卵巢癌组织长链非编码RNA PVT1表达及其靶基因生物信息学预测研究

目的检测长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1(lncRNA PVT1)在卵巢癌组织中的表达并预测其靶基因,进而对靶基因进行生物信息学分析。方法收集2019年6月至2019年12月于我院行手术治疗的125例卵巢癌患者的癌组织及其切缘正常组织。RT-PCR检测癌组织及其切缘正常组织lncRNA PVT1的表达;比较不同临床病理特征患者卵巢癌组织lncRNA PVT1表达;应用在线工具Annolnc2数据库、GEPIA2数据库、UALCAN数据库分别筛选出lncRNA PVT1靶基因取交集;采用DAVID数据库对筛选出的lncRNA PVT1靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果与切缘正常组织相比,癌组织中lncRNA PVT1相对表达水平升高(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低/未分化程度的卵巢癌患者癌组织中lncRNA PVT1的相对表达水平分别高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化程度的卵巢癌患者(P<0.05);lncRNA PVT1的靶基因有44个,GO功能分析发现靶基因功能主要富集于细胞周期调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、转录因子活性、赖氨酰氧化酶活性、细胞外基质、细胞质等;KEGG通路分析显示其参与的通路主要富集于癌症相关信号通路、转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、细胞外基质受体的相互作用、环磷酸鸟苷酸(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路等。结论lncRNA PVT1在卵巢癌组织中表达上调,其靶基因富集于细胞组分、分子功能和生物调节等多个生物学过程及TGF-β、cGMP-PKG等肿瘤相关信号通路上,lncRNA PVT1通过调控靶基因的表达在卵巢癌中发挥作用。

同源框基因A1表达与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探究同源框基因A1(HOXA1)表达与卵巢癌(OC)患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年11月至2017年11月乐山市妇幼保健院收治的112例进行手术治疗的OC患者作为研究对象。收集术中切除的OC组织(OC组)及癌旁组织(对照组),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HOXA1在OC组织、癌旁组织中的表达水平;采用免疫组化染色法检测OC患者组织中HOXA1的表达情况;经过5年随访,分析OC患者术后生存情况与HOXA1表达的关系;采用COX回归分析预后不良的因素。结果与对照组相比,OC组HOXA1的表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,OC组HOXA1阳性表达率显著升高(P<0.05)。HOXA1的表达水平与OC患者的肿瘤大小、肿瘤的分化程度、淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期有关(P<0.05)。HOXA1阳性表达组术后5年生存率低于阴性表达组(P<0.001)。淋巴结转移、HOXA1表达水平是影响OC患者术后预后不良的危险因素(P<0.05)。结论HOXA1在OC组织中的阳性表达率显著升高,与OC患者临床特征及术后5年生存情况具有一定的联系。

遗传性卵巢癌中乳腺癌抑制蛋白1/2和错配修复蛋白MutS同源物2基因突变的意义研究

目的研究遗传性卵巢癌中乳腺癌抑制蛋白1/2(BRCA1/2)和错配修复蛋白MutS同源物2(MSH2)基因突变意义。方法选取2019年6月至2023年6月于新余市人民医院就诊的13例家族遗传性卵巢癌患者及家系中5名Ⅰ代健康亲属、20名Ⅱ/Ⅲ代健康亲属作为研究对象。采集所有研究对象空腹静脉血5 ml,分离提取DNA行聚合酶链式反应扩增后直接测序比对,研究遗传性卵巢癌家族中有意义的错义突变基因。结果13例家族遗传性卵巢癌患者临床分期以Ⅲ期、组织分级以低-中分化、有淋巴结肿转移为主。13例患者基因测序显示,BRCA1基因发现突变6处中,无意义突变3处,新发现突变3处。新发现3处突变中3780A>G、5069A>G造成氨基酸变化,3326A>T突变造成Arg突变成终止密码子,共同存在突变为3326A>T。BRCA2基因测序检测出突变6处,无意义突变5处,其中共同存在突变为1342A>C。MSH2基因测序发现无意义突变2处。健康家系中,携带BRCA1基因3326A>T突变3例(12.00%),携带BRCA2基因1342A>C突变12例(48.00%),其余女性测序结果正常。结论BRCA1基因杂合突变3326A>T和BRCA2基因杂合突变1342A>C是遗传性卵巢癌家族发病的致病基因,可为临床早发现、早诊断、早治疗提供指导。

