绵羊粪便中毛圆线虫卵培养和感染性幼虫分离法的比较

目的 为比较毛圆线虫卵培养和感染性幼虫分离的几种方法。方法 采用培养中添加锯末,蛭石培养羊粪及分离幼虫用纱布袋浸泡、贝尔曼分虫法、广口罐分离法。结果 在绵羊粪便毛圆线虫卵的培养中,用锯末作为添加物较蛭石作添加物,幼虫的孵化率提高1.8倍,两者差异显著(P≤0.05);用纱布袋浸泡法进行粪便培养物中感染性幼虫的分离,较贝尔曼分虫法提高3.7倍;较广口罐分离法提高2.6倍。结论 以上方法分离的感染性幼虫再经蔗糖垫层离心提取后,可得到纯净、高密度的活性虫体。

体外受精-胚胎移植技术中精卵培养成功280枚的体会

近年来,体外受精-胚胎移植(ＩＶＦ-ＥＴ)等辅助生育技术逐渐在部分医院开展,成为治疗不孕症的重要手段。目前,世界上ＩＶＦ-ＥＴ的临床妊娠率一般在20%～25%左右。通过体外受精获得优质的可移植胚胎是取得移植成功的关键。笔者自1998年9月以来,对30个取卵周期中的381个卵?..

不需要血清共培养的受精卵培养系统的确立

机能性肽研究所确立了用无血清而且不需要体细胞的共培养的体外受精卵培养系统。目前与家畜改良事业团等正在利用牛未成熟卵体外成熟培养和体外受精后受精卵培养的无血清培养基进行评价试验及商品化探讨。开发血清和不需要共培养的无血清培养基为用于优良品种增产的牛受精卵移植技术的提高和普及做出了贡献。还期待着应用于人受精卵移植。 用于牛未成熟卵、受精卵培养的培养基目前需要添加牛胎儿血清并与卵丘/颗粒膜细胞共培养。但是,

地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体的研究

本文首次应用地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体标本，获得显著的效果。同时应用胎牛血精进行了比较，在两种血清中精子染色体形成率分别为１０２．４５％和５８．２８％，可供分析核型获得率分别为７６．１５％和３１．５１％，两组间存在非常显著的差异（Ｐ＜０．００１）．观察分析了６例供精者的４９８个精子核型，数目异常和结构异常发生率分别为０．８％和２．８％。本研究提示地鼠血清培养同种属卵，可促进卵细胞在体外的进一步成熟，并有助于人精原核的发育及其染色体的形成。

体外受精周期中不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响

目的:探讨常规体外受精周期中,不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2009年12月,在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规体外受精(in vitrofertilization,IVF)过程中为预防出现卵巢过度刺激综合征或因卵泡发育迟缓,改行未成熟卵体外培养(in vitro maturation,IVM)的91例患者,按促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用天数不同分为两组,A组使用Gn 5～7 d,共51例,B组使用Gn 8～13 d,共40例。比较两组的一般指标、Gn用量、体外成熟与胚胎发育及妊娠结局。结果:两组年龄、不孕年限、基础激素水平均差异无统计学意义(P>0.05)。Gn使用量A组明显低于B组,但获卵数A组明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。取卵日的雌激素以及黄体生成素水平A组明显高于B组,而孕激素水平则B组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组的卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率差异均无统计学意义(P>0.05)。两组的移植周期率、hCG阳性率、周期取消率、临床妊娠率、多胎妊娠率、自然流产率、异位妊娠率等临床结局差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:体外受精咛ヒ浦仓芷谥校煌被男蠭VM均能获得较好的临床结局,但Gn使用后5～7 d比8～13 d可以显著减少促排卵药物的用量,增加获卵数,降低治疗费用。

几个猪卵母细胞体外培养和受精的影响

比较了卵母细胞采集方法(剖解法,抽吸法,机械破碎法)、卵母细胞体外成熟培养方法以及猪卵泡液(PFF)质量浓度对猪卵母细胞培养和体外受精的影响.结果表明:采取剖解法采集猪卵母细胞、在猪卵母细胞成熟培养液中添加10%的PFF为最佳方法.微滴法与平皿法两种培养方法对猪卵母细胞培养和体外受精的影响无显著差异.

颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。

Leptin和ITS对牛卵母细胞体外培养和胚胎生产的影响

利用Leptin和ITS促进体外成熟和体外培养的牛卵母细胞的发育和质量,探讨提高胚胎体外生产的质量和数量的方法和技术。试验1:体外受精胚胎的培养液:添加BSA的KSOM中添加10mL/L浓度的ITS,结果使胚胎的桑椹胚率和囊胚率显著(P<0.05)高于培养液中不加ITS的对照组(桑椹胚率:43.48%vs29.07%,囊胚率:22.83%vs11.63%),卵裂率、正常分裂率和8细胞率与对照组差异不显著(P>0.05)。试验2:在卵母细胞的体外成熟液中添加10μg/L具有生物学活性的重组鸡Leptin成熟肽融合蛋白,Leptin处理组和对照组卵母细胞经体外成熟、受精后转入加有10mL/LITS的KSOM培养液进行体外培养。试验组卵裂率和正常分裂率极显著(P<0.01)高于对照组(88.96%vs66.81%和61.11%vs29.36%),8细胞率显著(P<0.05)高于对照组(84.84%vs69.57%)。Leptin处理的卵母细胞在受精后的桑椹胚率和囊胚率与对照组差异不显著,但最后的囊胚数量较对照组增加1倍多,分别为IVF卵母细胞总数的14.8%和6.4%(P<0.01)。这说明,添加Leptin对牛卵母细胞体外成熟有促进作用,可显著提高卵母细胞受精后早期胚胎的卵裂率、正常分裂率和8细胞率;加入ITS则能提高桑椹胚率和囊胚率;而Leptin和ITS的按顺序结合使用,则能大大增加体外生产胚胎的桑椹胚和囊胚的数量,从而提高胚胎体外生产的效率。

体外培养成熟技术对未成熟卵母细胞冻融的影响

目的:探索影响未成熟卵母细胞冻融技术的关键因素。方法:A组:来源于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中自愿捐献的多余的成熟卵母细胞(MⅡ期),共56个;B组:来源于手术切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞(GV或MⅠ),共67个。不同成熟时期卵母细胞经慢冻快融后培养和体外受精,观察其体外成熟、受精及胚胎发育情况。结果:A组与B组相比,两组冻融后的存活率有显著性差异(60.71%vs 77.61%,P<0.05);A组受精率高于B组,但两组比较无显著性差异(61.76%vs 50.00%,P>0.05);A组与B组相比,两组冻融后的卵裂率和优质胚胎率有显著性差异(76.19%vs 37.50%,47.62%vs 12.50%,P<0.05)。A组获2枚囊胚,而B组没有囊胚培养成功。结论:体外成熟培养技术可能是影响冻融后未成熟卵母细胞发育的关键因素。

未成熟卵体外培养成熟技术治疗后妊娠情况及结局分析

目的通过比较接受人类未成熟卵体外培养成熟(IVM)技术、常规体外受精技术(IVF)及单精子卵胞浆内注射技术(ICSI)治疗后妊娠的病例,分析妊娠和产科结局,从而评估IVM技术的安全性。方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心2004年1月～2007年12月接受IVM35例、IVF369例和ICSI298例治疗后妊娠的702例患者的临床资料。结果3组的多胎妊娠发生率、流产率、异位妊娠率比较,差异无显著性(P>0.05)。除外流产和继续妊娠外,IVM、IVF和ICSI治疗后出生婴儿数分别为34、321和243例,比较3组单胎妊娠和双胎妊娠的妊娠结局,差异无显著性(P>0.05)。结论与常规IVF、ICSI比较,IVM并不增加妊娠风险、产科并发症和新生儿异常的比例。

温度对狗卵母细胞体外成熟培养的影响

以兰州土狗为实验动物,研究不同的温度对兰州土狗卵母细胞的体外成熟培养的影响,结果表明,采用不同温度以微滴(上覆灭菌矿物油)培养卵母细胞,其体外成熟率差异极显著.

