卵巢癌差异表达基因2氨基端PID结构域相互作用蛋白的筛选

目的筛选人卵巢癌差异表达基因2(differentiallyexpressedinovariancancer2,DOC-2)氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID(nDOC-2)的相互作用蛋白质,为研究DOC-2作用的信号通路提供线索。方法将含有人DOC-2氨基端PID结构域cDNA的片段插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母菌AH109并在其内表达,然后转化人胎脑cDNA文库,在营养缺陷培养基和X-α-半乳糖苷酶(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,PCR扩增出目的片段并测序,进行生物学分析,寻找与DOC-2氨基端PID结构域蛋白相互作用的蛋白质。结果经过扩增和筛选胎脑cDNA文库,排除假阳性克隆,得到21个侯选阳性克隆,其中3个克隆进行了序列分析,它们是Amyloidbeta(A4)precursor-likeprotein1(APLP1)、TGFβⅢ型受体的部分mRNA和protocadheringammasubfamilyC3(PCDHGC3)。结论获得的3个基因编码的蛋白可能参与了DOC-2的信号转导通路,为研究DOC-2在卵巢癌基因治疗中的作用提供了新的思路。

食管鳞癌中Twist、卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白的表达及与临床病理学特征、预后的关系

目的:探讨Twist、卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白(Differentially Expressed in Ovarian Cancer-2 Interaction Protein,DAB2IP)在食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)中的角色及意义。方法:用免疫组化检测72例ESCC、20例癌旁正常食管组织中Twist、DAB2IP基因的表达情况,分析不同组织中的表达差异及与临床病理特征、预后之间的关系,并对两者之间相关性进行探讨。结果:Twist在ESCC组织和癌旁正常食管组织中的表达率比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=10.602,P<0.05)。DAB2IP在ESCC组织和癌旁正常食管组织中的表达率比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=21.316,P<0.05)。Twist、DAB2IP表达均与浸润深度、淋巴结转移、临床分期、分化程度密切相关。相关分析显示在ESCC组织中,Twist、DAB2IP的表达呈负相关(r=-0.332,P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示DAB2IP表达与ESCC患者的生存期显著相关。多因素生存分析结果表明淋巴结转移情况和DAB2IP蛋白的表达是影响ESCC患者生存的独立预后因素(P均<0.05)。结论:Twist、DAB2IP两者在ESCC中的异常表达可能作为判断肿瘤侵袭转移的潜在指标。

果蝇zeste基因增强子同源基因2蛋白与p16蛋白在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨果蝇zeste基因增强子同源基因2(EZH2)蛋白与p16蛋白在卵巢癌中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测20例正常卵巢组织及50例卵巢癌组织中EZH2与p16蛋白表达情况,并分析两者的表达与卵巢癌患者临床特征的关系。结果与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织EZH2蛋白的表达阳性率显著升高,而p16蛋白的表达阳性率明显下降(P<0.05)。卵巢癌组织FZH2蛋白的表达阳性率随着肿瘤组织分级及国际妇产科协会(FIGO)分期的增加而升高(P<0.05),存在淋巴结转移者EZH2蛋白的表达阳性率较高(P<0.05);p16蛋白的表达阳性率随着肿瘤组织分级及FIGO分期的增加而降低(P<0.05),存在淋巴结转移者p16蛋白的表达阳性率较低(P<0.05)。卵巢癌组织中EZH2与p16表达呈负相关(P<0.01)。结论在卵巢癌组织中EZH2蛋白呈高表达,而p16蛋白表达降低,两者与肿瘤组织分级、FIGO分期及淋巴结转移有关,提示EZH2与p16可能参与卵巢癌的发生发展。