再生基因4蛋白、特异性蛋白1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨再生基因4(REG4)蛋白、特异性蛋白1(SP1)在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2019年7月~2022年7月期间收治的卵巢癌(OC)患者60例,术后提取卵巢癌变组织和癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测REG4和SP1蛋白的表达情况,对比卵巢癌变组织和癌旁组织中REG4蛋白和SP1蛋白阳性情况,分析REG4蛋白和SP1蛋白在卵巢癌组织中表达与临床病理参数的相关性。结果:卵巢癌变组织REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率为86.67%、71.67%高于癌旁正常组织的31.67%、16.67%(P<0.05)。不同年龄的OC患者的REG4和SP1阳性表达率无明显差异(P>0.05);病理分类中REG4阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、子宫内膜样腺癌、粘液性腺癌、透明细胞癌(P<0.05),SP1阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、粘液性腺癌、子宫内膜样腺癌、透明细胞癌(P<0.05);FIGOⅢ-Ⅳ期患者REG4和SP1阳性表达率高于FIGOⅠ-Ⅱ期患者阳性表达率(P<0.05);分化程度中REG4和SP1阳性表达率从高到低依次为低分化、中分化、高分化(P<0.05);淋巴转移患者REG4和SP1阳性表达率高于未淋巴转移患者阳性表达率(P<0.05)。结论:OC肿瘤组织中的REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织,并与病理分类、FIGO分期、分化程度、淋巴转移密切相关,对于OC的临床诊断及预后改善具有重要意义。

基于免疫组化SP法检测AEG-1在不同分化程度和分期的卵巢癌患者中的阳性表达及病理特点

目的探讨基于免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)在不同分化程度和分期的卵巢癌患者中的阳性表达及病理特点。方法选取2018年10月至2023年1月哈尔滨医科大学附属第三医院收治的97例卵巢癌患者作为研究对象,所有患者均行手术切除治疗,并经过病理检查确诊。采用免疫组化SP法检测卵巢病变组织肿瘤中的AEG-1表达情况,分析AEG-1阳性表达情况、染色强度评分、病理特点。结果染色强度评分为(3.14±0.76)分。卵巢癌组织中AEG-1阳性表达率为83.51%,AEG-1阳性信号未出现在肿瘤周边正常卵巢组织。黏液性卵巢癌和卵巢浆液性囊腺癌患者卵巢癌组织中AEG-1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌患者国际妇产科联盟(FIGO)各分期、淋巴结有无转移的阳性表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者年龄、各分化程度阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论AEG-1会促进卵巢癌的发生、发展,其可用于判断卵巢癌的恶性程度、疾病进展情况。