改良体外成熟培养——多囊卵巢综合征患者助孕治疗的有效替代方案

目的比较多囊卵巢综合征(PCOS)患者三种助孕方案的治疗效果。方法回顾性分析2010年1月至2011年5月在本院助孕的PCOS患者,按接受的助孕方式分为三组:A组(n=97),自然周期卵母细胞体外成熟培养(IVM);B组(n=33),降调节后短暂促性腺激素(Gn)刺激再IVM;C组(n=112),长方案降调节后常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕。比较三种助孕方案治疗效果。结果 B组和C组临床妊娠率无显著统计学差异(58.1%vs.57.7%,P>0.05),但均显著高于A组(32.5%)(P<0.05)。hCG日内膜厚度分别为A组(6.1±1.8)mm,B组(8.8±2.3)mm和C组(11.6±2.5)mm,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。A组未使用Gn,B组Gn用量为(578.1±314.4)IU,费用为(2,029.6士1204.8)元,C组Gn用量(1,751.1±692.8)IU,费用(5,768.4±2,100.8)元,三组比较均有统计学差异(P<0.05)。A、B组无卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生,C组重度OHSS发生率为4.5%。结论 IVM助孕可以避免OHSS发生,若降调节后短暂Gn刺激再IVM助孕,由于子宫内膜发育得到改善,可以获得与长方案相似的临床妊娠率,是PCOS患者的一个经济安全有效的助孕方式选择。

牛卵母细胞体外培养成熟前后及体外受精卵Alpabe的电镜细胞化学研究

本研究用Adams的改良柠檬酸铅法,对牛卵巢2—5mm卵泡中的细胞及体外培养成熟卵和体外受精卵进行了碱性磷酸酶(AIpcse)的电镜细胞化学研究、其Alpase活性有一定的变化规律。培养前的卵母细胞酶活性较强,主要定位于质膜及质膜下颗粒细胞突起膨大部和透明带上。体外培养成熟卯质膜上的酶活性明显减弱颗粒细胞突起已抽回。但是在增宽的卵周隙中有较多的酶反应产物。体外受精卯的酶活性很强,不仅表现在质膜上的酶活性增强,而且还定位于线粒体及一些空泡的膜和细胞基质中。可见,Alpase的活性随牛卵母细胞的成热过程减弱,随受精过程增强。

生长分化因子-9和卵母细胞体外成熟培养

人卵母细胞体外成熟培养(IVM)在辅助生殖技术中逐渐显示出重要的临床价值。但胚胎发育潜能差,妊娠率低,阻碍了其在临床上的广泛应用。某些细胞因子可能是卵母细胞体外培养的新研究途径,为研究生长分化因子-9(QDF-9)的现状及其在IVM中的作用,参考国内外近年来的研究,发现GDF-9能促进卵母细胞的正常生长及减数分裂,促进初级卵泡颗粒细胞继续生长、增殖,对卵泡的生长和分化起着重要作用,可能是卵母细胞体外培养研究的新途径。

牛卵母细胞体外培养成熟前后及体外受精卵SDH的电镜细胞化学研究

本文用Kerple-Fronius和Hajos的电镜细胞化学方法,对牛卵巢2-5mm卵泡中的卵母细胞及体外培养成熟卵和体外受精卵,进行了琥珀酸酶(SDH)定位及活性变化的研究.观察结果培养前的卵母细胞酶活性较明显,主要定位于线粒体膜上,内脊上也有少量的定位.体外培养成熟卵线粒体上的酶活性明显减弱.而体外受精卵在线粒体的膜及内脊上都有很强的酶活性定位.结果表明,牛卵母细胞的SDH活性随卵母细胞的成熟过程减弱,随受精过程增强. 本文还从超微结构角度上。

未成熟卵体外成熟培养成功妊娠1例

1病例资料患者,女,29岁,结婚3年,婚后3年不孕就诊。14岁初潮,月经稀发3～6个月,BMI 27.63 kg/m2。生殖激素测定：LH 18.54 mIU/ml,FSH 5.80 mIU/ml,E254.2 pg/ml。B超见子宫内膜5 mm/线性,双侧卵巢均有12个以上直径〈5 mm的小卵泡。OGTT（-）,IRT（＋）,我院行HSG提示双侧输卵管通畅,左侧输卵管上举。男方精液检查活率99.07%,密度28.47×106/ml。诊断：①原发不孕症;②多囊卵巢综合征;③胰岛素抵抗综合征;④肥胖症。