人卵巢癌组织中Rac-1蛋白和基质金属蛋白酶-2的表达及临床意义

目的 研究Rac 1蛋白和基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )在人卵巢癌中的表达 ,探讨其与卵巢癌组织学类型、临床分期、病理分化程度和转移的关系。方法 应用辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组织化学方法 (SP法 )对 5 0例卵巢癌、 18例良性卵巢肿瘤及 12例正常卵巢组织中的Rac 1蛋白和MMP 2蛋白进行检测。结果 Rac 1蛋白和MMP 2蛋白在卵巢癌中的表达明显比正常卵巢组织及良性病变高 ,差异有显著性意义 (均P <0 0 1)。Rac 1和MMP 2在不同组织学类型标本中表达差异无统计学意义 (均P >0 0 5 )。Rac 1及MMP 2在不同临床分期、分化程度和肿瘤转移的标本中的阳性表达率比较 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。Rac 1和MMP 2两者在肿瘤转移过程中密切相关 (r =0 74 0 ,P <0 0 1)。结论 Rac 1和MMP 2蛋白的表达与卵巢癌的临床分期、分化程度及转移密切相关 ;Rac 1/MMP 2通路在卵巢癌的侵袭转移中起着重要作用。

理冲生髓饮药物血清对卵巢癌细胞集落形成和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞株SKOV3集落形成和对Bcl-2蛋白表达的作用机理。方法:以不同剂量理冲生髓饮水煎剂灌饲大鼠,制备药物血清,培养SKOV3卵巢癌细胞株,采用SABC法检测SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达和显微镜观察集落形成情况。结果:理冲生髓饮血清组Bcl-2基因蛋白表达低于顺铂组和空白血清组(P<0.01);显微镜下可见集落内SKOV3细胞数量少,结构松散。结论:理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用,可阻断Bcl-2癌基因蛋白的表达,提示Bcl-2是一种重要的细胞生存基因。

HER-2/neu基因表达与卵巢上皮性癌的预后

【目的】探讨HER 2 /neu基因在卵巢上皮性癌中的表达水平及其与预后的关系。【方法】利用免疫组化检测 93例卵巢上皮性癌组织中HER 2 /neu基因表达水平 ,并结合临床病理及随访资料进行分析。【结果】HER 2 /neu基因主要为细胞膜及胞浆表达 ,阳性率为 4 4 .1%。其表达与临床分期、病理类型、组织学分级及残余灶直径等无相关性 ;但与预后相关。HER 2 /neu表达阴性组的 1,3,5年生存率分别为 90 .4 %、74 .0 %、5 4 .6 % ,弱阳性组分别为 81.1%、4 5 .4 %、2 7.9% ,强阳性组分别为 80 .0 %、2 0 .0 %、10 .0 %。差异有显著性 (P =0 .0 0 2 8)。COX模型多因素分析提示 :HER 2 /neu表达水平是影响卵巢癌预后的独立因素 (P =0 .0 0 5 )。【结论】HER 2 /neu基因表达水平可作为预测卵巢上皮性癌预后的可靠指标。

不同临床预后患者胃癌组织中DAB2IP表达的差异

目的探讨胃癌中人DOC-2/DAB-2交互蛋白(DOC-2/DAB-2 interaction protein,DAB2IP)的表达与临床预后生存时间的关系。方法收集82例正常胃黏膜及胃癌组织,采用免疫组化方法进行蛋白检测,对随访资料进行Kaplan-Meier生存分析和COX回归分析。结果 DAB2IP在正常胃黏膜组织中多以强阳性表达;在胃癌组织中阳性表达较少,多以弱阳性或阴性为主;DAB2IP在胃癌组织中的阳性评分低于正常黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。DAB2IP阳性表达的胃癌患者中位生存时间为40.8个月,明显长于阴性表达患者的中位生存时间(33.7个月),差异有统计学意义(P<0.05)。COX多因素回归分析显示,较低的DAB2IP表达水平和较高的TNM分期是胃癌预后生存时间的独立危险因素(P<0.05)。结论 DAB2IP下调可能在胃癌的发生、发展中起一定的作用,对预测胃癌患者的预后生存时间具有一定的意义。

