条件的优化

为了筛选有效的球虫消毒剂,本研究将柔嫩艾美耳球虫卵囊分别与16种常用消毒剂和1种高效抗球虫药物溶液(250mg/L妥曲珠利溶液)混合作用2h然后在2.5%重铬酸钾溶液中孢子化培养,或混合作用4h后接种14日龄雏鸡,根据卵囊孢子化率、孢子化抑制率、每克粪便卵囊数量(oocysts per gram of feces,OPG)、病变计分和血便情况评价消毒剂和抗球虫药物抑杀球虫卵囊效果。结果显示,8%氨水对未孢子化卵囊和孢子化卵囊均表现为100%的抑杀效果;250mg/L妥曲珠利、3%甲醛、4%苯酚、0.5%过氧乙酸、5%NaOH+10%NaCl和5%NaOH对球虫卵囊活性具有一定的抑制作用,孢子化抑制率超过10%,但是对孢子化卵囊抑杀作用不明显;而剩余10种常用消毒剂对球虫卵囊没有明显的抑杀作用。氨水抑杀球虫卵囊条件优化的试验结果显示,1%～8%氨水与未孢子化卵囊作用1h以上,均可100%抑杀球虫卵囊活性。粪便干扰试验结果显示,粪便不影响2%和4%氨水对球虫卵囊的抑杀效果。本研究结果说明常用消毒剂和抗球虫药物不能有效杀灭球虫卵囊的活性,而氨水是一种高效球虫消毒剂。本研究结果可为开发新型高效球虫消毒剂和球虫病控制提供参考。

两种方法提取柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA的对比试验

为寻找一种合适的提取球虫基因组DNA的方法,试验采用氯化苄法(BC)和常规提取DNA的方法提取了鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA。氯化苄的化学性质类似于苯酚,在65℃条件下与蛋白质和几丁质等发生反应,能够有效地破坏球虫卵囊壁,可用于大规模提取基因组DNA;常规方法提取DNA的程序是用蛋白酶K消化处理,用酚/氯仿抽提,再用氯仿抽提,部分步骤需要重复。2种方法对比试验结果表明,二者均可用于鸡球虫基因组DNA的提取,所获得的DNA数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。但BC法具有简便、快速、经济实用的特点,更适用于球虫卵囊大量样品的DNA快速提取。

约氏疟原虫卵囊黑化与卵囊内游离钙关系的研究

目的 研究大劣按蚊蚊胃的约氏疟原虫卵囊黑化时卵囊内Ca^(2+)的变化,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化与囊内Ca^(2+)的相互关系。方法 以荧光染料Fluo-3/Am作卵囊内钙指示剂,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca^(2+)分布、变化以及检测的实验条件。结果 3μmol/L Fluo-3/Am同时加入1μl/ml 25%Pluronic F-127在37℃恒温下,孵育约氏疟原虫卵囊60min即可达到最佳的负载效果。Fluo-3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难于达到最佳的负载效果。约氏疟原虫成熟卵囊的囊内Ca^(2+)为(137.15±7.02)nmol/L,完全黑化卵囊为(18.44±1.75)nmol/L,并在囊壁出现明显的钙沉着。 结论 约氏疟原虫卵囊完全黑化时,囊内Ca^(2+)明显减少,并有外排现象。

不同药物与消毒剂对免球虫卵囊孢子化的影响

目的 对比研究不同抗兔球虫药物与消毒剂对兔球虫卵囊孢子化过程的抑杀效果,为兔球虫病的防治提供参考.方法 分别选取5种抗球虫药物和消毒剂进行抑制试验,观察它们对兔球虫卵囊体外孢子化过程的影响.结果 （1）5种抗球虫药物对兔球虫卵囊孢子化抑制率大小依次为：百球清＞优求乐＞球抑＞球肠清＞肠球双效,半数效量（EC5o）大小依次为：肠球双效＞球肠清＞球抑＞优求乐＞百球清;（2）5种消毒剂对兔卵囊孢子化抑制率大小依次为：二硫化碳＞苯酚＞氨水＞三氯异氰尿酸＞碘酊,半数效量大小依次为：碘酊＞三氯异氰尿酸＞氨水＞苯酚＞二硫化碳;半数孢子化时间依次为：二硫化碳＞氨水＞苯酚＞三氯异氰尿酸＞碘酊.（3）毒力较强的几种兔球虫卵囊耐药性大小依次为：大型艾美耳球虫＞斯氏艾美耳球虫＞无残艾美耳球虫＞肠型艾美耳球虫.结论 15 mL/L百球清体外作用8h对兔球虫卵囊孢子化抑制效果最强.体积分数6％二硫化碳作用于卵囊4h,抑制兔球虫卵囊孢子化效果最好.兔球虫卵囊耐药性与虫体大小相关,较大虫体对药物敏感性高.