磷酸酶及张力蛋白同源物、AT丰富结合域1A基因及昼夜运动输出周期在子宫内膜异位症相关卵巢癌组织中的表达及诊断价值

目的 探讨子宫内膜异位症相关卵巢癌(EAOC)组织中磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)、AT丰富结合域1A基因(ARID1A)及昼夜运动输出周期(CLOCK)的表达,分析PTEN、ARID1A、CLOCK预测EAOC发生风险的价值。方法 回顾性收集2016年3月—2020年3月本院收治的30例EAOC患者的资料,并设为EAOC组;采集同期收治的30例未发生EAOC的单纯子宫内膜异位症(EMS)患者的资料,并设为非EAOC组。比较2组患者入院时病变组织的PTEN、ARID1A及CLOCK的表达,分析上述指标与EAOC发生的关系。结果 与非EAOC组相比,EAOC组患者癌组织的PTEN与ARID1A蛋白及基因相对表达量较低,CLOCK蛋白及基因相对表达较高,差异有统计学意义(P<0.01)。Logistic回归分析显示,PTEN、ARID1A及CLOCK基因异常表达可能与EAOC发生有关,其中PTEN和ARID1A是EAOC发生的保护因子,CLOCK是促进EAOC发生的风险因子(OR>1,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,癌组织的PTEN、ARID1A及CLOCK单独及联合预测EAOC发生的曲线下面积(AUC)分别为0.856、0.860、0.870、0.931。结论 未发生EAOC的单纯EMS及EAOC病变组织的PTEN、ARID1A及CLOCK表达存在显著差异;PTEN、ARID1A及CLOCK可能参与了EAOC发生;检测病变组织PTEN、ARID1A及CLOCK有助于临床诊断EAOC,且三者联合检测的诊断价值最高。

BRCA1、BRCA2在上皮性卵巢癌中的表达及与预后的关系

目的 探讨乳腺癌易感基因1(BRCA1)、乳腺癌易感基因2(BRCA2)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平,并分析其与预后的关系。方法 选取2019年1月—2023年6月南通市肿瘤医院收治的98例EOC患者,采集术中切除的新鲜癌组织和癌旁组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中BRCA1、BRCA2 mRNA表达情况,分析其与临床病理特征的关系,并以Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析其对EOC患者总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的影响。结果 EOC组织BRCA1、BRCA2 mRNA表达量、蛋白相对表达量均低于癌旁组织(P<0.05)。腹腔积液量≥500 mL、国际妇产科学联合会(FIGO)分期Ⅲ—Ⅳ期、有淋巴结转移患者的BRCA1、BRCA2 mRNA表达低于无腹腔积液和腹腔积液量<500 mL、FIGO分期Ⅰ—Ⅱ期及无淋巴结转移患者(P<0.05)。中位随访时间27(9~50)个月,随访率95.92%(4例失访),随访期间39例(39.80%)复发,26例(26.53%)死亡。Kaplan-Meier生存分析显示,BRCA1、BRCA2 mRNA高表达者累积生存率高于低表达者(P<0.05)。BRCA1、BRCA2 mRNA高表达者累积无进展生存率高于低表达者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示化疗≤6疗程、腹腔积液量≥500 mL、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期及BRCA1、BRCA2 mRNA低表达是影响EOC患者OS的独立危险因素(P<0.05)。术后残灶>2 cm、化疗≤6疗程、腹腔积液量≥500 mL及BRCA1、BRCA2 mRNA低表达是影响EOC患者PFS的独立危险因素(P<0.05)。结论 EOC癌变组织中BRCA1、BRCA2异常低表达,BRCA1、BRCA2 mRNA低表达与患者的临床病理特征关系密切,且影响患者PFS及OS。

内凝集蛋白1在卵巢癌中的生物信息学分析及体外抗增殖作用研究

目的分析内凝集蛋白1(ITLN1)在卵巢癌中的生物信息学信息及其体外抗增殖作用。方法2021年3月至2022年3月,采用基因表达数据库(GEO)来分析筛选卵巢癌组织中的差异基因。利用基因表达谱交互分析工具(GEPIA)来分析ITLN1在卵巢癌肿瘤组织与正常组织中的表达水平。利用癌症基因组图谱-基因型组织表达(TCGA-GTEx)数据制作受试者操作特征曲线(ROC曲线),利用Kaplan Meier-plotter分析ITLN1低表达或高与卵巢癌病人总生存率的曲线关系。利用LinkedOmics筛选ITLN1在卵巢癌中的相关基因,然后采用京都基因与基因组数据库(KEGG)进行通路富集分析。细胞实验分组:空载体对照组(vector),TLN1过表达载体组(TLN1),ITLN1+740 Y-P组。通过蛋白质印迹法检测ITLN1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)以及磷酸化Akt(p-Akt)在卵巢癌细胞中蛋白表达水平。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法与细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖。结果ITLN1在卵巢癌组织(0.45±0.17)和人卵巢癌细胞株A2780(0.72±0.08)、CAOV3(0.57±0.05)、SKOV3(0.44±0.08)中的表达量均显著降低(P<0.05)。并且,ITLN1在卵巢癌中具有诊断价值(ROC曲线下面积为0.88),ITLN1高表达组的卵巢癌病人总生存率高于ITLN1低表达组(风险比0.74,P<0.05)。ITLN1通过抑制PI3K/Akt信号通路从而降低卵巢癌细胞的增殖能力(0.55±0.02)。结论ITLN1表达水平可以成为卵巢癌病人的预后判断标志物,是潜在的卵巢癌治疗的靶点。这为卵巢癌的分子靶向治疗提供了新的理论基础。