胃癌癌旁组织中p53、p16和bcl-2蛋白表达及其关系的探讨

目的：研究胃癌癌旁组织中抑癌基因和抗凋亡基因蛋白的表达及其内在关系。方法：胃镜及外科手术中取４０例 胃癌患者的癌组织和癌旁组织各两块，石蜡包埋，切片ＨＥ染色作病理及免疫组织化学检查ｐ５３、ｐ１６和ｂｃｌ－２基因蛋 白表达。结果：ｐ５３在胃癌组织中阳性表达率４２．５％，癌旁组织１２．５％，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），其表达强度也有显著 性差异（Ｐ＜０．０１）；ｐ１６在癌旁组织阳性表达率为６０％，显著高于胃癌组织３７．５％（Ｐ＜０．０５），其表达强度也有显著性差 异（Ｐ＜０．０５）；ｂｃｌ－２在胃癌组织和癌旁组织阳性表达率无显著性差异（６７．５％比４７．５％，Ｐ＞０．０５），其表达强度也无显 著性差异（ｐ＞０．０５）。ｐ５３与ｐ１６、ｐ１６与ｂｃｌ－２表达之间均无显著相关性（Ｐ＞０．０５），而ｐ５３与ｂｃｌ－２表达之间存在显著相 关性（Ｐ＜０．０５）。结论：在胃癌发生发展过程中，抑癌基因（ｐ５３、ｐ１６）４抗凋亡基因（ｂｃｌ－２）之间存在既独立又协同的作 用。

MiR-449a和PLAGL2在卵巢癌中的表达关系及临床意义

目的探讨MiR-449a、PLAGL2在卵巢癌中的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法选取笔者医院卵巢癌患者136例,酶联免疫吸附法及免疫组化法测定卵巢癌组织及正常卵巢组织中MiR-449a、PLAGL2蛋白的表达水平,分析其与临床病理参数和预后的关系。结果卵巢癌组MiR-449a蛋白表达水平低于癌旁组,PLAGL2蛋白表达水平高于癌旁组(t=113. 821、88. 774,P <0. 01);卵巢癌组MiR-449a阳性率低于癌旁组、PLAGL2阳性率高于癌旁组(χ~2=18. 708、151. 786,P <0. 01); MiR-449a、PLAGL2蛋白表达与肿瘤最大径、病理学分级、TMN分期、浸润深度、淋巴血管间隙浸润、淋巴结转移、复发相关性明显,且肿瘤最大径≥5cm、病理学分期越高、TMN分期越高、浸润深度越深、有淋巴血管间隙浸润、有淋巴结转移、有复发,MiR-449a蛋白阳性表达率越低、PLAGL2蛋白阳性表达率越高(P <0. 01); MiR-449a阳性组3年生存率及生存期均明显高于MiR-449a阴性组,PLAGL2阴性组3年生存率及生存期均明显高于PLAGL2阳性组(χ~2=41. 666、37. 816、Z=17. 980、18. 092,P <0. 01)。结论 MiR-449a蛋白在卵巢癌组织中表达量降低,PLAGL2蛋白表达量增加; MiR-449a蛋白高表达的卵巢癌患者能获得较好的预后,PLAGL2蛋白低表达能获得较好的预后。

BRCA2在卵巢癌中的表达及其与临床病理的相关性

目的比较乳腺癌易感基因2（breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2）在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理因素的相关性,分析其作为早期卵巢癌诊断基因的可行性。方法采用荧光定量PCR的方法研究BRCA2 RNA在卵巢上皮癌、正常卵巢组织中的表达差异,并进一步应用western-blotting的方法检测BRCA2蛋白的表达。结果其BRCA2 RNA在卵巢癌组织中的表达量低于正常卵巢组织（P〈0.05）;BRCA2 RNA在临床Ⅲ~Ⅳ期的表达量低于临床Ⅰ~Ⅱ期（P〈0.05）。BRCA2 RNA与CA125在卵巢癌中的表达无相关性（P〈0.05）。BRCA2蛋白在卵巢癌中的表达量同样低于正常卵巢组织（P〈0.05）。结论 BRCA2在卵巢癌的发生发展中起着一定作用,其与CA125的联合监测有望提高卵巢癌的阳性诊断率。

基于基因表达谱的卵巢癌相关基因筛选及预后价值分析

目的本研究旨在筛选出卵巢癌相关基因,分析其参与的信号通路及与卵巢癌预后的相关性。方法利用GEO数据库中GSE14407及GSE38666数据集筛选出正常卵巢组织与卵巢癌组织中差异表达基因。DAVID数据库对差异基因进行功能分析和信号通路富集,STRING和Cytoscape构建出蛋白互作网络图。通过Kaplan-Meier在线工具分析关键基因与卵巢癌预后的相关性。结果本研究挖掘出1471个差异表达基因,基因富集后发现主要涉及肿瘤细胞的增殖和迁移。从蛋白互作网络图中筛选出了96个相关基因,其中CLDN6、COL23A1、KIFC2、ECT2、LPAR3、PTGER1与卵巢癌患者的生存预后具有显著的相关性。结论本研究新挖掘出6个与卵巢癌密切相关基因,这些基因有助于进一步研究卵巢癌发病的分子机制,并可能作为新的治疗靶点和诊断标志物。