6种杀虫剂对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化率及致病力的影响

为评价杀虫剂用于球虫卵囊消毒的可能性,检测了丁硫克百威、氯虫苯甲酰胺、茶核苏云菌、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、辛硫灭多威和甲基硫菌灵对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化率的影响。结果发现,氯虫苯甲酰胺0.3μL/m L处理组球虫孢子化率为61.25%,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐1、3μg/m L和30μg/m L处理组球虫孢子化率分别为60%、63.75%和65%,均显著低于生理盐水处理组。进一步利用氯虫苯甲酰胺(0.3μL/m L)和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(1μg/m L)处理球虫孢子化卵囊1 h和24 h并接种鸡,各处理组抗球虫指数(ACI)均在100以上,高于生理盐水处理对照组(ACI=53.5),其中以甲氨基阿维菌素苯甲酸盐处理1 h组ACI值最高,达129.7。表明氯虫苯甲酰胺和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐能显著降低柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化率及致病力,具有用于鸡球虫卵囊消毒的可能性。

斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶差异表达与疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的 探讨斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法 斯氏按蚊分吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组 ,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴 ,解剖后取吸硝喹糖水蚊第 1、2和 3天斯氏按蚊中肠 ,超声提取中肠蛋白 ,Bradford法检测血淋巴总蛋白浓度 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS -PAGE ,Western印迹电转移后检测前酚氧化酶。结果 四组血淋巴前酚氧化酶和用药后中肠前酚氧化酶均呈现一条阳性蛋白带 ,分子量分别均约 6 6kDa,与吸糖水组比较 ,吸正常小白鼠血组血淋巴前酚氧化酶表达增强 ,而感染后血淋巴前酚氧化酶表显著增强。硝喹诱导黑化后血淋巴前酚氧化酶表达水平呈逐日下调趋势 ,而硝喹诱导黑化过程中中肠前酚氧化酶量逐渐增加。结论 斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶参与疟原虫卵囊黑化反应。

按蚊中肠前酚氧化酶原与约氏疟原虫卵囊黑化的关系

目的 分析约氏疟原虫卵囊黑化期间按蚊中肠内前酚氧化酶原 (Prophenoloxidase ,PPO)的变化 ,探讨中肠PPO与疟原虫卵囊黑化的关系。 方法 解剖分离约氏疟原虫感染前和感染后 3、5、7、11和 15d斯氏与大劣按蚊中肠 ,匀浆后经SDS PAGE和转膜 ,以抗烟草天蛾PPO的抗体进行免疫印迹分析 ,并于感染后第 5d开始在镜下观察约氏疟原虫卵囊黑化情况 ,直至第 15d止。 结果 斯氏与大劣按蚊中肠在约氏疟原虫感染前和感染后的不同时期经免疫印迹均可检测到 1条分子质量约为 67ku的PPO阳性蛋白带 ,但感染后的PPO蛋白带比感染前明显增强 ,而且同时间点大劣按蚊中肠PPO蛋白带比斯氏按蚊明显 ,尤其在感染的后期大劣按蚊中肠PPO蛋白带明显比斯氏按蚊增强 ;在感染后 7d可见大劣按蚊中肠内发育的约氏疟原虫卵囊部分黑化 ,在 15d时可见疟原虫卵囊完全黑化。 结论 按蚊中肠PPO含量增加 ,尤其是长时间内维持在较高水平与约氏疟原虫卵囊黑化密切相关。

孵化液的盐类组成及盐度对巴里坤湖卤虫卵孵化率的影响

本文研究了孵化液的盐类组成及盐度对巴里坤湖卤虫卵孵化率的影响。结果表明．孵化的最适盐度为１０～５０‰；多种盐类的孵化液比单一盐类（Ｎａｃｌ，Ｎａ２ＳＯ４Ｎａ２ＣＯ３）的孵化液更适合于虫卵孵化；含Ｎａ２ＣＯ３的孵化液可得到较理想的孵化效果。

两种去休眠方式对尕海卤虫卵孵化率的影响

新采集的卤虫卵一般处于休眠状态 ,其孵化率很低 ,不能直接应用于育苗生产。不同产地的卤虫卵 ,其去休眠的方法也有所不同。在本研究中 ,我们对处于休眠状态的尕海卤虫卵 ,分别进行冷冻和双氧水处理 ,获得了这两种处理方法对尕海卤虫卵的去休眠效果。从中发现用 3%双氧水处理 5min可使尕海卤虫卵的孵化百分率由 2 5 87%提高到86 4 3%。

3株巨型艾美耳球虫免疫原性差异株未孢子化卵囊蛋白的SDS-PAGE分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE)比较分析了3株巨型艾美耳球虫免疫原性差异株未孢子化卵囊可溶性蛋白。结果显示,尽管所用的3株巨型艾美耳球虫在免疫原性上存在不同程度的差异,但3株巨型艾美耳球虫未孢子化卵囊可溶性蛋白的SDS-PAGE电泳图谱相似,至少有8条带,各带主次分明,其中有2条明显主带,分子量分别为42 000和39 000,还有3条较明显主带,分子量为36 000、26 000和22 900,其他可见带分别为109 800、86 900和62 800。结果表明SDS-PAGE电泳不能检测出E.maxima免疫原性差异株未孢子化卵囊可溶性蛋白的差异。

杀灭柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的温度及时间确定

为确定鸡球虫病活疫苗生产车间消毒的最佳温度和时间以节约能耗,柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊在不同温度下经不同时间的处理,再接种感染14日龄雏鸡,后代卵囊产量结果显示,60℃处理20 min或80℃处理10 min即可彻底杀灭孢子化卵囊,试验结果为鸡球虫病活疫苗生产车间消毒方式的确定提供了可靠的实验数据和设计基础。