LncRNA TUG1靶向AKT/mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖和转移的研究

目的探究长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)通过介导蛋白激酶B/磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路对卵巢癌细胞增殖和转移的影响及可能机制。方法收集112例行卵巢癌根治术患者的卵巢癌组织及癌旁组织,采用RT-PCR检测两组织、卵巢癌细胞(OC3,SKOV3,A2780,HO-8910)及人正常卵巢上皮细胞IOSE80中TUG1表达。选择SKOV3细胞并分为si-TUG1组(转染TUG1 shRNA)和NC组(转染空载体质粒),采用CCK8、流式细胞术、划痕实验检测2组细胞增殖水平、细胞周期及细胞转移能力,Western blot检测2组蛋白激酶B(AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-AKT、p-mTOR、细胞周期相关蛋白(Cyclin D1,Cyclin B1,CDK6)、转移相关蛋白(MMP-2,Snail)的相对表达量。结果RT-PCR检测结果显示,卵巢癌组织中TUG1表达高于癌旁组织(P<0.05),卵巢癌细胞OC3,SKOV3,A2780,HO-8910中TUG1表达均高于IOSE80细胞,且SKOV3中TUG1表达最高(P<0.05)。si-TUG1组细胞增殖水平、G_(2)/M期比例、细胞迁移距离均低于NC组,细胞G_(0)/G_(1)期比例高于NC组(P<0.05);si-TUG1组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、Cyclin D1、Cyclin B1、CDK6、MMP-2,Snail蛋白表达低于NC组(P<0.05)。结论下调lncRNA TUG1表达能降低卵巢癌细胞增殖、转移能力,这可能与其能抑制AKT/mTOR信号通路有关。

云南地区卵巢癌患者的基因同源重组缺陷状态和BRCA1/2基因突变频率及其临床意义

目的:采用基于中国人群单核苷酸多态性位点开发的同源重组缺陷(HRD)检测工具评估云南地区卵巢癌患者的HRD状态和BRCA1/2基因突变频率并探讨其临床意义。方法:共纳入2021年1月至2023年5月间在云南省肿瘤医院收治的卵巢癌患者248例,HRD状态采用基因组瘢痕评分法(GSS)(主要依据拷贝数的长度、类型、位置及基因组断片)或HRD评分法(杂合性缺失、端粒等位基因失衡及大片段移位等基因组不稳定事件的总和)进行评估,当组织样本的GSS≥50分或HRD评分≥42分者或检测到有害的BRCA1/2基因突变时HRD被定义为阳性。分析患者HRD状态与临床病理特征的关系。结果:248名卵巢癌患者中70.97%的患者HRD呈阳性,其中BRCA1/2基因突变率为30.65%。Ⅲ~Ⅵ期、高级别浆液腺癌的卵巢癌患者具有更高的HRD阳性率(均P<0.01),HRD评分更高的患者其合并其他基因突变的频率也越高(P<0.05)。HRD状态与卵巢癌的病理类型、临床分期和其他基因突变均有关联(均P<0.01)。结论:云南地区卵巢癌患者HRD阳性率较高,HRD阳性的卵巢癌患者可以从聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗中获得更大的收益。