抗体-白细胞介素2融合蛋白183B2scFv-Interleukin2的表达及活性检测

目的在哺乳动物细胞内表达抗体细胞因子融合蛋白183B2scFv Interleukin2,为卵巢癌提供一种新的治疗方法。方法通过基因工程的方法将两段基因IL2和183B2scFv开放读框的编码序列克隆在一起,在CHO K1细胞内人巨细胞病毒启动子的作用下表达可溶性融合蛋白,并检测其对肿瘤细胞的靶向性。结果采用哺乳动物细胞表达,系统表达的这种小分子融合蛋白,既保留了与卵巢癌OC183B2抗原结合的特性,又保持了IL2的生物学活性。融合蛋白在细胞培养上清中保持稳定,更重要的是融合蛋白将IL2靶向表达OC183B2抗原的卵巢癌细胞表面化的同时,又能刺激IL2依赖细胞株的增殖,从而诱发局部有效的抗肿瘤反应。既提高了融合蛋白的穿透组织能力和肿瘤组织部位的浓聚,又避免了大剂量全身应用细胞因子引起的副作用。结论真核表达系统表达的融合蛋白具有很好的生物学活性。

DAB2IP基因沉默引起的前列腺癌细胞辐射耐受与ATM的相关性研究

实验以具有不同卵巢癌差异表达基因2相互作用蛋白(Disabled homolog 2 interaction protein,DAB2IP)表达的前列腺癌细胞为研究对象,讨论DNA损伤修复关键蛋白-共济失调毛细血管扩张症基因突变(Ataxia-telangiectasia mutated,ATM)在DAB2IP影响肿瘤细胞放射敏感性中的作用。研究比较了单纯γ-射线(0、2、4、6、8 Gy)和ATM特异性抑制剂-KU55933(10μmol/L)联合射线作用后,不同DAB2IP表达的前列腺癌细胞集落形成率的差异;采用q RT-PCR及Western blot方法分别检测了2 Gy和KU55933+2 Gy照射后,细胞内ATM在翻译转录、蛋白表达和磷酸化水平的变化。结果显示,同一吸收剂量下,DAB2IP基因沉默的前列腺癌细胞,集落形成能力明显高于DAB2IP阳性表达的对照组细胞,并伴随着ATM合成与磷酸化水平的升高。KU55933通过抑制ATM的翻译转录与蛋白磷酸化,可显著增强射线对低表达DAB2IP的辐射耐受细胞的损伤作用。提示ATM是DAB2IP基因沉默引起肿瘤细胞辐射耐受的关键分子,可以ATM为靶点筛选药物,提高DAB2IP基因缺陷的肿瘤患者对放射治疗的敏感性。

端粒酶和c-erbB-2在卵巢上皮性肿瘤中的表达

目的 研究端粒酶的催化亚基hTERT (humantelomerasereversetranscriptase)和癌蛋白c-erbB - 2在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法 采用原位杂交法检测卵巢恶性 (35例 )、临界恶性 (low -malignant -potentialtumor,LMP) (8例 )和良性 (2 0例 )上皮源性肿瘤hTERT基因表达 ,同时用免疫组化检测癌蛋白c -erbB- 2的表达。结果 6 3例卵巢上皮性肿瘤中 ,良性肿瘤hTERT基因表达阳性率 5 % (1 2 0 ) ,临界恶性肿瘤阳性率38% (3 8) ,恶性肿瘤阳性率 74 % (2 6 35 ) ,良性、临界恶性和恶性肿瘤间hTERT的表达差异存在着显著性 (P<0 0 5 ) ;良性肿瘤c -erbB - 2均为阴性表达 ,临界恶性肿瘤表达率 75 % (6 8) ,恶性肿瘤表达率 5 7% (2 0 35 ) ,良性分别和临界恶性、恶性肿瘤间c -erbB - 2癌蛋白的表达差异存在着显著性 (P <0 0 1)。hTERT基因表达与c-erbB - 2癌蛋白表达有弱正相关性 (r=0 2 98,P <0 0 5 )。结论 hTERT基因的表达与卵巢癌恶性程度正相关 ;c-erbB - 2蛋白在卵巢良性肿瘤中不表达 ,在卵巢临界恶性和恶性肿瘤中表达率明显增高。