鸡球虫卵囊培养与培养液中含氧量关系的研究

一、材料与方法(一)球虫使用本教研室继代保存的毒害艾美球虫(E.necatrix)、堆形艾美球虫(E.acervulina)和巨型艾美球虫(E.maxima)。(二)雏鸡 1日龄来航,在消除球虫条件下饲养12天。

猪裸卵母细胞体外成熟方法研究

本试验旨在研究猪裸卵母细胞体外成熟的方法。试验设为裸卵组(对照组)、裸卵+卵丘细胞铺底共培养组、裸卵+卵丘细胞同时共培养组,检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率。结果表明:体外成熟培养44 h后,裸卵+卵丘细胞同时共培养组的存活率显著高于裸卵组(P<0.05);裸卵+卵丘细胞同时共培养组的第一极体排出率显著高于裸卵组(P<0.05),同时裸卵+卵丘细胞同时共培养组的卵裂率及囊胚率均高于裸卵组(P<0.05)。因此,选择裸卵+卵丘细胞同时共培养的方式对猪裸卵母细胞进行体外成熟。

未刺激的未成熟卵体外培养在多囊卵巢综合征患者中的应用

目的探讨未刺激的未成熟卵体外培养成熟(IVM)治疗难治性多囊卵巢综合征(PCOS)患者的疗效。方法2005年10月至2006年10月本中心对50例难治性PCOS患者65个周期的IVM治疗。结果9个周期取消,取消率为13.85%;65个周期共获卵1338枚,平均每周期20.6枚,培养48h后总成熟率为68.5%。正常受精率为70.2%,卵裂率为91.1%,每穿刺周期和移植周期的临床妊娠率分别为37.5%和40.6%,28例临床妊娠中,6例多胎,多胎妊娠率为21.4%。结论未经刺激的IVM技术用于难治性PCOS是一种有效的方法,可获得与常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)相似的临床妊娠率。

多囊卵巢综合征患者促排卵中不同干预措施预防卵巢过度刺激的效果

目的：探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者在体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期促排卵中运用不同干预措施预防卵巢过度刺激综合征（OHSS）的效果。方法：采用回顾性病例对照研究,将2011年1月至2013年12月本院124例行IVF-ET治疗并在超促排卵过程中出现OHSS倾向的PCOS患者分为3组：改行卵母细胞体外培养（IVM）组（n=46）,卵泡直径均≤12 mm时,停促性腺激素（Gn）,注射人绒毛膜促性腺激素（h CG）10 000 IU;h CG提前组（n=41）,继续促排卵,当有1个卵泡直径≥16 mm或至少3个卵泡直径≥14 mm时,注射h CG 4 000~6 500 IU;h CG减量组（n=37）,继续促排卵,当至少有1个卵泡的直径≥18 mm或2~3个卵泡的直径≥16 mm时,注射h CG 3 000~4 000 IU。比较各组实验室结果、临床结局及OHSS发生率。结果：改行IVM组总Gn用量及Gn天数显著少于其余2组,该组卵子成熟率、卵裂率、优质胚胎率均低于其余2组,差异有统计学意义（P〈0.05）。h CG提前组的h CG注射日≥14 mm卵泡数、优质胚胎率低于h CG减量组,其余各指标2组差异无统计学意义（P〈0.05）。改行IVM组无OHSS发生,另2组轻、中度OHSS发生率差异无统计学意义（P〉0.05）。3组临床妊娠率、胎儿活产率差异无统计学意义（P〈0.05）。结论：对于有OHSS倾向的PCOS患者,在IVF-ET周期促排卵过程中,可以采用改行IVM方案完全避免OHSS发生,而提前注射h CG与减量h CG方案均能避免重度OHSS的发生,在预防OHSS发生方面无明显差异。