卵巢癌患者血清LncRNA SNHG11和HIF-1α水平表达与癌组织血管生成拟态的关系研究

目的探究卵巢癌(ovarian cancer)患者血清长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)小核仁RNA宿主基因11(small nucleolar RNA host gene 11,SNHG11)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达与组织血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的关系。方法以2019年10月~2023年1月于唐山市妇幼保健院收治的116例卵巢癌患者为研究对象,根据是否形成VM将卵巢癌患者分为VM组(n=51)和无VM组(n=65),另选取同期进行健康体检者50例为对照组。采用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测卵巢癌患者及对照组血清LncRNA SNHG11和HIF-1α表达水平;Spearman相关性分析LncRNA SNHG11,HIF-1α与VM形成之间的关系;通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析LncRNA SNHG11,HIF-1α及联合检测对卵巢癌患者形成VM的诊断价值。结果与对照组相比,卵巢癌患者VM组和无VM组血清LncRNA SNHG11(3.01±0.88,2.21±0.68 vs 12±0.35),HIF-1α(2.16±0.67,1.60±0.44 vs 1.01±0.31)水平均显著升高(t=12.136,9.006;19.890,16.591),且VM组患者血清LncRNA SNHG11,HIF-1α水平均显著高于无VM组(t=8.957,8.595),差异有统计学意义(均P<0.05);LncRNA SNHG11,HIF-1α表达及VM的形成与年龄、组织类型无关(t=1.036,0.976,0.218;1.254,1.390,0.368,均P>0.05),而与肿瘤大小、FIGO分期、淋巴结转移及病理分级有关(t=5.351,5.186,13.264;5.465,5.227,10.898;6.063,6.016,5.374;4.030,5.871,5.509,均P<0.05);Spearman相关性分析显示,LncRNA SNHG11,HIF-1α与VM的生成均呈显著正相关(r=0.560,0.494,均P<0.05);ROC曲线结果显示,血清LncRNA SNHG11,HIF-1α单独诊断卵巢癌患者形成VM的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.860,0.824,其敏感度分别为80.4%,75.6%,特异度分别为58.9%,51.9%;两者联合诊断卵巢癌患者形成VM的AUC为0.941,其敏感度、特异度分别为92.2%,79.9%。结论LncRNA SNHG11和HIF-1α的异常表达与卵巢癌患者形成VM密切相关,两者可作为潜在判断VM的生物学指标。

LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌患者组织中的表达变化及临床意义

目的:探讨LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌患者组织中的表达变化及临床意义。方法:选择2021年1月—2023年12月我院收治的卵巢癌患者156例作为研究对象,将经手术摘除或剥除的卵巢癌组织和癌旁组织,通过RT-PCR技术,研究LncRNA PVT1与Foxo3a在卵巢癌、癌旁组织中的表达水平。采用受试者工作曲线(ROC)检测LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌中的诊断价值。采用χ2检验检测LncRNA PVT1、Foxo3a与临床病理特征的关系。结果:LncRNA PVT1、Foxo3a在卵巢癌中的表达与肿瘤的大小、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05),与患者的年龄、腹膜转移、组织类型无关(P>0.05)。卵巢癌组织LncRNA PVT1、Foxo3a表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。本次研究中以病理结果为金标准发现,LncRNA PVT1检查真阳性68例,真阴性为78例,Foxo3a检查真阳性为65例,真阴性为75例,联合检测真阳性为70例,真阴性为84例,由此可见,二者联合检测检查诊断情况高于LncRNA PVT1、Foxo3a单项检查,与金标准检出率较为相似。联合检测灵敏度、特异度和准确度均明显高于LncRNA PVT1、Foxo3a单项检测。结论:LncRNA PVT1与Foxo3a在卵巢癌中均呈显著高表达,二者在卵巢癌中具有潜在的临床应用价值。

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L(diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用。方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒 pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达。A2780-OVCA1细胞为实验组,A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测 OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株。A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell 滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P< 0.05)。结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用。