DAB2IP基因沉默引起膀胱癌细胞辐射耐受与化疗抵抗

目的观察DAB2IP基因对膀胱癌细胞放化疗敏感性的影响。方法 RNA干扰建立DAB2IP表达抑制的膀胱癌细胞,克隆形成实验比较不同DAB2IP表达的细胞对射线放射敏感性的差异,噻唑蓝方法检测不同DAB2IP表达的细胞对常用化疗药物敏感性的变化。结果 DAB2IP基因沉默造成细胞对射线与化疗药物均出现耐受。结论 DAB2IP可能用作预测膀胱癌患者放射或化学治疗预后的分子标志物。

蛋白激酶CK2β及抑癌基因蛋白p53在卵巢癌组织中的表达

目的探讨蛋白激酶CK2β及抑癌基因蛋白p53在卵巢癌组织中的表达情况。方法选取2012年1月-2015年1月武汉市第一医院收治的卵巢肿瘤患者148例为研究对象,其中卵巢癌患者108例、良性肿瘤患者20例、交界性肿瘤患者20例,采用免疫组化法检测患者CK2β及p53在肿瘤中的阳性表达情况,分析两者表达方面的差异及其与卵巢癌患者预后的关系。结果CK2β和p53在卵巢癌患者组织中的表达均明显高于良性肿瘤及交界性肿瘤,差异均有统计学意义(P<0.05);CK2β和p53的表达均与患者的临床分期、组织分化程度、CA125水平及化疗敏感性显著相关(均P<0.05)。结论 CK2β及p53蛋白阳性表达与卵巢癌的发生发展存在密切的联系。

口腔鳞状细胞癌患者预后相关基因标志物的生物信息学分析

目的通过生物信息分析方法筛选口腔鳞状细胞癌与癌旁组织之间的差异表达基因,初步确定潜在生物标志物。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中下载口腔鳞状细胞癌相关芯片数据集GSE23558、GSE37991、GSE30784,利用GEO在线分析工具筛选差异表达基因,并对其进行基因本体、京都基因与基因组百科全书分析。利用STRING在线数据库,构建差异基因蛋白互作(protein⁃protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape筛选关键基因。进而使用Kaplan Meier在线软件对差异表达基因进行预后分析,并使用GEPIA(http://gepia.cancer⁃pku.cn/)验证其表达情况。结果共筛选出212个差异表达基因,进一步分析发现16个核心基因,其中与预后相关的核心基因包括:极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)、极光激酶B(aurora kinase B,AURKB)、细胞凋亡抑制因子5(baculoviral IAP repeat containing 5,BIRC5)、细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)、E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)、泛素样含PHD和环指域蛋白1(ubiquitin⁃like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1),这些关键基因与癌旁组织相比在口腔鳞状细胞癌组织呈高表达并且患者生存时间均较短,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论AURKA、AURKB、BIRC5、CDC6、E2F7和UHRF1可作为口腔鳞状细胞癌患者预后潜在的标志物。

EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响

目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzestehomolog 2,EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异。人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株。RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染EZH2 shRNA后的A2780/DDP细胞,EZH2的mRNA及蛋白水平的表达量分别下降(83.66±5.65)%和(77.57±3.90)%(P<0.001),其对DDP的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值下降(61.33±11.40)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2基因在A2780/DDP细胞中的表达明显升高,沉默EZH2基因能有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。

一种新的卵巢癌生物学标志物

在妇科肿瘤中，卵巢癌是病死率最高的，因为其缺乏有效的筛选标志物。英国伦敦大学Wolfson生物医学研究所Adib TR等利用含有12000个基因的寡核苷酸微阵列（oligonucleotide microarrays)技术比较了正常卵巢组织和Ⅲ期浆液性腺癌及相同病人网膜转移癌的基因表达谱。他们发现：同一病人的原发癌和转移癌基因表达谱在实质上是相似的。