人OVCA1基因的克隆及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的克隆人的OVCA1基因并探讨其对卵巢癌细胞生长的影响。方法从健康人卵巢组织中提取总RNA,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增OVCA1基因并克隆。脂质体法将含有OVCA1质粒和空载体分别转染入A2780细胞,G418筛选稳定转染细胞。MTT法检测OVCA1对A2780细胞生长的影响。结果测序证实获得了OVCA1基因;过表达OVCA1的细胞与对照组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。结论得到了OVCA1基因克隆;OVCA1在体外明显抑制卵巢癌细胞系A2780的生长。

DLC1基因对人卵巢癌细胞OVCAR-3顺铂耐药性的影响

背景与目的:有研究发现,肝癌缺失基因1(DLC1)在多种肿瘤中低表达或不表达,其通过调节黏着斑激酶(FAK)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)等影响肿瘤细胞的凋亡。而对于DLC1在卵巢癌中的表达及作用等的研究甚少,本实验采用DLC1基因转染该基因表达缺失的人卵巢癌多药耐药细胞系OVCAR-3,观察转染前后该细胞对顺铂耐药性及FAK、p38MAPK的变化。方法:将OVCAR-3细胞分为3组,空白组为未经处理的OVCAR-3细胞,阴性对照组转染空质粒pEGFP-C3,实验组转染重组质粒pEGFP-C3-DLC1。RT-PCR和Western blot检测各组细胞中DLC1基因和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50),Western blot观察FAK、p38蛋白及其磷酸化水平的变化,流式细胞仪测定顺铂处理前后各组细胞凋亡率及周期分布改变。结果:DLC1基因和蛋白在实验组表达而空白对照组和阴性对照组均未见表达,实验组细胞与其他两组细胞相比,对顺铂的IC50较低(4.02 vs 4.99/4.90μmol/L,P<0.01),p-p38蛋白表达上升而p-FAK蛋白表达下降(3.02 vs 1.52/1.61,3.13 vs 9.03/8.99,P<0.01),顺铂处理前后实验组与其他两组细胞相比凋亡率增加(8.97%vs 1.81%/1.95%,30.68%vs 18.03%/20.33%,P<0.01),G1期细胞比例增加(65.80%vs 60.82%/59.80%,66.48%vs 55.42%/53.94%,P<0.05)。结论:转染DLC1基因可使OVCAR-3G1期细胞比例及凋亡率升高,对顺铂敏感性增加,该作用可能依赖于细胞内外源性DLC1基因的表达、p-FAK表达降低和p-p38表达增强。

ITSN1基因与卵巢癌化疗敏感性和预后的关系

目的:探究交叉蛋白1(ITSN1)基因在卵巢癌化疗敏感性中的作用和临床意义。方法:利用GEO、Kaplan-Meier数据库分析ITSN1在卵巢癌化疗敏感组和耐药组中的表达差异以及与化疗患者预后的关系。在此基础上,进一步分析ITSN1表达水平与信号通路的关系,构建ITSN1蛋白相互作用网络。结果:在GSE51373(t=3.691,P=0.001)和GSE148003(t=16.67,P=0.0000)数据集中化疗敏感组的ITSN1表达水平显著高于耐药组。生存分析结果显示,ITSN1高表达的卵巢癌铂类化疗患者的总生存期(OS,HR=0.85,95%CI:0.72~0.99,P=0.04)和无进展生存期(PFS,HR=0.85,95%CI:0.74~0.99,P=0.031)显著提高。在多西他赛化疗的卵巢癌患者中,ITSN1高表达患者的生存率明显改善。在不同组织学类型和组织病理学级别的铂类基础化疗卵巢癌患者中,ITSN1 mRNA高表达患者的预后更好。进一步分析ITSN1表达水平与信号通路的关系发现,ITSN1可能参与DNA修复通路,并且与DNA修复呈负相关(均P<0.05)。ITSN1的相互作用蛋白包括RAD18等。结论:ITSN1在卵巢癌铂类化疗敏感组中显著高表达且与铂类基础化疗患者预后呈显著正相关,并可能通过与RAD18相互作用参与调控DNA修复通路,进而提高铂类化疗敏感性。

石蜡切片中卵巢癌基因1第2外显子PCR-SSCP检测法建立

目的建立从石蜡切片中检测卵巢癌基因(OVCA)1第2外显子的聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)检测方法。方法从石蜡切片中提取基因组DNA;以基因组DNA为模板,PCR扩增OVCA1第2外显子;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物SSCP,银染显色。结果 PCR扩增片段经琼脂糖凝胶电泳检测可见条带位置正确,条带单一。对PCR扩增片段进行SSCP检测,可见清晰条带。结论成功建立了可用于石蜡切片中OVCA1第2外显子的PCR-SSCP检测方法。

槲皮素与FSCN1基因siRNA联合对卵巢癌生长抑制及免疫功能的影响研究

目的探讨槲皮素与FSCN1基因siRNA对卵巢癌细胞活力、凋亡及免疫功能的影响及机制。方法人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、NC组(转染阴性对照siRNA)、槲皮素组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染阴性对照siRNA)、si-FSCN1组(细胞转染靶向抑制FSCN1的siRNA)和槲皮素+si-FSCN1组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染靶向抑制FSCN1的siRNA),siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。各组细胞处理48 h,Western blotting检测FSCN1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bax和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 SKOV3细胞转染si-FSCN1后FSCN1蛋白表达明显降低,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。槲皮素组和si-FSCN1组细胞活力及β-catenin、cyclin D1和VEGF的蛋白表达均显著低于NC组,高于槲皮素+si-FSCN1组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于NC组,低于槲皮素+si-FSCN1组(P<0.05)。结论槲皮素或FSCN1基因siRNA均能抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制免疫抑制因子VEGF表达,联合使用效果更强,机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

卵巢上皮性癌组织中WAF1基因的表达

【目的】探讨卵巢上皮性癌组织中WAF1表达情况及其与肿瘤临床病理参数的关系。【方法】用RT-PCR和免疫组化分别检测30例正常卵巢、32例良性卵巢上皮性肿瘤和55例卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA和WAF1蛋白表达情况,并结合临床病理进行探讨。【结果】正常卵巢、良性卵巢上皮性肿瘤、卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA阳性表达率分别为73%、56%、40%(P=0.012),WAF1蛋白阳性表达率分别为80%、56%、36%(P=0.001),卵巢上皮性癌WAF1mRNA及其蛋白表达均低于其它两组。卵巢上皮性癌中WAF1mRNA表达与其蛋白表达呈正相关。WAF1蛋白低表达与卵巢癌FIGO分期晚有关(P=0.032),与年龄、组织学类型、病理分级、残余肿瘤大小无关(P>0.05),而WAF1mRNA与上述各项临床病理参数均无关(P>0.05)。【结论】与正常卵巢和良性卵巢肿瘤相比较,卵巢上皮性癌存在WAF1基因转录抑制及蛋白表达低下,WAF1下调可能与上皮性卵巢癌发生有关;晚期卵巢上皮性癌较早期者WAF1蛋白表达低,提示WAF1蛋白低表达与卵巢上皮性癌的恶性生物学行为有关。

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响

目的研究ERCC1基因表达与卵巢癌顺铂耐药的关系。构建携带ERCC1基因小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,观察RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响。方法RT-PCR方法检测COC1、COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达,基因重组技术构建携带ERCC1小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,脂质体法转染COC1/DDP细胞,RT-PCR及westernblot方法检测转染后细胞内ERCC1mRNA和蛋白的表达,MTT法检测转染后细胞对顺铂敏感性的改变。结果COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达明显高于COC1细胞。重组质粒转染后,COC1/DDP细胞中ERCC1mRNA和蛋白表达显著下调。转染后细胞对顺铂的敏感性显著增加。结论COC1/DDP中ERCC1基因表达增强与卵巢癌顺铂耐药相关。RNA干扰抑制ERCC1基因表达能增加卵巢癌耐药细胞COC1/DDP对顺铂的敏感性。